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無論什么方法，在使用之初，一般在下列情況下，要求對(duì)分析方法進(jìn)行驗(yàn)證、確認(rèn)（或稱證實(shí)）或重新驗(yàn)證。那么，方法驗(yàn)證和確認(rèn)究竟有什么區(qū)別及聯(lián)系呢？相信很多小伙伴都都是不了解的，即使了解也不能準(zhǔn)確的給出具體的答案。不知道的小伙伴有福了，今天咱們就來具體的說說。

 

任何分析檢測(cè)的目的都是為了獲得穩(wěn)定、可靠和準(zhǔn)確的數(shù)據(jù)，方法驗(yàn)證在其中起著極為重要的作用。方法驗(yàn)證的結(jié)果可以用于判斷分析結(jié)果的質(zhì)量、可靠性和一致性，這是所有質(zhì)量管理體系不可分割的一部分。

 

一般在下列情況下，要求對(duì)分析方法進(jìn)行驗(yàn)證、確認(rèn)（或稱證實(shí)）或重新驗(yàn)證：

（1）首次用于常規(guī)檢測(cè)前；

（2）轉(zhuǎn)到另一個(gè)實(shí)驗(yàn)室時(shí)；

（3）對(duì)于驗(yàn)證過的方法，其條件或方法參數(shù)發(fā)生變化時(shí)（例如，儀器性能參數(shù)發(fā)生改變或樣品基質(zhì)不同時(shí)），并且這種變化超出了方法的原適用范圍。

 

對(duì)實(shí)驗(yàn)室有影響的法規(guī)和質(zhì)量管理標(biāo)準(zhǔn)一般都要求進(jìn)行方法驗(yàn)證。有的法規(guī)中直接使用“驗(yàn)證或確認(rèn)”一詞，并列出特定參數(shù)，也有的法規(guī)用這樣的陳述暗示驗(yàn)證要求——“檢測(cè)方法應(yīng)適合于預(yù)期用途。”

 

 

國內(nèi)主要法規(guī)標(biāo)準(zhǔn)

 

 

國內(nèi)第三方檢測(cè)機(jī)構(gòu)一般均非標(biāo)準(zhǔn)制修訂機(jī)構(gòu)，方法驗(yàn)證或確認(rèn)的來源基本來自資質(zhì)認(rèn)定或?qū)嶒?yàn)室認(rèn)可的要求，主要依據(jù)如下：

 

01、CNAS-CL01:2006

 

 

方法選擇：實(shí)驗(yàn)室制定的或采用的方法如能滿足預(yù)期用途并經(jīng)過確認(rèn)，也可使用。所選用的方法應(yīng)通知客戶。在引入檢測(cè)或校準(zhǔn)之前，實(shí)驗(yàn)室應(yīng)證實(shí)能夠正確地運(yùn)用這些標(biāo)準(zhǔn)方法。如果標(biāo)準(zhǔn)方法發(fā)生了變化，應(yīng)重新進(jìn)行證實(shí)。

 

（1）實(shí)驗(yàn)室應(yīng)對(duì)非標(biāo)準(zhǔn)方法、實(shí)驗(yàn)室設(shè)計(jì)（制定）的方法、超出其預(yù)定范圍使用的標(biāo)準(zhǔn)方法、擴(kuò)充和修改過的標(biāo)準(zhǔn)方法進(jìn)行確認(rèn)，以證實(shí)該方法適用于預(yù)期的用途。確認(rèn)應(yīng)盡可能全面，以滿足預(yù)定用途或應(yīng)用領(lǐng)域的需要。實(shí)驗(yàn)室應(yīng)記錄所獲得的結(jié)果、使用的確認(rèn)程序以及該方法是否適合預(yù)期用途的聲明。

 

按預(yù)期用途進(jìn)行評(píng)價(jià)所確認(rèn)的方法得到的值的范圍和準(zhǔn)確度，應(yīng)與客戶的需求緊密相關(guān)。這些值諸如：結(jié)果的不確定度、檢出限、方法的選擇性、線性、重復(fù)性限和/或復(fù)現(xiàn)性限、抵御外來影響的穩(wěn)健度和/或抵御來自樣品（或測(cè)試物）基體干擾的交互靈敏度。

 

02、實(shí)驗(yàn)室資質(zhì)認(rèn)定評(píng)審準(zhǔn)則

 

實(shí)驗(yàn)室應(yīng)確認(rèn)能否正確使用所選用的新方法。如果方法發(fā)生了變化，應(yīng)重新進(jìn)行確認(rèn)。實(shí)驗(yàn)室應(yīng)確保使用標(biāo)準(zhǔn)的最新有效版本。

