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嘉峪檢測(cè)網(wǎng) 2019-07-05 11:54
01
分析方法
在清潔驗(yàn)證中選擇一個(gè)合適的分析方法是非常必要的，該適當(dāng)?shù)姆治龇椒☉?yīng)能夠充分檢測(cè)相關(guān)殘留物。理解可以從分析結(jié)果中得出什么結(jié)論也很重要（例如檢測(cè)的是產(chǎn)品還是清潔劑，結(jié)果是否合格？），檢測(cè)結(jié)果決定了清潔方法是否可行或需要進(jìn)一步改進(jìn)。本章討論的內(nèi)容是怎樣選擇一個(gè)合適的測(cè)試方法，包括適用性、化學(xué)和微生物測(cè)試方法的信息，以及測(cè)試方法的驗(yàn)證。
本章的重點(diǎn)不是闡述分析方法的特性和局限性（盡管對(duì)此也有一定描述），而是判斷獲得了什么信息以及何時(shí)可采用某一特定分析方法的思考過(guò)程。對(duì)于清潔工藝的理解是在清潔驗(yàn)證不同階段選擇適當(dāng)分析方法的關(guān)鍵。
02
分析方法的目的
在一個(gè)生命周期的清潔驗(yàn)證方法里，在清潔驗(yàn)證的不同的階段可能使用不同的分析方法來(lái)評(píng)價(jià)殘留物。清潔驗(yàn)證的生命周期包括設(shè)計(jì)/開(kāi)發(fā)、確認(rèn)和驗(yàn)證維護(hù)。在生命周期中的任一階段，分析方法也可以作為調(diào)查的一部分。考慮和評(píng)估希望以及能夠從一個(gè)特定分析程序中獲得什么信息是很重要的。
例如，在早期的開(kāi)發(fā)過(guò)程中，可能沒(méi)有殘留物的足夠的信息（例如活性成分是否降解），而且一個(gè)特定的分析方法可能也沒(méi)有經(jīng)過(guò)驗(yàn)證。然而，在清潔工藝開(kāi)發(fā)時(shí)，采用非專屬性方法可能有助于較準(zhǔn)確地了解清潔工藝的綜合效果，即使這種非專屬性方法可能是或不是最終清潔驗(yàn)證方案中選定的分析方法。
另外一個(gè)例子是用于調(diào)查的分析方法的選擇。在驗(yàn)證（確認(rèn)）中，通常首選的分析方法應(yīng)能夠適當(dāng)檢測(cè)出目標(biāo)殘留物（例如活性成分）是否符合預(yù)定的可接受限度。但是，對(duì)于一個(gè)偏差（不符合）的調(diào)查，在特定的條件下（例如在驗(yàn)證方案中使用的是一個(gè)非專屬性方法），采用一個(gè)能夠定性檢測(cè)出該殘留物性質(zhì)（例如，是活性成分、清潔劑還是輔料？）的分析方法則是更為重要的。
需要重點(diǎn)強(qiáng)調(diào)的是，理解為何選擇一個(gè)分析方法是建立一個(gè)可靠的、科學(xué)的和基于風(fēng)險(xiǎn)的清潔驗(yàn)證方法的關(guān)鍵。僅僅因?yàn)槭沁^(guò)去使用過(guò)的分析方法并不一定意味著它可以用于新的應(yīng)用中。
03
分析方法的實(shí)際考慮
