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一、概述

      藥物中的殘留溶劑系指在原料藥或輔料的生產(chǎn)中、以及在制劑制備過程中使用或產(chǎn)生而又未能完全去除的有機(jī)溶劑。根據(jù)有機(jī)溶劑對人體及環(huán)境可能造成的危害的程度， ICH將有機(jī)溶劑分為避免使用、限制使用、低毒和毒性依據(jù)尚不足四種情況。因殘留溶劑會(huì)影響產(chǎn)品的安全性，故需對其進(jìn)行研究。

二、研究方法的建立及方法學(xué)驗(yàn)證

      在確定了需要進(jìn)行殘留量研究的溶劑后，需要通過方法學(xué)研究建立合理可行的檢測方法。目前，殘留溶劑的測定一般采用氣相色譜法，推薦使用毛細(xì)管色譜柱- 頂空進(jìn)樣系統(tǒng)，當(dāng)然也可以使用普通填充柱，溶液直接進(jìn)樣方法。對不宜采用氣相色譜法測定的含氮堿性化合物，如N- 甲基吡咯烷酮等可采用其它方法，如離子色譜法等。

      GC法具有檢測靈敏度較高，選擇性較好的特點(diǎn)，采用此法所需的樣品用量較少，基本可以滿足所有殘留溶劑測定的要求。采用GC法時(shí)，需要結(jié)合藥物和所要檢測的溶劑的性質(zhì)，通過方法學(xué)研究確定合適的檢測條件。

 1 、研究方法的建立

1.1 確定被測的有機(jī)溶劑

      根據(jù)制備工藝確定被測有機(jī)溶劑的范圍。通常應(yīng)對制備工藝過程中使用的二類以上溶劑和重結(jié)晶用溶劑，以及根據(jù)工藝特點(diǎn)要求的其它溶劑進(jìn)行殘留量的研究。建議對合成最后三步使用的三類溶劑也進(jìn)行研究，這樣能更好地對未知峰進(jìn)行歸屬；對制劑過程中使用的有機(jī)溶劑也建議考察其殘留情況，特別是緩、控釋微丸包衣過程使用的有機(jī)溶劑更應(yīng)引起注意。

 1.2 色譜柱選擇

      按照相似相溶的原理選擇色譜柱。毛細(xì)管柱有極性柱、非極性柱、弱極性柱和中等極性柱。填充柱有高分子多孔小球或涂漬適宜固定液的填充柱。測定含氮的堿性有機(jī)溶劑時(shí)，由于普通氣相色譜儀的不銹鋼管路、進(jìn)樣器襯管等對有機(jī)胺等含氮的堿性化合物具有較強(qiáng)的吸附作用，致使其檢出的靈敏度降低。通常采用弱極性色譜柱或經(jīng)堿處理過的色譜柱分析含氮的堿性有機(jī)溶劑，如果采用胺分析專用柱進(jìn)行分析，則效果更好。

 1.3 進(jìn)樣方法

      GC 法包括溶液直接進(jìn)樣和頂空進(jìn)樣兩種進(jìn)樣方法。通常情況下，沸點(diǎn)低的溶劑建議采用頂空進(jìn)樣法，沸點(diǎn)高的溶劑可以采用溶液直接進(jìn)樣法，當(dāng)樣品本身對測定有影響時(shí)，也建議采用頂空進(jìn)樣法。

 1.4 供試品溶液和對照品溶液的配制

      對于固體原料藥，如采用溶液直接進(jìn)樣法，需先用水或合適的溶劑使原料藥溶解，以使其中的有機(jī)溶劑釋放于溶液中，才能被準(zhǔn)確測定。如采用頂空進(jìn)樣法，通常以水作溶劑；當(dāng)藥物不溶于水，但可溶于一定濃度的酸或堿液中時(shí)，可采用不揮發(fā)的酸或堿液為溶劑，但不能使用鹽酸溶液或氨水；對于非水溶性藥物，可采用合適的溶劑,如N,N—二甲基甲酰胺、二甲基亞砜等為溶劑。以DMSO 等為溶劑時(shí)，可加入一定量的水以增加檢測的靈敏度，或用鹽析的方法增加靈敏度。

 1.5 供試品溶液和對照品溶液濃度的確定

      配制供試品溶液的濃度應(yīng)滿足定量測定的需要，一般供試品取樣量在0.1 ~1g之間。限度檢查時(shí)對照品溶液的濃度可按規(guī)定的限度配制，定量測定時(shí)按實(shí)際殘留量配制，濃度相差以不超過 2 倍為宜。