 

實(shí)驗(yàn)室自行制訂的非標(biāo)方法，經(jīng)確認(rèn)后，可以作為資質(zhì)認(rèn)定項(xiàng)目，但僅限特定委托方的檢測(cè)。

 

03、司法鑒定機(jī)構(gòu)資質(zhì)認(rèn)定評(píng)審準(zhǔn)則

 

 

司法鑒定機(jī)構(gòu)應(yīng)當(dāng)證實(shí)能否正確使用所選用的標(biāo)準(zhǔn)方法。標(biāo)準(zhǔn)方法發(fā)生變化應(yīng)當(dāng)重新進(jìn)行證實(shí)。

 

司法鑒定機(jī)構(gòu)自行制訂的非標(biāo)準(zhǔn)方法，經(jīng)省級(jí)以上司法行政機(jī)關(guān)指定的組織確認(rèn)后，可以作為資質(zhì)認(rèn)定項(xiàng)目。

 

04、CNAS-CL02:2013

 

 

檢驗(yàn)程序的確認(rèn)：實(shí)驗(yàn)室應(yīng)對(duì)以下來源的檢驗(yàn)程序進(jìn)行確認(rèn)：

a) 非標(biāo)準(zhǔn)方法；

b) 實(shí)驗(yàn)室設(shè)計(jì)或制定的方法；

c) 超出預(yù)定范圍使用的標(biāo)準(zhǔn)方法；

d) 修改過的確認(rèn)方法。方法確認(rèn)應(yīng)盡可能全面，并通過客觀證據(jù)（以性能特征形式）證實(shí)滿足檢驗(yàn)預(yù)期用途的特定要求。

（注：檢驗(yàn)程序的性能特征宜包括：測(cè)量正確度、測(cè)量準(zhǔn)確度、測(cè)量精密度（含測(cè)量重復(fù)性和測(cè)量中間精密度）、測(cè)量不確定度、分析特異性（含干擾物）、分析靈敏度、檢出限和定量限、測(cè)量區(qū)間、診斷特異性和診斷靈敏度。）

 

05、CNAS-CL08:2013

 

 

鑒定機(jī)構(gòu)應(yīng)對(duì)非標(biāo)準(zhǔn)方法進(jìn)行確認(rèn)以證實(shí)該方法適用于預(yù)期的用途，并保存使用的確認(rèn)程序、所獲得的結(jié)果、以及該方法是否滿足預(yù)期鑒定目的的評(píng)價(jià)等記錄。

 

按預(yù)期用途對(duì)鑒定方法進(jìn)行確認(rèn)時(shí)，鑒定機(jī)構(gòu)應(yīng)有證據(jù)證明對(duì)影響結(jié)果的因素進(jìn)行了評(píng)價(jià)。所確認(rèn)的鑒定方法的值范圍和準(zhǔn)確度應(yīng)與客戶的需求緊密相關(guān)。

 

諸如：結(jié)果的不確定度、檢出限、方法的選擇性、線性、重復(fù)性限和/或復(fù)現(xiàn)性限、抵御外來影響的穩(wěn)健度和/或抵御來自檢材/樣本基體干擾的交互靈敏度。

 

06、其他

 

CNAS-CL52:2014《CNAS-CL01<檢測(cè)和校準(zhǔn)實(shí)驗(yàn)室能力認(rèn)可準(zhǔn)則>應(yīng)用要求》：在引入檢測(cè)或校準(zhǔn)方法之前，實(shí)驗(yàn)室應(yīng)對(duì)其能否正確運(yùn)用這些標(biāo)準(zhǔn)方法的能力進(jìn)行驗(yàn)證，驗(yàn)證不僅需要識(shí)別相應(yīng)的人員、設(shè)施和環(huán)境、設(shè)備等，還應(yīng)通過試驗(yàn)證明結(jié)果的準(zhǔn)確性和可靠性，如精密度、線性范圍、檢出限和定量限等方法特性指標(biāo)，必要時(shí)應(yīng)進(jìn)行實(shí)驗(yàn)室間比對(duì)。

 

CNAS-CL10:2012《檢測(cè)和校準(zhǔn)實(shí)驗(yàn)室能力認(rèn)可準(zhǔn)則在化學(xué)檢測(cè)領(lǐng)域的應(yīng)用說明》：