在理想的情況下，應(yīng)選擇最好的分析方法；實(shí)際上，分析方法的選擇可能會(huì)受到實(shí)際情況的限制。許多情況下，更重要的不是選擇的分析方法是最佳的，而是該方法能夠滿足預(yù)期的目的。在選擇分析方法時(shí)，必須考慮一個(gè)特定公司現(xiàn)有的分析方法，例如，如果現(xiàn)有的分析方法能夠滿足檢測(cè)目的，公司就不太可能再投入開(kāi)發(fā)另一個(gè)新的分析方法。新的方法可能意味著設(shè)備采購(gòu)、人員培訓(xùn)和設(shè)備維護(hù)投入，相關(guān)的費(fèi)用需與預(yù)期的收益進(jìn)行平衡。例如，直到TOC方法替代了藥典方法中的易氧化物檢驗(yàn)之后才被廣泛應(yīng)用于清潔驗(yàn)證中，之后制藥公司也就很快地熟悉和接受了這項(xiàng)技術(shù)。
另一方面，如果現(xiàn)在的內(nèi)控方法不足以滿足預(yù)期的目的，則需要采用一個(gè)新的分析方法，這些工作可以在合同實(shí)驗(yàn)室完成或建立新的內(nèi)控分析方法，可基于商業(yè)上的考慮決定建立新的內(nèi)控分析方法還是由合同實(shí)驗(yàn)室完成。
04
驗(yàn)證方案中的專屬性和非專屬性方法對(duì)比
專屬性分析方法是指那些在有預(yù)期干擾物存在的情況下仍可以檢測(cè)特定殘留物的方法。如果在驗(yàn)證方案中的目標(biāo)分析物是活性成分，那些干擾物可能包括降解物和有關(guān)物質(zhì)、輔料、清潔劑和清潔工藝副產(chǎn)物。專屬性方法包括液相色譜法（包括HPLC、UPLC和TLC）和光譜法（包括紫外、可見(jiàn)和紅外），這些方法都需要使用適宜的對(duì)照品。相反的，非專屬性方法測(cè)量的是一種大致的性質(zhì)，例如電導(dǎo)率和TOC，它可能源于多種分析物和不同來(lái)源。
分析方法的選擇可能取決于清潔工藝后存在的殘留物的性質(zhì)。只有在清潔過(guò)程中活性成分沒(méi)有發(fā)生降解（例如，在經(jīng)過(guò)高溫和極端的pH之后），使用一個(gè)專屬性的方法測(cè)定該活性成分才有意義；如果已知在清潔工藝中活性成分會(huì)發(fā)生降解，那么使用專屬性方法檢測(cè)活性成分時(shí)，可能就不會(huì)檢測(cè)（測(cè)量）到活性成分。在這種情況下，驗(yàn)證方案中就應(yīng)該考慮使用一個(gè)專屬性測(cè)定降解物或采用一個(gè)非專屬性方法（例如TOC）測(cè)量殘留；如果限度是按照活性成分的降解物建立的，也可以考慮采用一個(gè)專屬性分析方法測(cè)定降解物。
應(yīng)該認(rèn)識(shí)到，在驗(yàn)證方案中，使用適宜的非專屬性分析方法更能證明清潔方法的耐用性，因?yàn)槌四繕?biāo)殘留物外其他成分也會(huì)有響應(yīng)，而這種響應(yīng)將被假設(shè)為源于目標(biāo)殘留物（24）。然而，當(dāng)檢測(cè)結(jié)果超出限度時(shí)，使用一個(gè)非專屬性分析方法無(wú)法為失敗提供任何信息，偏高的檢測(cè)結(jié)果可能來(lái)源于活性成分、輔料、清潔劑和/或這些成分共同作用造成的響應(yīng)值。
本技術(shù)報(bào)告中的任何內(nèi)容都不應(yīng)理解為：一般應(yīng)優(yōu)先選擇專屬性方法而不是非專屬性方法。
05
專屬性和非專屬性方法的法規(guī)狀況
無(wú)論是專屬性方法還是非專屬性方法，監(jiān)管部門(mén)都是可以接受的。然而，必須要注意不要誤用分析方法。例如，如果不知道清潔過(guò)程中活性會(huì)發(fā)生降解，就可能錯(cuò)誤地使用專屬性方法；如果非專屬性響應(yīng)不完全源自目標(biāo)殘留物，則可能誤用非專屬性的方法。
