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質(zhì)粒保有率(質(zhì)粒丟失率)的檢測方法

嘉峪檢測網(wǎng)        2019-06-10 15:10

在利用大腸桿菌表達(dá)重組蛋白時(shí),一般需要對重組菌進(jìn)行質(zhì)粒保有率(有些說法是質(zhì)粒丟失率)的測定,驗(yàn)證質(zhì)粒的遺傳穩(wěn)定性,一般要求是質(zhì)粒保有率不低于90%(不同情況下要求不同)。

 

檢測原理:在培養(yǎng)基上加入相應(yīng)的抗生素,然后利用重組菌質(zhì)粒上帶有的抗性基因,篩選出帶質(zhì)粒的大腸桿菌。

 

實(shí)驗(yàn)方法

 

1、稀釋菌液至稀釋倍數(shù)為10-6、10-7、10-8,,分別將菌液涂布到LB固體培養(yǎng)基上,培養(yǎng)17小時(shí),37℃。

2、選擇菌落數(shù)在30-300個(gè)范圍的培養(yǎng)皿,挑選100個(gè)生長良好的菌落,分別接種到含抗生素的LB固體培養(yǎng)基和不含抗生素的LB培養(yǎng)基上,培養(yǎng)12小時(shí),37℃。

3、計(jì)下各培養(yǎng)基上菌落數(shù)。

4、計(jì)算公式:質(zhì)粒保有率=含抗生素培養(yǎng)基上菌落數(shù)/不含抗生物培養(yǎng)基上菌落數(shù)*100%

5、質(zhì)粒丟失率=(不含抗生素培養(yǎng)基上菌落數(shù)-含抗生素培養(yǎng)基上菌落數(shù))/不含抗生素培養(yǎng)基上菌落數(shù)*100%

 

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來源:Internet

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