方法的選擇：實(shí)驗(yàn)室應(yīng)對(duì)首次采用的檢測(cè)方法進(jìn)行技術(shù)能力的驗(yàn)證，如檢出限、回收率、正確度和精密度等。如果在驗(yàn)證過程中發(fā)現(xiàn)標(biāo)準(zhǔn)方法中未能詳述但影響檢測(cè)結(jié)果的環(huán)節(jié)，應(yīng)將詳細(xì)操作步驟編制成作業(yè)指導(dǎo)書，作為標(biāo)準(zhǔn)方法的補(bǔ)充。當(dāng)檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)發(fā)生變更涉及到檢測(cè)方法原理、儀器設(shè)施、操作方法時(shí)，需要通過技術(shù)驗(yàn)證重新證明正確運(yùn)用新標(biāo)準(zhǔn)的能力。

 

方法確認(rèn)：a) 任何對(duì)標(biāo)準(zhǔn)方法的偏離，都必須進(jìn)行實(shí)驗(yàn)室確認(rèn)，即使所采用的替代技術(shù)可能具有更好的分析性能。b) 實(shí)驗(yàn)室應(yīng)通過試驗(yàn)方法的檢出限、精密度、回收率、適用的濃度范圍和樣品基體等特性來對(duì)檢測(cè)方法進(jìn)行確認(rèn)。

 

CNAS-CL09:2013要求：標(biāo)準(zhǔn)方法引入檢測(cè)之前，實(shí)驗(yàn)室應(yīng)證實(shí)能夠正確地運(yùn)用這些方法，并未清晰說明如何證實(shí)，而對(duì)非標(biāo)方法的確認(rèn)提供的參考資料，比如SN/T 3266-2012《食品微生物檢驗(yàn)方法確認(rèn)技術(shù)規(guī)范》；CNAS-CL18:2013規(guī)定標(biāo)準(zhǔn)方法必要時(shí)才進(jìn)行技術(shù)驗(yàn)證；CNAS-CL44:2013和CNAS-CL56:2014僅規(guī)定非標(biāo)準(zhǔn)方法（包括實(shí)驗(yàn)室自制定方法）才需要確認(rèn)；CNAS-CL55:2014僅規(guī)定：以軟件方式、物理方式或采樣方式等標(biāo)準(zhǔn)未明確的方法進(jìn)行低輻照度試驗(yàn)時(shí)，實(shí)驗(yàn)室應(yīng)對(duì)該方法進(jìn)行確認(rèn)。

 

除化學(xué)領(lǐng)域明確規(guī)定應(yīng)對(duì)標(biāo)準(zhǔn)方法進(jìn)行確認(rèn)或驗(yàn)證外，其他領(lǐng)域僅要求對(duì)非標(biāo)方法進(jìn)行確認(rèn)或驗(yàn)證，或者未做規(guī)定，而且對(duì)確認(rèn)和驗(yàn)證是否有區(qū)別也未作說明。但是CNAS-CL52:2014是與CNAS-CL01:2006同步應(yīng)用的，具有等同效力，因此其他領(lǐng)域如未對(duì)標(biāo)準(zhǔn)方法確認(rèn)或驗(yàn)證進(jìn)行規(guī)定的，應(yīng)參考CNAS-CL52執(zhí)行。

 

 

國外主要法規(guī)標(biāo)準(zhǔn)

 

 

01、美國FDA

 

 

cGMP（藥品動(dòng)態(tài)生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范）和GLP（臨床前研究實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量管理規(guī)范）等法規(guī)要求必須進(jìn)分析方法的驗(yàn)證。美國cGMPs 提出了驗(yàn)證要求：

 

（1）應(yīng)用檢測(cè)方法時(shí)，應(yīng)建立并記錄準(zhǔn)確度、靈敏度、專屬性以及重現(xiàn)性；

 

（2）實(shí)驗(yàn)室的記錄應(yīng)包含用于樣品檢測(cè)的每個(gè)方法的聲明。聲明中應(yīng)指明建立方法的數(shù)據(jù)位置，這些數(shù)據(jù)應(yīng)能證明該檢測(cè)方法在應(yīng)用于產(chǎn)品檢測(cè)時(shí)符合特定的準(zhǔn)確度和可靠性標(biāo)準(zhǔn)要求。所有檢測(cè)方法的適用性應(yīng)在實(shí)際應(yīng)用條件下得到證實(shí)；

 

