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嘉峪檢測(cè)網(wǎng) 2019-08-30 08:34
器審中心于2019年8月27日，發(fā)布美國(guó)賽沛公司的《甲型/乙型流感及呼吸道合胞病毒核酸 聯(lián)合檢測(cè)試劑盒（實(shí)時(shí)熒光 PCR 法）》技術(shù)審評(píng)報(bào)告。從這份報(bào)告中，我們可以了解甲型/乙型流感及呼吸道合胞病毒核酸 聯(lián)合檢測(cè)試劑盒（實(shí)時(shí)熒光 PCR 法）在研發(fā)階段需要做哪些檢測(cè)實(shí)驗(yàn)。
醫(yī)療器械產(chǎn)品注冊(cè)技術(shù)審評(píng)報(bào)告
基本信息
產(chǎn) 品 中 文 名 稱 ：甲型/乙型流感及呼吸道合胞病毒核酸 聯(lián)合檢測(cè)試劑盒（實(shí)時(shí)熒光 PCR 法）
產(chǎn)品英文（原文）名稱：Xpert Xpress Flu/RSV Assay
產(chǎn) 品 管 理 類 別 ：三類
申請(qǐng)人名稱 ：美國(guó)賽沛公司 Cepheid
臨床前研究摘要：
（一）主要原材料
本產(chǎn)品的主要原材料包括：引物和探針、DNA Taq 酶、逆轉(zhuǎn) 錄酶和 dNTPs。引物和探針由申請(qǐng)人設(shè)計(jì)并生產(chǎn)，其他主要原材 料均購自外部供應(yīng)商。各主要原材料均通過質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)并檢驗(yàn)合 格。
試劑盒在企業(yè)內(nèi)部產(chǎn)品放行之前使用企業(yè)參考品進(jìn)行最終 放行檢測(cè)。陰性參考品中含有其他病原體，對(duì)試劑盒的特異性
進(jìn)行質(zhì)控；陽性參考品中含有甲型流感病毒、乙型流感病毒、呼吸道合胞病毒，使用時(shí)稀釋至指定濃度后再進(jìn)行確認(rèn)檢測(cè)， 試劑盒檢測(cè)結(jié)果符合質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)后才可放行使用。
試劑盒包含樣本處理質(zhì)控（SPC）作為內(nèi)部質(zhì)控。SPC 用于 驗(yàn)證流感病毒和 RSV 是否能正確釋放 RNA，從而確保樣本處理 過程的正確性，同時(shí)可以監(jiān)測(cè) RT-PCR 和 PCR 反應(yīng)中與樣本相 關(guān)抑制作用。
（二）生產(chǎn)工藝及反應(yīng)體系研究
申請(qǐng)人通過對(duì)試劑主要生產(chǎn)工藝的研究，確定了最佳生產(chǎn) 工藝。
申請(qǐng)人對(duì)反應(yīng)體系中的引物和探針濃度、DNA Taq 酶、逆轉(zhuǎn) 錄酶、離子和 dNTPs、加樣體積以及 PCR 反應(yīng)體系條件等進(jìn)行篩 選和優(yōu)化，并通過驗(yàn)證最終確定了最佳反應(yīng)體系。
（三）分析性能評(píng)估
本產(chǎn)品分析性能評(píng)估內(nèi)容主要包括：最低檢出限、分析特 異性、分析反應(yīng)性、干擾物質(zhì)、攜帶污染、重復(fù)性等。
在最低檢測(cè)限研究中，申報(bào)產(chǎn)品對(duì)兩種甲型 H3N2 流感毒株、 兩種甲型 2009 H1N1 流感毒株、兩種乙型流感毒株、兩種呼吸 道合胞病毒 A（RSV A）毒株和兩種呼吸道合胞病毒 B（RSV B） 毒株進(jìn)行檢測(cè)并得到各毒株的 LoD 值如下：
|
病毒株 |
LoD（TCID50/mL） |
|
Influenza A/California/7/2009 |
0.02 |
|
Influenza A/Florida/27/2011 |
0.04 |
|
Influenza A/Perth/16/2009 |
0.01 |
|
Influenza A/Victoria/361/2011 |
0.75 |
|
Influenza B/Mass/2/2012 |
0.40 |
|
Influenza B/Wisconsin/01/2011 |
0.19 |
|
RSV A/2/Australia/61 |
0.87 |
|
RSV A/Long/MD/56 |
1.10 |
|
RSV B/Wash/18537/62 |
0.79 |
|
RSV B/9320/MA/77 |
2.30 |
在分析特異性研究中，檢測(cè) 44 種代表常見呼吸道病原體或鼻咽中可能存在的病原體培養(yǎng)基來評(píng)價(jià) Xpert Xpress Flu/RSV Assay 的分析特異性，分析特異性為 100%。各菌株及其濃度見 下表：
|
微生物 |
濃度 |
|
腺病毒 1 型 |
1.12E+06 TCID50/mL |
|
腺病毒 7 型 |
1.87E+05 TCID50/mL |
|
人冠狀病毒 OC43 |
2.85E+05 TCID50/mL |
|
人冠狀病毒 229E |
1.00E+05 TCID50/mL |
|
巨細(xì)胞病毒 |
1.00E+05 TCID50/mL |
|
?？刹《?/span> |
3.31E+07 TCID50/mL |
|
腸病毒 |
3.55E+05 TCID50/mL |
|
EB 病毒 |
7.16E+07 TCID50/mL |
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單純皰疹病毒 |
8.90E+05 TCID50/mL |
|
麻疹病毒 |
6.31E+05 TCID50/mL |
|
人類偏肺病毒 |
1.00E+05 TCID50/mL |
|
流行性腮腺炎病毒 |
6.31E+06 TCID50/mL |
|
人副流感病毒 1 型 |
1.15E+06 TCID50/mL |
|
人副流感病毒 2 型 |
6.31E+05 TCID50/mL |
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人副流感病毒 3 型 |
3.55E+06 TCID50/mL |