美國(guó)FDA清潔驗(yàn)證指南要求“對(duì)于檢測(cè)殘留或污染物的分析方法，應(yīng)該驗(yàn)證其專屬性和靈敏度”（20）。因此有些人認(rèn)為應(yīng)使用專屬性的分析方法，但更恰當(dāng)?shù)恼f(shuō)法應(yīng)該是，不管使用哪種類型的分析方法，要確保能夠恰當(dāng)?shù)厥褂迷摲椒?。歐洲PIC/S建議“用于檢測(cè)殘留物或污染物的分析方法對(duì)于被分析物應(yīng)該是專屬的”。這再一次被解讀為應(yīng)該使用專屬性的分析方法。但是實(shí)際并非如此，因?yàn)榉菍傩苑椒ㄔ谑澜缟细鞴疽呀?jīng)廣泛地應(yīng)用并且被美國(guó)FDA和歐洲藥監(jiān)當(dāng)局所接受。
06
最常用的分析技術(shù)
這一節(jié)中我們所要討論的焦點(diǎn)是清潔驗(yàn)證中最常用的分析方法（25）。專家組認(rèn)為應(yīng)基于清潔驗(yàn)證的各個(gè)階段所提供的相關(guān)信息，選擇常用的分析方法。方法的特性、優(yōu)點(diǎn)和局限性經(jīng)常因使用的條件而不同，因此本文不再贅述。
選擇方法還要考慮以下內(nèi)容：
• 可用的儀器
• 檢測(cè)的速度
• 檢測(cè)技術(shù)的專屬性
• 取樣限制（包括取樣溶劑）
• 檢測(cè)限/定量限
• 響應(yīng)值的線性
• 能否在線檢測(cè)
• 費(fèi)用
在制藥清潔驗(yàn)證最多的應(yīng)用是在一已驗(yàn)證范圍內(nèi)定量測(cè)定殘留物的量。然而，在一些特定的情況下，合格-不合格檢測(cè)，也被稱為“放行-不放行”檢測(cè)，也可用來(lái)檢測(cè)殘留物是否在可接受限度之下。這種檢測(cè)可以用于臨床生產(chǎn)的確認(rèn)批（如果在線性范圍內(nèi)進(jìn)行全面驗(yàn)證則成本可能較高）或用于例行監(jiān)測(cè)和設(shè)備放行（基于最終淋洗液的檢測(cè)結(jié)果）。合格-不合格檢測(cè)通常不能證明清潔工藝的耐用性，除非合格-不合格點(diǎn)遠(yuǎn)遠(yuǎn)低于所需的可接受限度。由于該轉(zhuǎn)換點(diǎn)是一個(gè)范圍，因此這個(gè)范圍必須是已知的，并在驗(yàn)證過(guò)程中建立該范圍與限度之間的關(guān)系。實(shí)際的結(jié)果，盡管是合格的，可能與不合格結(jié)果是非常接近的，考慮到結(jié)果的正負(fù)誤差，可能實(shí)際上就已經(jīng)是不合格的結(jié)果了。
07
液相色譜法（LC）
液相色譜法包括HPLC（高效液相色譜）、UPLC（超高效液相色譜）和TLC（薄層色譜）。所有這些方法都是通過(guò)色譜方法先將各組分分離，再測(cè)定各分離組分的量。對(duì)于HPLC法和UPLC法，通常都是采用紫外（UV）檢測(cè)器進(jìn)行的測(cè)定，根據(jù)待測(cè)物也可以選擇其他適宜的檢測(cè)器。
