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2015年4月22日，臺(tái)灣地區(qū)“衛(wèi)生福利部”發(fā)布部授食字第1041900545號(hào)公告，制定“嬰兒谷物類(lèi)輔助食品中黃曲毒素B1之檢驗(yàn)方法（MOHWT0017.00）”，并自即日生效。同日，部授食字第1041900539號(hào)公告廢止“食品中黃曲毒素之檢驗(yàn)方法－液狀乳中黃曲毒素M1及M2之檢驗(yàn)”。

嬰兒谷物類(lèi)輔助食品中黃曲毒素B1之檢驗(yàn)方法

1 . 適用范圍：本檢驗(yàn)方法適用于嬰兒谷物類(lèi)輔助食品中黃曲毒素B1之檢驗(yàn)。

2 . 檢驗(yàn)方法：檢體經(jīng)萃取及凈化后，以高效液相層析儀（high performance liquid chromatograph, HPLC）分析之方法。

2.1. 裝置：

2.1.1. 高效液相層析儀：

2.1.1.1. 檢出器：熒光檢出器（Fluorescence detector）。

2.1.1.2. 層析管：Cosmosil 5C18-AR，5 µm，內(nèi)徑4.6 mm×25 cm，或同級(jí)品。

2.1.1.3. 光化學(xué)反應(yīng)器：Knitted Reactor Coils (KRC) 25-25，或同級(jí)品。

2.1.2. 均質(zhì)機(jī)（Homogenizer）：可達(dá)15000 rpm以上并適用有機(jī)溶劑者。

2.1.3. 粉碎機(jī)（Grinder）。

2.1.4. 氮?dú)庹舭l(fā)裝置（Nitrogen evaporator）。

2.2. 試藥：氯化鈉采用試藥特級(jí)；甲醇采用液相層析級(jí)；去離子水（比電阻于25℃可達(dá)18 MΩ．cm以上）；黃曲毒素B1對(duì)照用標(biāo)準(zhǔn)品。

2.3. 器具及材料：

2.3.1. 離心管：50 mL，PP材質(zhì)。

2.3.2. 容量瓶：1 mL及10 mL，褐色。

2.3.3. 濾膜：孔徑0.22 μm，Nylon材質(zhì)。

2.3.4. 濾紙：Whatman No.1，直徑11 cm，或同級(jí)品。

2.3.5. 玻璃纖維濾紙（Glass microfibre filters）：直徑9 cm。

2.3.6. 塑料針筒：1 mL及10 mL。

2.3.7. 免疫親和性管柱（Immunoaffinity column）：采用內(nèi)含對(duì)黃曲毒素B1、B2、G1及G2具專(zhuān)一性單株抗體之AflaTest-P管柱，或同級(jí)品。

2.3.8. 針筒過(guò)濾器（Syringe filter）：濾膜孔徑0.22 μm，PTFE材質(zhì)。

2.4. 試劑之調(diào)制：

2.4.1. 50%甲醇溶液

      　　取甲醇與去離子水以50：50（v/v）之比例混勻。

2.4.2. 80%甲醇溶液

      　　取甲醇與去離子水以80：20（v/v）之比例混勻。

2.5. 移動(dòng)相溶液之調(diào)制：

    　　取甲醇與去離子水以45：55（v/v）之比例混勻后，經(jīng)濾膜過(guò)濾，取濾液供作移動(dòng)相溶液。

2.6. 標(biāo)準(zhǔn)溶液之配制：

     　　精確量取黃曲毒素B1對(duì)照用標(biāo)準(zhǔn)品約1 mg，精確稱(chēng)定，以甲醇稀釋并定容至10 mL，作為標(biāo)準(zhǔn)原液。臨用時(shí)取適量標(biāo)準(zhǔn)原液，以50%甲醇溶液稀釋至0.05～25 ng/mL，供作標(biāo)準(zhǔn)溶液。

2.7. 檢液之調(diào)制：

      　　將檢體磨碎混勻后，取約25 g，精確稱(chēng)定，置于均質(zhì)機(jī)中，加入氯化鈉5 g及80%甲醇溶液125 mL，以15000 rpm均質(zhì)2分鐘，經(jīng)濾紙過(guò)濾。精確量取濾液10 mL，加去離子水40 mL混勻，以玻璃纖維濾紙過(guò)濾。精確量取濾液25 mL，注入免疫親和管柱（流速控制1滴／秒），待濾液完全通過(guò)管柱后，以去離子水10 mL流洗2次（流速控制1滴／秒），棄流出液，再以甲醇1 mL沖提（流速控制1滴／秒），收集沖提液，于40℃水浴中以氮?dú)鉂饪s至干，再以50%甲醇溶液定容至1 mL，經(jīng)針筒過(guò)濾器過(guò)濾，供作檢液。

2.8. 鑒別試驗(yàn)及含量測(cè)定：

     　　精確量取檢液及標(biāo)準(zhǔn)溶液各50 μL，分別注入高效液相層析儀中，依下列條件進(jìn)行液相層析，就檢液與標(biāo)準(zhǔn)溶液所得波峰之滯留時(shí)間比較鑒別之，并依下列計(jì)算式求出檢體中黃曲毒素B1之含量（ppb）：

    　　　　檢體中黃曲毒素B1含量（ppb）=

    　　C：由標(biāo)準(zhǔn)曲線求得檢液中黃曲毒素B1之濃度（ng/mL）

    　　V：檢體最后定容之體積（mL）

    　　F：稀釋倍數(shù)（25）

    　　M：取樣分析檢體之重量（g）

    　　高效液相層析測(cè)定條件：

    　　　　層析管柱：Cosmosil 5C18-AR，5 µm，內(nèi)徑4.6 mm×25 cm。

    　　　　光化學(xué)反應(yīng)器：KRC 25-25。

    　　　　熒光檢出器：激發(fā)波長(zhǎng)360 nm，發(fā)射波長(zhǎng)440 nm。

    　　　　移動(dòng)相溶液：依2.5.節(jié)所調(diào)制之溶液。

    　　　　移動(dòng)相流速：1.0 mL/min。

 

附注：1.   本檢驗(yàn)方法之定量極限為0.05 ppb。

　　　2.   檢體中有影響檢驗(yàn)結(jié)果之物質(zhì)時(shí)，應(yīng)自行探討。

　　　3.   以液相層析串聯(lián)質(zhì)譜儀（LC/MS/MS）進(jìn)行確認(rèn)時(shí)，其LC/MS/MS之多重反應(yīng)偵測(cè)（multiple reaction monitoring, MRM）模式參考參數如下表

分析物

離子化模式

離子對(duì)

去集簇電壓

（V）

碰撞能量

（eV）

前驅(qū)離子（m/z）＞

產(chǎn)物離子（m/z）

黃曲毒素B1

ESI+

313＞241*

313＞285

48

48

36

22

　　　　*定量離子對(duì)

　　　　注：上述參數(shù)不適時(shí)，依所使用之儀器，設(shè)定適合之參數(shù)。

參考文獻(xiàn)：

AOAC. 2004. Aflatoxin B1 in baby foods. AOAC Official Method 2000. 16.

 

廈門(mén)WTO工作站編

2015.4.23