（3）如對(duì)應(yīng)用于檢測(cè)的已確認(rèn)方法有任何變更，應(yīng)保存完整的變更記錄。該記錄中應(yīng)包含變更原因以及相關(guān)數(shù)據(jù)，以證實(shí)方法變更后的樣品檢測(cè)結(jié)果至少能達(dá)到原方法相同的準(zhǔn)確度和可靠性；

 

FDA GLP 法規(guī)21 CFR 第58 部分并未用到“驗(yàn)證”一詞，但是依據(jù)58.113 中的要求，檢查員需要檢查驗(yàn)證研究記錄：“應(yīng)采用合適的分析方法進(jìn)行檢測(cè)”，其中“合適的”即意味著驗(yàn)證。并且FDA 的生物分析方法驗(yàn)證指南中規(guī)定臨床前毒理研究也屬于驗(yàn)證范圍；

 

FDA 關(guān)于生物利用度和生物等效性要求的法規(guī)21 CFR 320第29節(jié)中規(guī)定：用于體內(nèi)生物利用度研究以檢測(cè)體液或排泄物中活性藥物成分或治療成分檢測(cè)的分析方法，或用于急性藥理作用檢測(cè)的方法，應(yīng)證明其具有準(zhǔn)確性和足夠的靈敏度以及恰當(dāng)?shù)木芏龋軡M足體內(nèi)的活性藥物成分/治療成分或其代謝產(chǎn)物的實(shí)際濃度的檢測(cè)要求。

 

02、(PIC/S)

 

 

藥品檢查協(xié)定和藥品監(jiān)察檢查合作計(jì)劃PIC/S 的使命是“領(lǐng)導(dǎo)制定、實(shí)施和維護(hù)國際性的、統(tǒng)一的藥品生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范（GMP）標(biāo)準(zhǔn)以及藥品領(lǐng)域檢查工作質(zhì)量體系”。

 

這一使命通過以下手段得以實(shí)施：制定和推廣統(tǒng)一的GMP 標(biāo)準(zhǔn)和指導(dǎo)文件；培訓(xùn)主管部門、尤其是檢查員；評(píng)審檢查活動(dòng)；以及促進(jìn)主管部門和國際組織的合作和網(wǎng)絡(luò)化。目前，約有50個(gè)政府組織參加了PIC/S，包話所有的歐盟成員國。許多新的成員國還沒有按照PIC/S GMPs建立自己的GMP 法規(guī)。

 

PIC/S 的GMP 與歐盟的GMP 指令非常相似。兩個(gè)文件都在第6.1.5 部分以相同的文字規(guī)定了分析方法驗(yàn)證的要求：分析方法應(yīng)經(jīng)過驗(yàn)證。申請(qǐng)上市許可的所有檢測(cè)均應(yīng)按照批準(zhǔn)的方法進(jìn)行。

 

在PIC/S 的實(shí)驗(yàn)室現(xiàn)場檢查指南中包含檢查員檢查質(zhì)量控制實(shí)驗(yàn)室時(shí)的一些提問。這些問題包括：

方法驗(yàn)證是不是驗(yàn)證總體計(jì)劃的一部分？

有沒有通用的方法驗(yàn)證SOP？

方法驗(yàn)證報(bào)告是否經(jīng)過正式批準(zhǔn)？

是否明確驗(yàn)證目的？

是否按ICH規(guī)定的參數(shù)對(duì)每一種方法進(jìn)行完整的驗(yàn)證并記錄？

是否規(guī)定了每種方法的接受限度并能符合該限度規(guī)定？

 

03、國際協(xié)調(diào)會(huì)議（ICH）

 

 

國際協(xié)調(diào)會(huì)議（ICH）發(fā)起于1990 年，匯集了歐盟、日本和美國的監(jiān)管機(jī)構(gòu)和這三個(gè)地區(qū)的制藥行業(yè)專家，一起討論產(chǎn)品注冊(cè)方面的科學(xué)和技術(shù)問題。

 

ICH 出版的指導(dǎo)原則，有些被成員國（如歐盟）寫入法律，有些被國家權(quán)力機(jī)構(gòu)（如美國FDA）推薦為指南。其中，最為重要的ICH 文件是活性藥物成分的GMP 指南。在第12章中規(guī)定了方法驗(yàn)證的要求：應(yīng)對(duì)分析方法進(jìn)行驗(yàn)證，所用方法收載于相關(guān)的藥典或其他認(rèn)可的標(biāo)準(zhǔn)參考文件中的除外。所有檢測(cè)方法均應(yīng)在實(shí)際使用條件下證實(shí)其適用性；實(shí)施分析驗(yàn)證的程度應(yīng)能反映分析的目的以及活性藥物成分的生產(chǎn)工藝狀況；開始驗(yàn)證分析方法前，應(yīng)考慮對(duì)分析設(shè)備進(jìn)行適當(dāng)?shù)拇_認(rèn)。