HPLC法和UPLC法通常為專屬性方法，被廣泛應(yīng)用于小分子生產(chǎn)（包括API和制劑）中活性成分的測(cè)定。多數(shù)情況下，HPLC法/UPLC法已經(jīng)被開(kāi)發(fā)成活性成分的含量測(cè)定方法，只需要做小的修改即可用于確認(rèn)時(shí)殘留物的測(cè)定。這些額外的修改包括確認(rèn)線性范圍是否適用于殘留物的測(cè)定，以及在清潔系統(tǒng)中存在的“預(yù)期的干擾物”是否會(huì)干擾活性成分的測(cè)定。如果活性成分在清潔過(guò)程中發(fā)生降解，那么HPLC法/UPLC法可能就不適用于測(cè)定活性成分的殘留，除非該色譜條件可以將降解物分離并測(cè)定出來(lái)。
TLC方法可以應(yīng)用于小分子化合物清潔的各個(gè)階段。例如，它可以用于設(shè)計(jì)/開(kāi)發(fā)階段以確認(rèn)和定性活性成分的降解情況。TLC方法也可以用于調(diào)查（在清潔驗(yàn)證的各個(gè)階段）以定性殘留物。
08
紫外/可見(jiàn)分光光度法（UV/Vis
紫外/可見(jiàn)分光光度法是通過(guò)在特定波長(zhǎng)下測(cè)定殘留物溶液的透過(guò)率/吸收值來(lái)進(jìn)行測(cè)定的。它通常要求分子中存在一個(gè)生色基團(tuán)，也可以通過(guò)衍生法使殘留物產(chǎn)生一個(gè)生色基團(tuán)。例如，紫外/可見(jiàn)分光光度法通常被小分子化合物生產(chǎn)企業(yè)特別是API生產(chǎn)企業(yè)所采用，它不需要將殘留物分離出來(lái)進(jìn)行定量。由于該方法比較簡(jiǎn)便，因此可以應(yīng)用于清潔驗(yàn)證的設(shè)計(jì)/開(kāi)發(fā)、確認(rèn)和驗(yàn)證維護(hù)階段，以及各種調(diào)查中。紫外/可見(jiàn)分光光度法在小分子API生產(chǎn)中也可以作為PAT技術(shù)判斷清潔步驟的終點(diǎn)。
總有機(jī)碳（TOC）
TOC法可以用于含有大量有機(jī)碳的殘留物的檢測(cè)。TOC法是通過(guò)將樣品中的碳氧化并測(cè)定所生產(chǎn)的二氧化碳的含量來(lái)完成的。氧化的方法包括紫外法、過(guò)硫酸法和燃燒法，檢測(cè)產(chǎn)生的二氧化碳的技術(shù)包括電導(dǎo)率法、基于膜的電導(dǎo)率法和紅外法。在線和離線的TOC都是可行的。
對(duì)于使用TOC法，目標(biāo)殘留物必須具有足夠的水溶性。用于清潔驗(yàn)證的TOC法通常是將所有的檢測(cè)到的殘留物都假設(shè)成目標(biāo)殘留物。在生產(chǎn)過(guò)程中，如果目標(biāo)殘留物（例如活性成分）在清潔過(guò)程中會(huì)發(fā)生降解，則TOC法是常用的方法。然而，TOC法也可以用于那些活性分成不發(fā)生降解的情況，在這種情況下使用TOC法的理由是分析方法易于開(kāi)發(fā)，而且在TOC檢測(cè)中最差條件的假設(shè)是始終存在的。
TOC也可以用于清潔驗(yàn)證的各個(gè)階段，包括設(shè)計(jì)/開(kāi)發(fā)、確認(rèn)和驗(yàn)證維護(hù)，以及調(diào)查
電導(dǎo)率
電導(dǎo)率測(cè)定是通過(guò)測(cè)定水溶液樣品中解離的離子物質(zhì)來(lái)完成的。在確認(rèn)方案中，電導(dǎo)率讀數(shù)表示為微西門(mén)子/厘米（μS/cm）；用于清潔溶液的控制和監(jiān)測(cè)時(shí)，電導(dǎo)率表示為毫西門(mén)子/厘米（mS/cm）。電導(dǎo)率法經(jīng)常被應(yīng)用于清潔劑殘留（例如堿性或酸性試劑）的檢測(cè)，以及在自動(dòng)清潔工藝（例如CIP）中控制清潔劑的濃度。電導(dǎo)率的讀數(shù)受樣品溫度的影響很大，樣品溫度的調(diào)整、自動(dòng)溫度補(bǔ)償以及指定溫度的電導(dǎo)率/濃度曲線可以用于測(cè)量結(jié)果的校正。
