中文字幕一级黄色A级片|免费特级毛片。性欧美日本|偷拍亚洲欧美1级片|成人黄色中文小说网|A级片视频在线观看|老司机网址在线观看|免费一级无码激情黄所|欧美三级片区精品网站999|日韩av超碰日本青青草成人|一区二区亚洲AV婷婷

目前對轉(zhuǎn)基因食品的檢測按原理主要分為針對外源蛋白質(zhì)和針對外源DNA兩種鑒定技術(shù)。

外源蛋白質(zhì)的測定

即從蛋白質(zhì)水平對轉(zhuǎn)基因食品進行檢測，實際應用中主要采用的是免疫學檢測法，即Western雜交、酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)和試紙條法。免疫學檢測法可以檢測具有抗原性的蛋白質(zhì)類表達產(chǎn)物的存在，它是通過抗原抗體特異反應來實現(xiàn)的。

【W(wǎng)estern雜交】Western雜交是將蛋白質(zhì)電泳、印跡、免疫測定融為一體的特異蛋白質(zhì)檢測方法，具有很高的靈敏性，可以從植物細胞總蛋白中檢測出50ng的特異蛋白。Western雜交檢測的關(guān)鍵是抗體的制備。

【酶聯(lián)免疫吸附法】ELISA建立了固-液抗原抗體反應體系，并采用酶標記，抗體與抗原的結(jié)合通過酶反應來檢測。由于酶的放大作用，使測定的靈敏度極高，可檢測出1pg的目標物，同時酶反應還具有很強的特異性。它的檢測原理和過程基本與Western雜交檢測相似。

【試紙條法】此法是在最近15年發(fā)展起來的，之前主要用于醫(yī)學領域。與ELISA相似，這種測定方法是將特異的抗體交聯(lián)到試紙條上和有顏色的物質(zhì)上，當紙上抗體和特異抗原結(jié)合后，再和帶有顏色的特異抗體進行反應，就形成了帶有顏色的三明治結(jié)構(gòu)，并且固定在試紙條上，如果沒有抗原，則沒有顏色。因此整個操作相對簡單一些。目前市場上也出現(xiàn)了一些此類測試的試紙盒。

外源蛋白質(zhì)檢測法快速，具有一定的靈敏度，也能進行半定量，尤其是試紙條法，不需要特殊的儀器設備，適用于現(xiàn)場檢驗或初篩。但外源蛋白質(zhì)檢測法有三方面的局限性：(1)由于抗原抗體反應的專一性，每種轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品都要開發(fā)和建立專門的檢測試劑和方法，而轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品種類繁多，要建立所有轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品的蛋白質(zhì)檢測法工作量很大;(2)對于加工過的轉(zhuǎn)基因食品，其蛋白質(zhì)很容易被破壞，從而影響檢測結(jié)果的準確行;(3)有些插入基因還具有表達部位特異性，這些金銀的表達并不像DNA那樣存在轉(zhuǎn)基因作物的任何部位，甚至有的轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品的插入基因根本不表達或表達量很低。這些都會影響檢測結(jié)果。

外源DNA的檢測　　

目前對于外源基因的檢測主要是通過對轉(zhuǎn)入的外源基因進行PCR擴增，然后進行紫外或熒光檢測。PCR技術(shù)全稱“聚合酶鏈反應技術(shù)”，是一種在體外由引物引導的DNA聚合酶催化的聚合反應，能在短時間內(nèi)準確地將目的序列大量復制。在轉(zhuǎn)基因食品檢測方面，主要是用于從DNA即基因水平來鑒定被測食品。由于它的快速、靈敏、費用低、檢測僅需微量的DNA并且可以同時檢測多個樣品，正成為這一領域日趨成熟的方法之一。

【定性PCR】轉(zhuǎn)基因食品重組DNA的基本機構(gòu)包括啟動子、目的基因、終止子和標記基因。由于目的基因種類繁多，所以先用轉(zhuǎn)基因食品最常用的轉(zhuǎn)錄啟動子CaMV35S、轉(zhuǎn)錄終止子NOS及抗生素抗體基因NPTII三個序列來設計引物進行PCR反應，對結(jié)果陽性者可再檢測目的基因。

【定量PCR】PCR反應具有高度特異性和敏感性，但對實驗技術(shù)的要求很高，其結(jié)果易受許多因素的干擾而產(chǎn)生誤差，一般PCR只用作轉(zhuǎn)基因食品的定性篩選檢測。針對所存在的問題，研究人員在實驗設計中引入內(nèi)部參照反應，以消除檢測時的干擾，并與已知含量的序列GMO標準樣的PCR結(jié)果進行比較，從而可以半定量地檢測待測樣品的GMO含量。

近年來定量競爭PCR和實時熒光定量PCR都已用于轉(zhuǎn)基因食品的定量檢測。競爭性定量的基本原理是用人工設計的競爭模板以不同稀釋度與標本共同擴增，以競爭模板的稀釋度和結(jié)果做標準曲線，判斷標本中待測核酸的量。

實時熒光PCR技術(shù)是指在PCR反應體系中加入熒光基團，利用熒光信號積累實時檢測整個PCR進程，最后通過標準曲線對未知模板進行定量的方法。這種檢測方法采用獨特全封閉反應，只須在加樣時打開一次蓋子，減少了污染，具有高度的靈敏性。

【PCR-ELISA】這是一種將PCR的高效性與ELISA高特異性結(jié)合在一起的檢測方法，它利用地高辛或生物素等標記引物，將PCR擴增產(chǎn)物與固相板上特異的探針結(jié)合，再加入抗地高辛或生物素的酶標抗體-辣根過氧化物酶結(jié)合物，最后使底物顯色，在酶標儀上讀取數(shù)值。利用PCR-ELISA法對轉(zhuǎn)基因大豆檢測，靈敏度比歐盟推薦的PCR方法高5-10倍。它快速方便，避免了有毒物質(zhì)EB的使用，適合大批量自動檢測。