 

04、美國藥典（USP）

 

 

美國藥典（USP）為具體的應(yīng)用制定方法，并針對(duì)FDA 監(jiān)管的行業(yè)內(nèi)不同的分析特點(diǎn)制定通則。根據(jù)聯(lián)邦食品藥品和化妝品法案501 部分的規(guī)定，USP 方法構(gòu)成法定標(biāo)準(zhǔn)。USP 制定了兩個(gè)與方法驗(yàn)證有關(guān)的通則。

 

通則<1225>是“法定方法的驗(yàn)證”。該通則中給出了用于新方法驗(yàn)證的各種參數(shù)。通則中的建議可以被藥品實(shí)驗(yàn)室用作自行制定方法的驗(yàn)證。

 

通則<1226>是“法定方法的確認(rèn)”。該通則用于實(shí)施藥典和標(biāo)準(zhǔn)方法的實(shí)驗(yàn)室。這些內(nèi)容也適用于實(shí)驗(yàn)室應(yīng)用其他實(shí)驗(yàn)室驗(yàn)證過的方法。

 

05、ISO/IEC 17025

 

同CNAS-CL01:2006《檢測(cè)和校準(zhǔn)實(shí)驗(yàn)室能力認(rèn)可準(zhǔn)則》，以上國內(nèi)外法規(guī)標(biāo)準(zhǔn)中多次出現(xiàn)驗(yàn)證、確認(rèn)和證實(shí)三個(gè)術(shù)語，由于國內(nèi)翻譯問題，經(jīng)常在標(biāo)準(zhǔn)中將確認(rèn)和驗(yàn)證混用或等同。正確的翻譯：Verification譯成確認(rèn)或證實(shí)，Validation譯成驗(yàn)證，建議參考美國USP。

導(dǎo)致很多實(shí)驗(yàn)室認(rèn)為方法確認(rèn)或驗(yàn)證困難重重原因有四：

（1）法規(guī)標(biāo)準(zhǔn)的翻譯問題，導(dǎo)致理解存在偏差，比如CNAS-CL01:2006中5.4.2所描述的“證實(shí)”即與“確認(rèn)”同義；

（2）部分法規(guī)標(biāo)準(zhǔn)未作詳細(xì)說明，比如《實(shí)驗(yàn)室資質(zhì)認(rèn)定評(píng)審準(zhǔn)則》；

（3）方法確認(rèn)和方法驗(yàn)證定義不清，概念搞混；

（4）國人缺乏研究心態(tài)，有點(diǎn)困難就逃避，懶惰之心嚴(yán)重。

 

 

驗(yàn)證和確認(rèn)的定義

 

 

01、方法驗(yàn)證（Validation of method）

 

 

USP：方法驗(yàn)證是一個(gè)通過實(shí)驗(yàn)室研究來證明程序的性能參數(shù)符合期望的分析應(yīng)用要求的過程。

ICH：分析方法驗(yàn)證的目的是顯示分析方法適用于它所期望的應(yīng)用目的。

FDA：方法驗(yàn)證是一個(gè)闡述分析方法適合于其使用目的的過程。

 

02、方法確認(rèn)（Verification of method）

 

USP<1225>：USP-NF所收載方法的使用者不需要驗(yàn)證這些方法的準(zhǔn)確性和可靠性，但需要確認(rèn)這些方法在實(shí)際使用條件下的適應(yīng)性。

 

USP<1226>：確認(rèn)包括所涉及方法的性能參數(shù)，如那些在<1225>中描述的，以建立恰當(dāng)?shù)?、相?yīng)的數(shù)據(jù)，而不是重復(fù)驗(yàn)證的過程。

 

FDA：出現(xiàn)在USP中的方法被認(rèn)為已驗(yàn)證，對(duì)于法定方法，廠家必須闡明該方法在實(shí)際使用情況下的狀態(tài)。

 

總體來講，方法驗(yàn)證是闡明方法適合于它使用目的的一個(gè)過程，方法確認(rèn)是通過已驗(yàn)證的方法進(jìn)行檢測(cè)的條件確實(shí)適合于該已驗(yàn)證方法的過程。

 

 

方法驗(yàn)證參數(shù)和試驗(yàn)

 

 

01、方法驗(yàn)證的參數(shù)

 