為了將電導(dǎo)率讀數(shù)與清潔劑的濃度相關(guān)聯(lián)，應(yīng)建立特定溫度下的稀釋曲線（電導(dǎo)率對(duì)濃度），這可以通過(guò)測(cè)定特定溫度下接近可接受標(biāo)準(zhǔn)的不同稀釋濃度的電導(dǎo)率完成。
電導(dǎo)率是一種非專屬性的方法，它在一定范圍內(nèi)與樣品溶液的離子濃度線性相關(guān)。分析儀器耐用，而且接受過(guò)相應(yīng)培訓(xùn)的人員可以在生產(chǎn)車間進(jìn)行檢測(cè)。該方法不會(huì)區(qū)分不同的離子，因此如同TOC一樣，所有超過(guò)水的基準(zhǔn)電導(dǎo)率的結(jié)果都是由于污染造成的（例如清潔劑）。
電導(dǎo)率通常說(shuō)明了堿性或酸性清潔劑的存在，測(cè)量電導(dǎo)率是一種判定沖洗終點(diǎn)的好方法，因此對(duì)于清潔工藝的日常監(jiān)控，測(cè)量電導(dǎo)率也是間接證明清潔效果的好方法。
電導(dǎo)也被用于測(cè)定離子型活性成分的殘留，不管是單獨(dú)以水為清潔劑，還是使用了離子型清潔劑，只是所有的電導(dǎo)率響應(yīng)值都應(yīng)作為活性成分的響應(yīng)值（即使其中的一些響應(yīng)值源自清潔劑）。
感觀評(píng)價(jià)
“感觀”評(píng)價(jià)包括目視和其他評(píng)價(jià)，例如嗅覺(jué)。目視檢查通常在清潔驗(yàn)證的各個(gè)階段都有使用，因?yàn)槟恳暆崈羰巧a(chǎn)設(shè)備符合GMP的最低要求。目視檢查是一種非專屬性方法，除非做進(jìn)一步分析，一般無(wú)法鑒定殘留物的性質(zhì)。
需要進(jìn)行培訓(xùn)并建立一個(gè)詳細(xì)的文件，確保不同人員的“目視清潔”是一致的。目檢結(jié)果受距離、角度、光線、表面的性質(zhì)，以及檢查人的視力影響會(huì)有很大不同。使用光學(xué)設(shè)備例如鏡子、遠(yuǎn)程光纖視鏡或管道鏡可有助于目視檢查。
目視檢查程序應(yīng)當(dāng)明確檢查者怎樣處理觀察結(jié)果。目視檢查可以發(fā)現(xiàn)四種不同類型結(jié)果：殘留物、表面異常、異物和水。殘留物是主要關(guān)注點(diǎn)，當(dāng)評(píng)估清潔行程是否合格時(shí)，發(fā)現(xiàn)殘留物就可能意味著目視檢查結(jié)果的失敗。如果可能的話，應(yīng)收集樣品殘留做進(jìn)一步檢測(cè)，以協(xié)助調(diào)查可能的原因。通常，在清潔驗(yàn)證中出現(xiàn)表面異常和異物時(shí)，不認(rèn)為目檢結(jié)果不合格，但必須進(jìn)行進(jìn)一步調(diào)查和糾正。應(yīng)記錄表面異常情況，評(píng)估“是否適合使用”，并糾正發(fā)現(xiàn)的各種問(wèn)題。紅銹在目視檢查中是一種最常見(jiàn)的表面異常，它往往被認(rèn)為是一種預(yù)防性維護(hù)問(wèn)題而不是清潔工藝問(wèn)題。