中文字幕一级黄色A级片|免费特级毛片。性欧美日本|偷拍亚洲欧美1级片|成人黄色中文小说网|A级片视频在线观看|老司机网址在线观看|免费一级无码激情黄所|欧美三级片区精品网站999|日韩av超碰日本青青草成人|一区二区亚洲AV婷婷

保留因子作為化合物在液相上保留最重要的參數(shù)，同時它在分離度公式中占據(jù)重要的一席，因此理解好保留因子對于液相色譜方法開發(fā)具有重要意義，下面小編和大家一起剖析下保留因子k。

1.  k的定義

保留因子（k）：固定相中的溶質(zhì)分子總量（s）除以流動相（m）中的溶質(zhì)分子總量得到。當(dāng)化合物在固定相中溶質(zhì)分子越多，K值越大，保留時間越長。

2.  k的計算

（1）等度洗脫中，運用公式k=（tR-t0）/t0進行計算，其中t0約等于5x10-4Ldc2/F。式中L是色譜柱的長度，以mm為單位；dc是色譜柱的內(nèi)徑，也以mm為單位；F是流動相流速，以ml/min為單位；t0以分鐘為單位；其中5x10-4Ldc2為色譜柱的死體積Vm。

舉例來說，對于4.6mm內(nèi)徑的色譜柱，其死體積Vm近似為0.01L，因此對于一根150x4.6mm的色譜柱，如果使用流速為 0.5ml/min，那么t0=Vm/F=1.5/0.5=3分鐘；然后根據(jù)待測樣品的保留時間tR就可以計算出該色譜峰的k值了。

（2）在梯度洗脫中，條件比較復(fù)雜，k值計算公式為0.87tGf/vmΔΦs。其中tG為梯度時間，F(xiàn)為流速，Vm為色譜柱的死體積，ΔΦ為梯度范圍，一般分子量為100-500Da的化合物S大約為4，根據(jù)此公式我們同樣可以計算出梯度洗脫中化合物的k值。

3. k的使用原則

在進行HPLC方法開發(fā)時一般要求k為1到10，最大容許范圍為2-20。在這個范圍內(nèi)我們可以得到又窄又高的色譜峰，同時化合物的分離能夠達到最佳。如果k小于1時，化合物的分離就會很差；當(dāng)化合物的k大于20時候，繼續(xù)提高k值，化合物的分離度變化十分微小，但是保留時間卻增加明顯。

4. k的主要影響因素

（1）   有機相的比例：

這個是改變k值的主要首選因素，通常有機相增加10%，會導(dǎo)致樣品的色譜峰k值下降大約2.5倍。

（2）   流動相pH

這個主要是針對酸堿等離子化合物，比如酸性化合物一般在酸性條件下k值高，在堿性條件下k值低。

（3）   離子對試劑

加入離子對試劑也可以改變化合物的k值的保留。

5. k在方法開發(fā)中的應(yīng)用

k值的計算主要應(yīng)用于初始方法開發(fā)中，先通過調(diào)整流動相中的有機相，使得所測定的化合物的k值在1-10以內(nèi)。注意這里設(shè)定值是1-10，而不是到20，確定這個范圍是為了后面方法進行優(yōu)化的時候能夠留有余地；當(dāng)遇到化合物的分離度不好時，可以犧牲一部分k值進行提高化合物的分離度。但是注意k值不要到達20以上。如果k值在20時化合物的分離度還不符合要求，此時就需要更改一些其他的色譜條件了，不要再一味的進行延長化合物的保留時間了，因為此時延長保留時間對于化合物的分離度已經(jīng)幾乎沒有影響了，而且會導(dǎo)致峰型變寬。

同時在方法開發(fā)選擇色譜柱的時候也要注意下化合物的k值，當(dāng)比較不同的色譜柱對化合物分離的影響，一定要使所有的化合物能在一個同一個k值上來進行比較（此時需進行調(diào)節(jié)有機相的比例來實現(xiàn)），這樣才能獲得分離化合物最優(yōu)的色譜柱。

舉例說明分離化合物A和B（B出峰在后），使用氨基柱、氰基柱、C18柱，首先要調(diào)節(jié)有機相比例使得化合物B的k值在不同色譜柱都在10左右，然后再看各個色譜柱對A和B的分離情況，哪個色譜柱分離最優(yōu)。

以上是小編對于保留因子方面的一些理解，可能有些地方理解不對，希望大家給以指正。感謝閻作偉老師在小編學(xué)習(xí)保留因子知識方面的答疑。

參考文獻：原：Lloyd R.Snyder, Joseph J.Kirkland, John W.Doln，譯：陳曉明，唐雅妍?，F(xiàn)代液相色譜技術(shù)導(dǎo)論（第三版）。