 

USP<1225>規(guī)定實(shí)驗(yàn)室應(yīng)采用試驗(yàn)方式進(jìn)行方法驗(yàn)證：“應(yīng)通過實(shí)驗(yàn)室的研究制定成一定的分析方法驗(yàn)證程序，證明方法的性能參數(shù)符合預(yù)期的分析應(yīng)用要求。”不同國家和國際委員會(huì)的工作組都對(duì)方法驗(yàn)證所要求的試驗(yàn)作出了規(guī)定，這些在文獻(xiàn)中都有闡述。不幸的是，一些定義在不同的組織間差異很大。為了達(dá)到標(biāo)準(zhǔn)化的目的，ICH 來自美國、歐洲和日本的行業(yè)和監(jiān)管機(jī)構(gòu)代表定義了分析方法驗(yàn)證的參數(shù)、要求和方法。

 

表1 典型化學(xué)分析方法驗(yàn)證參數(shù)的選擇

		檢出限	定量限	回收率	精密度	選擇性	適用性	靈敏度
定性方法	S	+	-	-	-	+	+	-
	C	+	-	-	-	+	+	-
定量方法	S	+	+	-	+	+	+	+
	C	+	+	+	+	+	+	+
備注：“S”=篩選方法（Screening methods）；          “C”=確證方法（Confirmatory methods） “+”=必選參數(shù)；

 

表2 國內(nèi)外對(duì)方法驗(yàn)證參數(shù)的要求

參數(shù)	對(duì)相關(guān)參數(shù)做出要求的法規(guī)、標(biāo)準(zhǔn)
定量限	USP、ICH、ISO/IEC17025、Ch.P （2010版）、SN/T 3266-2012、《化礦金專業(yè)化學(xué)分析方法驗(yàn)證程序（試行）》（CNCA）、《食品化妝品專業(yè)化學(xué)分析方法驗(yàn)證程序》（CNCA）、《食品化妝品專業(yè)生物檢測(cè)方法確認(rèn)（驗(yàn)證）程序》（CNCA）、《化學(xué)分析方法驗(yàn)證程序》（征求意見稿，AQSIQ）、《化學(xué)藥物質(zhì)量控制分析方法驗(yàn)證技術(shù)指導(dǎo)原則》（CFDA）、《農(nóng)藥產(chǎn)品質(zhì)量分析方法確認(rèn)指南》（征求意見稿，農(nóng)業(yè)部）
檢測(cè)限/檢出限	不含《農(nóng)藥產(chǎn)品質(zhì)量分析方法確認(rèn)指南》（征求意見稿，農(nóng)業(yè)部），其他同定量限
準(zhǔn)確度/正確度/回收率	同定量限
精密度 l 重復(fù)性 l 中間精密度 l 再現(xiàn)性（復(fù)現(xiàn)性、重現(xiàn)性）	同定量限； 不含USP，其他同定量限； ICH、《化學(xué)藥物質(zhì)量控制分析方法驗(yàn)證技術(shù)指導(dǎo)原則》（CFDA）； 同定量限。
專屬性/選擇性/特異性	同定量限；幾個(gè)術(shù)語的定義存在相同或相近之處，USP、ICH稱為專屬性，ISO/IEC17025稱為選擇性，某些標(biāo)準(zhǔn)稱為特異性，某些標(biāo)準(zhǔn)將選擇性定義為包容性和排他性的組合。
耐用性/適用性/穩(wěn)健性/穩(wěn)定性	不含SN/T 3266-2012和《農(nóng)藥產(chǎn)品質(zhì)量分析方法確認(rèn)指南》（征求意見稿，農(nóng)業(yè)部），其他同定量限；不同標(biāo)準(zhǔn)采用的術(shù)語存在差異，但其定義相同或相近
線性	同定量限
范圍/測(cè)定范圍	不含SN/T 3266-2012和《農(nóng)藥產(chǎn)品質(zhì)量分析方法確認(rèn)指南》（征求意見稿，農(nóng)業(yè)部），其他同定量限
靈敏度	不含《化學(xué)藥物質(zhì)量控制分析方法驗(yàn)證技術(shù)指導(dǎo)原則》（CFDA）和《農(nóng)藥產(chǎn)品質(zhì)量分析方法確認(rèn)指南》（征求意見稿，農(nóng)業(yè)部），其他同定量限

 