異物及其去除應(yīng)被記錄下來(lái)。同樣，異物是怎么進(jìn)入到設(shè)備當(dāng)中也要進(jìn)行調(diào)查。有時(shí)應(yīng)區(qū)分無(wú)積水（“自排水設(shè)備”）和無(wú)可視水滴（“干燥設(shè)備”），特別是對(duì)于積水，應(yīng)記錄觀察結(jié)果，調(diào)查原因，并說(shuō)明其對(duì)目視檢查以及貯存過(guò)程中的微生物增長(zhǎng)的影響。
如果可能的話，所有的設(shè)備表面被應(yīng)該進(jìn)行目檢。當(dāng)無(wú)法或不宜拆卸設(shè)備時(shí)，或者對(duì)設(shè)備進(jìn)行目檢可能造成人員傷害（如，進(jìn)入限制性空間）時(shí)，可能無(wú)法對(duì)安裝在該設(shè)備上的管線和管道內(nèi)部（盡管可以對(duì)出口處進(jìn)行觀察）進(jìn)行目檢。
應(yīng)建立目檢培訓(xùn)計(jì)劃，檢查人員應(yīng)按照要求接受培訓(xùn)和/或進(jìn)行資格確認(rèn)。如果對(duì)于一些區(qū)域無(wú)法進(jìn)行目檢，則應(yīng)確保他取樣方法（例如沖洗取樣）能夠充分地檢測(cè)出潛在的目標(biāo)殘留物。
作為一種感觀方法，嗅覺(jué)檢查通常只用于設(shè)備取樣時(shí)有一種特殊氣味，應(yīng)對(duì)此進(jìn)行調(diào)查。
09
其他有用的分析技術(shù)
以下其他技術(shù)可能用于清潔驗(yàn)證的不同階段。
pH
pH是一種測(cè)量氫離子濃度的技術(shù)，它可以作為工藝監(jiān)測(cè)手段，特殊是當(dāng)設(shè)備貯存在防腐溶液中（通常為酸性或堿性）時(shí)。pH法也可以用于定性確認(rèn)是否存在正確的清潔溶液。pH法也可以作為電導(dǎo)率測(cè)量的補(bǔ)充，然而在測(cè)量堿性或酸性清潔劑殘留時(shí)，pH法不如比電導(dǎo)率法，因?yàn)閜H值與氫離子濃度呈對(duì)數(shù)關(guān)系，而電導(dǎo)率與離子濃度是直接線性相關(guān)的。此外，也沒(méi)有必要將電導(dǎo)率與pH值直接關(guān)聯(lián)，特別是對(duì)于中性清潔劑。
紅外光譜法（IR）
紅外光譜法包括FTIR（傅立葉變換紅外光譜法）和NIR（近紅外光譜法）。當(dāng)調(diào)查中需要對(duì)可能存在的有機(jī)殘留進(jìn)行鑒別時(shí)，這些技術(shù)最為有用。確認(rèn)過(guò)程中，可采用FTIR聯(lián)合光纖探頭直接測(cè)定設(shè)備表面殘留物的量。
光學(xué)顯微法
光學(xué)顯微法包括掃描電鏡法（SEM），它是一種可以鑒定設(shè)備表面污染物的方法。大多情況下，傳統(tǒng)的光學(xué)顯微法和SEM可以與其他分析技術(shù)聯(lián)合使用，例如X-射線衍射、質(zhì)譜和核磁共振（NMR）。單獨(dú)的顯微技術(shù)可以鑒定殘留物的物理性質(zhì)，但不能鑒定其化學(xué)結(jié)構(gòu)，顯微法的一個(gè)實(shí)際的應(yīng)用是用于評(píng)估和鑒定一個(gè)新的或舊的設(shè)備中的未知污染物，這些技術(shù)對(duì)于在調(diào)查中評(píng)估殘留物是特別有價(jià)值的。