 1.6 檢測器的選擇

      一般選用FID檢測器，對含鹵素的有機(jī)溶劑如氯仿等，采用 ECD檢測器可得到更高的靈敏度。通常可根據(jù)藥物溶劑的殘留情況選擇合適的檢查方法。當(dāng)需要檢查的有機(jī)溶劑數(shù)量不多，且極性差異較小時(shí)，可選擇毛細(xì)管色譜柱 - 頂空進(jìn)樣-等溫法。當(dāng)需要檢查的有機(jī)溶劑數(shù)量較多，且極性、沸點(diǎn)差異較大時(shí)，可選擇毛細(xì)管色譜柱 -頂空進(jìn)樣- 程序升溫法；也可選擇填充柱或適宜極性的毛細(xì)管柱直接進(jìn)樣法。

 1.7 頂空進(jìn)樣法還要對頂空溫度和頂空時(shí)間進(jìn)行選擇

      頂空溫度應(yīng)根據(jù)溶解供試品溶劑的特性及供試品中殘留溶劑的沸點(diǎn)選擇。以水為溶劑及測定低沸點(diǎn)殘留溶劑時(shí)，頂空溫度不宜超過85 ℃；測定沸點(diǎn)較高的殘留溶劑時(shí)，通常選擇較高的頂空溫度；但此時(shí)應(yīng)兼顧供試品的熱分解特性，盡量避免供試品產(chǎn)生的揮發(fā)性熱分解產(chǎn)物干擾測定結(jié)果。以 DMSO為溶劑時(shí)，頂空溫度不宜超過115 ℃。例如，在申報(bào)資料中發(fā)現(xiàn)，以水為溶劑，頂空溫度為100 ℃，柱溫 60℃，結(jié)果高濃度的乙腈比低濃度的二氯甲烷的峰面積還小，原因是頂空溫度太高，大量的水被蒸發(fā)（或濃度被稀釋），隨著水蒸汽的凝結(jié)，在水中溶解度大的乙腈的靈敏度下降，產(chǎn)生了與事實(shí)不符的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。

      頂空時(shí)間是要確保供試品溶液的氣-液兩相達(dá)到平衡，一般通過測定頂空時(shí)間與頂空氣體濃度的濃度 —時(shí)間曲線來確定。頂空時(shí)間不宜過長，一般為30~45分鐘，如果超過 60min ，可能引起頂空瓶的氣密性變差, 導(dǎo)致定量的準(zhǔn)確性降低。如果平衡時(shí)間選擇 10分鐘，就不能保證氣- 液兩相達(dá)到平衡。對照品溶液與供試品溶液必須使用相同的頂空條件。

 2、方法學(xué)驗(yàn)證

2.1系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

      柱效：用被測物的色譜峰計(jì)算，填充柱法的理論板數(shù)應(yīng)大于1000 ，毛細(xì)管色譜柱的理論板數(shù)應(yīng)大于 5000。

      分離度：色譜圖中被測物色譜峰與其相鄰色譜峰的分離度應(yīng)大于1.5 。

      重復(fù)性：以內(nèi)標(biāo)法測定時(shí)，對照品溶液連續(xù)進(jìn)樣5次，所得被測物與內(nèi)標(biāo)物峰面積之比的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差 (RSD)應(yīng)不大于5% ；以外標(biāo)法測定時(shí)，所得被測物峰面積的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差 (RSD)應(yīng)不大于 10% 。

 2.2專屬性

      對各種殘留溶劑定位和進(jìn)行混合溶劑的分離度試驗(yàn)，分離度應(yīng)大于1. 5 。同時(shí)空白溶劑對被測溶劑無干擾。

 2.3線性

     至少制備6個(gè)濃度（如定限，10%，20%，40%，60%，80%，100%，120%殘留溶劑限度水平），相關(guān)系數(shù)不小于0.99。

 2.4檢測限和定量限

      檢測限為信噪比3～5時(shí)相應(yīng)濃度或注入儀器的量。定量測定時(shí)需驗(yàn)證定量限，其限度為信噪比10～15時(shí)相應(yīng)濃度或注入儀器的量。定量限應(yīng)不高于殘留溶劑限度的50%。

 2.5精密度

2.5.1重復(fù)性

      連續(xù)進(jìn)樣6次，標(biāo)準(zhǔn)溶液峰面積RSD不得大于10%。

2.5.2中間精密度

     不同時(shí)間，不同實(shí)驗(yàn)人員，不同儀器，測得的供試品溶液中殘留溶劑的峰面積RSD不得大于10%。

 2.6準(zhǔn)確度

      在規(guī)定的范圍內(nèi)，至少9個(gè)測定結(jié)果。設(shè)計(jì)三個(gè)不同的濃度（一般加入80%，100%，120%三個(gè)不同限度濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液）進(jìn)行測定，計(jì)算回收率和相對標(biāo)準(zhǔn)偏差，回收率應(yīng)在80%～120%，各濃度水平回收率的RSD應(yīng)不大于2.0%。

 2.7耐用性

      通過改變柱流速，初始柱溫，色譜柱型號(hào)等，考察色譜參數(shù)的微小變化對結(jié)果的影響。