注：（1）依據(jù)GB/T 3358.2-2009《統(tǒng)計(jì)學(xué)詞匯及符號(hào)第2部分：應(yīng)用統(tǒng)計(jì)》（ IDT ISO3534-2:2006）和GB/T6379.1-2004《測(cè)量方法與結(jié)果的準(zhǔn)確度(正確度與精密度)第1部分:總則與定義》（ IDT ISO5725-1:1994）中規(guī)定“準(zhǔn)確度”的定義為正確度和精密度的組合，而國內(nèi)目前部分標(biāo)準(zhǔn)中（包括上表）的“準(zhǔn)確度”僅等同GB/T 3358.2-2009中的“正確度”，所以上表的準(zhǔn)確度與正確度同義，此差異主要是由于國內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)制訂引用術(shù)語不嚴(yán)謹(jǐn)造成。

     （2）回收率是表示準(zhǔn)確度/正確度的一項(xiàng)指標(biāo)；

     （3）再現(xiàn)性亦稱復(fù)現(xiàn)性、重現(xiàn)性；

    （4）由于重復(fù)性和再現(xiàn)性條件均為精密度的兩種極端條件，因此引出中間精密度這一術(shù)語，具體定義見GB/T 3358.2-2009。

 

 

CNAS-CL01:2006和CNAS-CL10:2012對(duì)方法確認(rèn)的具體參數(shù)描述已經(jīng)與表1類似，但確認(rèn)終究不是驗(yàn)證，因此一般要求對(duì)非標(biāo)準(zhǔn)方法參照表1進(jìn)行驗(yàn)證，而標(biāo)準(zhǔn)方法的確認(rèn)則適當(dāng)采用簡化程序。

 

至于每項(xiàng)參數(shù)的驗(yàn)證試驗(yàn)具體如何操作，可參考本文后的相關(guān)參考文獻(xiàn)，這里不做過多闡述。

 

02、方法驗(yàn)證的步驟

 

 

某某個(gè)具體方法的有效性應(yīng)通過實(shí)驗(yàn)加以證明，一般使用與常規(guī)分析的未知樣品接近的樣品或標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)行驗(yàn)證試驗(yàn)。其準(zhǔn)備和執(zhí)行應(yīng)按照驗(yàn)證計(jì)劃進(jìn)行，最好寫成作業(yè)指導(dǎo)書。圖1為方法驗(yàn)證的參考步驟。

 

圖1 方法驗(yàn)證常規(guī)步驟

 

方法確認(rèn)（證實(shí)）

 

 

ISO/IEC 17025 要求：“應(yīng)優(yōu)先使用以國際、區(qū)域或國家標(biāo)準(zhǔn)發(fā)布的方法。”，這些標(biāo)準(zhǔn)方法被認(rèn)為已經(jīng)得到驗(yàn)證。因此，許多技術(shù)人員錯(cuò)誤地認(rèn)為標(biāo)準(zhǔn)方法不需要在實(shí)驗(yàn)室中做任何進(jìn)一步的驗(yàn)證、證實(shí)或試驗(yàn)即可投入使用。

 

US FDA CGMP 法規(guī)在21 CFR 211.194 (a)(2)中規(guī)定：“如果應(yīng)用的方法收載于現(xiàn)行的美國藥典或其他認(rèn)可的標(biāo)準(zhǔn)方法中，或在批準(zhǔn)的新藥應(yīng)用中有詳細(xì)方法且未改變這一參考方法時(shí)，有指明方法和參考文獻(xiàn)的聲明即滿足要求。所有檢測(cè)方法的適用性應(yīng)在實(shí)際應(yīng)用條件下得到證實(shí)。”ISO/IEC 17025 在5.4.2 中有類似的要求：“在引入檢測(cè)或校準(zhǔn)之前，實(shí)驗(yàn)室應(yīng)證實(shí)能夠正確地運(yùn)用這些標(biāo)準(zhǔn)方法。如果標(biāo)準(zhǔn)方法發(fā)生了變化，應(yīng)重新進(jìn)行證實(shí)。”

 

這里明確了標(biāo)準(zhǔn)方法只要不發(fā)生變更，不需要進(jìn)行驗(yàn)證，但實(shí)驗(yàn)室應(yīng)確認(rèn)其有能力成功運(yùn)行該方法。當(dāng)決定選擇什么樣的證實(shí)方式最好時(shí)，問題又來了。是否需要重做部分驗(yàn)證試驗(yàn)還是全部的驗(yàn)證試驗(yàn)都要重做，或者僅僅系統(tǒng)適用性試驗(yàn)或質(zhì)控樣品結(jié)果滿意是否足夠，這些都不清楚。