滴定法
滴定法是另一種簡(jiǎn)單但經(jīng)常被人忽視的方法，盡管其在適宜的清潔情況下它可以提供有價(jià)值的信息。滴定法可能是專屬性（磷酸鹽）或非專屬性（例如，對(duì)于所有的陰離子表面活性劑）方法，本方法可能更多地用于確認(rèn)過(guò)程中堿性或酸性清潔劑的檢測(cè)。
重量分析法
重量分析法可以用于設(shè)計(jì)/開(kāi)發(fā)和確認(rèn)中。它多應(yīng)用于測(cè)定小分子API合成過(guò)程中的殘留物，通過(guò)將大量沖洗溶劑或回流溶劑蒸干而測(cè)得。
酶聯(lián)免疫分析法（ELISA）
酶聯(lián)免疫分析法是一種抗原-抗體反應(yīng)，使用特定的化合物測(cè)定殘留物。酶聯(lián)免疫分析法通常局限于生物技術(shù)和生物制品生產(chǎn)中，可以用于設(shè)計(jì)/開(kāi)發(fā)階段以確認(rèn)活性成分的降解，以及任何調(diào)查中。
毛細(xì)管區(qū)帶電泳（CZE）
毛細(xì)管區(qū)帶電泳又被稱為毛細(xì)管電泳，這項(xiàng)技術(shù)是依靠電場(chǎng)里的電荷和摩擦力將殘留物進(jìn)行分離的，通常采用熒光檢測(cè)器進(jìn)行檢測(cè)。CZE主要被應(yīng)用于生物技術(shù)工業(yè)中，在設(shè)計(jì)/開(kāi)發(fā)及確認(rèn)階段檢測(cè)活性成分及其降解物，以及用于調(diào)查。
原子吸收法（AA）和電感耦合等離子體
這兩種技術(shù)都可以用于溶液中的金屬，這種金屬可以是是處方中的一部分或未知?dú)埩粑铮ɡ缫伤萍t銹）。
離子遷移光譜（IMS）
這項(xiàng)技術(shù)是質(zhì)譜的一種類型，它只提供被分析樣本的飛行時(shí)間。由于其分析時(shí)間較短（幾分鐘）而被提倡，可以更多地用于日常監(jiān)測(cè)和放行。
10
微生物檢驗(yàn)方法
1993年美國(guó)FDA清潔驗(yàn)證指南中指出“通過(guò)充分地清潔和設(shè)備存放以控制生物負(fù)載，這對(duì)確保隨后的滅菌和消毒程序達(dá)到必要的無(wú)菌保證水平是非常重要的”。PIC/S指南要求“清潔程序的驗(yàn)證內(nèi)容應(yīng)包括去除前一產(chǎn)品、清潔劑的殘留所帶來(lái)的污染，以及潛在微生物污染的控制”。因此微生物殘留的控制也是清潔驗(yàn)證的一個(gè)重要部分。微生物殘留包括生物負(fù)載和內(nèi)毒素。通常清潔驗(yàn)證方案中應(yīng)包含生物負(fù)載取樣和檢測(cè)，除非有科學(xué)的和基于風(fēng)險(xiǎn)的書(shū)面理由表明不需要進(jìn)行，這可能包括生產(chǎn)上的考慮，例如小分子API生產(chǎn)中所有使用溶劑的工藝、口服制劑生產(chǎn)中使用乙醇進(jìn)行最終淋洗、清潔之后進(jìn)行滅菌，和/或有證據(jù)表明類似的清潔工藝能夠?qū)ξ⑸镉谐浞值目刂啤?/span>
內(nèi)毒素