 

USP 在通則<1226>法定方法的確認(rèn)中回答了這些問題，給出的建議適用于法定方法和標(biāo)準(zhǔn)方法的實(shí)施，關(guān)鍵的建議有：

1.通過系統(tǒng)適用性試驗(yàn)證明實(shí)驗(yàn)室和系統(tǒng)的性能

2.評(píng)價(jià)方法的臨界性和復(fù)雜性

3.選擇最重要的方法性能參數(shù)

4.根據(jù)方法的臨界性和復(fù)雜性，重復(fù)1～3 個(gè)最為重要的驗(yàn)證試驗(yàn)

 

ISO/IEC 17025在5.4.5.2中也給出相應(yīng)的注解：用于確定某方法性能的技術(shù)應(yīng)當(dāng)是下列之一，或是其組合：

1.使用參考標(biāo)準(zhǔn)或標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)（參考物質(zhì)）進(jìn)行校準(zhǔn)；

2.與其他方法所得的結(jié)果進(jìn)行比較；

3.實(shí)驗(yàn)室間比對(duì)；

4.對(duì)影響結(jié)果的因素作系統(tǒng)性評(píng)審；

 

根據(jù)對(duì)方法的理論原理和實(shí)踐經(jīng)驗(yàn)的科學(xué)理解，對(duì)所得結(jié)果不確定度進(jìn)行的評(píng)定。

與內(nèi)部制定方法的驗(yàn)證相同，標(biāo)準(zhǔn)方法的確認(rèn)和評(píng)價(jià)也應(yīng)該遵循文件化的程序，如確認(rèn)計(jì)劃或作業(yè)指導(dǎo)書。法定/標(biāo)準(zhǔn)方法的確認(rèn)過程見圖2。

 

圖2  方法確認(rèn)的參考過程

 

那么，確認(rèn)參數(shù)和試驗(yàn)該如何選擇呢？參數(shù)和試驗(yàn)的選擇與應(yīng)用類型相關(guān)，圖3為USP <1226>為特定應(yīng)用推薦的確認(rèn)試驗(yàn)。

 

圖3  USP <1226>為藥物分析推薦的確認(rèn)試驗(yàn)

 

圖4  AOAC 為特定的應(yīng)用推薦的確認(rèn)試驗(yàn)

 

相對(duì)于方法驗(yàn)證來說，方法確認(rèn)類似于方法驗(yàn)證的簡化版，且方式更靈活。但是實(shí)驗(yàn)室最終該如何做好方法驗(yàn)證或確認(rèn)，還需要各實(shí)驗(yàn)室對(duì)相關(guān)法規(guī)標(biāo)準(zhǔn)及參考文獻(xiàn)進(jìn)行深入的研究，制定適合自身的作業(yè)指導(dǎo)書并嚴(yán)格執(zhí)行，才能在應(yīng)對(duì)認(rèn)證認(rèn)可和技術(shù)發(fā)展兩個(gè)層面實(shí)現(xiàn)雙提高。

 

最后，將方法驗(yàn)證、確認(rèn)和轉(zhuǎn)移簡單總結(jié)如下：

表3 方法驗(yàn)證、確認(rèn)和轉(zhuǎn)移總結(jié)

內(nèi)容	適用范圍	目的	發(fā)起時(shí)機(jī)
方法驗(yàn)證	1、采用新的檢測(cè)方法； 2、檢測(cè)方法需變更的； 3、采用非法定方法/標(biāo)準(zhǔn)方法； 4、法規(guī)標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定的其他需要驗(yàn)證的檢測(cè)方法	證明采用的方法適合相應(yīng)檢測(cè)要求	1、建立方法時(shí)； 2、方法修訂時(shí)； 3、非標(biāo)方法批準(zhǔn)采用前
方法確認(rèn)	1、不需要進(jìn)行驗(yàn)證的檢測(cè)方法； 2、法定方法和標(biāo)準(zhǔn)方法，比如USP、Ch.P、國際標(biāo)準(zhǔn)、國家標(biāo)準(zhǔn)等方法	確認(rèn)方法在本實(shí)驗(yàn)室條件下的適用性	在實(shí)驗(yàn)室批準(zhǔn)使用該方法前
方法轉(zhuǎn)移	將方法由A實(shí)驗(yàn)室轉(zhuǎn)移到B實(shí)驗(yàn)室	確認(rèn)采用的方法在B實(shí)驗(yàn)室條件下的適用性	在B實(shí)驗(yàn)室批準(zhǔn)使用該方法前