通常如果下一個(gè)產(chǎn)品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中有內(nèi)毒素檢查項(xiàng)的話，應(yīng)在清潔驗(yàn)證中進(jìn)行內(nèi)毒素檢測(cè)。內(nèi)毒素分析方法通常是藥典方法。驗(yàn)證方案中不進(jìn)行內(nèi)毒素檢測(cè)需要科學(xué)的和基于風(fēng)險(xiǎn)的理由，這可包括生產(chǎn)上的考慮，例如小分子API生產(chǎn)中所有的使用溶劑的工藝，有經(jīng)驗(yàn)證可以減少細(xì)菌內(nèi)毒素的操作步驟，和/或有證據(jù)表明類似的清潔工藝能夠充分控制內(nèi)毒素。
生物負(fù)載
生物負(fù)載的檢測(cè)可以采用淋洗水取樣、棉簽擦試取樣和接觸碟取樣。淋洗水取樣后一般采用薄膜過(guò)濾法過(guò)濾，再將膜貼在適宜的瓊脂培養(yǎng)基上，培養(yǎng)、計(jì)數(shù)。淋洗水取樣檢測(cè)生物負(fù)載的優(yōu)點(diǎn)是它可以提供設(shè)備清潔狀況的全景信息。淋洗水生物負(fù)載檢測(cè)通常采用水系統(tǒng)微生物的檢測(cè)中已確認(rèn)的方法。淋洗水取樣/薄膜過(guò)濾檢測(cè)的最大缺點(diǎn)是沒(méi)有一個(gè)普遍適用的可接受標(biāo)準(zhǔn)。例如，如果取100ml淋洗水用于檢測(cè)，可接受標(biāo)準(zhǔn)為100CFU/ml，而通常可以計(jì)數(shù)的菌落數(shù)應(yīng)不超過(guò)300，這就要求如果符合計(jì)數(shù)標(biāo)準(zhǔn)要求的話樣品的可接受標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)為3CFU/ml。在大多數(shù)情況下這并不是問(wèn)題，可以通過(guò)降低樣品的取樣體積（或稀釋樣品）來(lái)解決。也可以是采用涂布平板閥或倒平板法進(jìn)行微生物檢驗(yàn)。
還有兩種可以直接測(cè)量表面上生物負(fù)載的方法是棉簽擦試法和接觸碟法。對(duì)于棉簽擦試法，應(yīng)將棉簽上的菌釋放出來(lái)，通過(guò)涂布法或傾注法進(jìn)行計(jì)數(shù)。接觸碟法則可直接培養(yǎng)并計(jì)數(shù)。接觸碟法和棉簽擦試法最大的問(wèn)題是可能將產(chǎn)品接觸表面與未知培養(yǎng)基或棉簽中的緩沖溶液相接觸，因此在生產(chǎn)前應(yīng)確認(rèn)培養(yǎng)基或緩沖溶液是否已清除。接觸碟法的另一個(gè)問(wèn)題是需要設(shè)備表面是平整的。
大多數(shù)公司生物負(fù)載檢測(cè)，需要在適宜的培養(yǎng)基中培養(yǎng)并計(jì)數(shù)。這種方法的缺點(diǎn)是只能提供菌落數(shù)而不是單個(gè)細(xì)胞數(shù)量。由于可能會(huì)破壞細(xì)胞，取樣和檢驗(yàn)可能影響報(bào)告的計(jì)數(shù)結(jié)果。另外，雖然生物負(fù)載報(bào)告結(jié)果通常小于20CFU，但一般說(shuō)來(lái)計(jì)數(shù)結(jié)果如果低于20CFU，則說(shuō)明你建立的方法是不科學(xué)的。另外一種方法是使用快速儀器法檢測(cè)微生物，PDA技術(shù)報(bào)告33《新微生物檢驗(yàn)方法的評(píng)價(jià)、驗(yàn)證和執(zhí)行》可以作為討論該快速檢驗(yàn)方法的參考。
來(lái)源：CROU制藥在線
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