|
鼻病毒 1A 型 |
1.26E+05 TCID50/mL |
|
鮑氏不動(dòng)桿菌 |
1.00E+06 CFU/mL |
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洋蔥伯克霍爾德菌 |
3.30E+06 CFU/mL |
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白色念珠菌 |
3.20E+06 CFU/mL |
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近平滑念珠菌 |
3.00E+06 CFU/mL |
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百日咳桿菌 |
3.30E+06 CFU/mL |
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肺炎衣原體 |
1.00E+05 CFU/mL |
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弗氏檸檬酸桿菌 |
3.30E+06 CFU/mL |
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棒狀桿菌屬 |
3.30E+06 CFU/mL |
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大腸埃希菌 |
1.00E+07 CFU/mL |
|
糞腸球菌 |
1.30E+06 CFU/mL |
|
流感嗜血桿菌 |
1.00E+06 CFU/mL |
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羅伊氏乳桿菌 |
1.00E+06 CFU/mL |
|
軍團(tuán)菌屬 |
1.00E+06 CFU/mL |
|
卡他莫拉菌 |
1.00E+07 CFU/mL |
|
結(jié)核分枝桿菌（無毒性） |
1.00E+06 CFU/mL |
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肺炎支原體 |
1.00E+06 CFU/mL |
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腦膜炎奈瑟球菌 |
2.15E+06 CFU/mL |
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粘液奈瑟球菌 |
1.00E+07 CFU/mL |
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痤瘡丙酸桿菌 |
2.40E+07 CFU/mL |
|
銅綠假單胞菌 |
3.70E+06 |
CFU/mL |
|
金黃色葡萄球菌 （產(chǎn)蛋白 A） |
2.20E+06 |
CFU/mL |
|
表皮葡萄球菌 |
3.40E+06 |
CFU/mL |
|
溶血葡萄球菌 |
4.00E+06 |
CFU/mL |
|
無乳鏈球菌 |
3.50E+06 |
CFU/mL |
|
肺炎鏈球菌 |
1.00E+06 |
CFU/mL |
|
釀膿鏈球菌 |
1.00E+07 |
CFU/mL |
|
唾液鏈球菌 |
1.00E+07 |
CFU/mL |
|
血鏈球菌 |
3.10E+06 |
CFU/mL |
在干擾物質(zhì)研究中，對(duì)鼻咽中潛在的干擾物質(zhì)進(jìn)行了研究， 主要有血液、鼻腔分泌物或粘液、鼻和咽喉中用于緩解鼻塞、 鼻腔干燥、刺激或哮喘和過敏癥狀的藥物，以及抗生素和抗病 毒藥物等，其濃度詳見下表。
|
物質(zhì)／分類 |
檢測(cè)濃度 |
|
β腎上腺素支氣管擴(kuò)張劑 |
0.83 mg/mL（即 1 劑／天） |
|
血液 |
2% (v/v) |
|
BD™Universal Viral Transport System |
100% (v/v) |
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Remel M4® |
100% (v/v) |
|
Remel M4RT® |
100% (v/v) |
|
Remel M5® |
100% (v/v) |
|
Remel M6® |
100% (v/v) |
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咽喉含片、口服麻醉藥和鎮(zhèn)痛 藥 |
1.7 mg/mL |
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粘蛋白 |
2.5% (w/v) |
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抗生素，鼻用軟膏 |
10 mg/mL |
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生理鹽水鼻噴霧劑 |
15% (v/v) |
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Anefrin 鼻噴霧劑 |
15% (v/v) |
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PHNY 滴鼻劑 |
15% (v/v) |
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達(dá)菲，抗病毒藥 |
7.5 mg/mL |
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抗菌藥，全身性 |
4µg/mL |
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Zicam 鼻用凝膠 |
15% (w/v) |
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鼻用皮質(zhì)類固醇 |
5µg/mL |
在本研究的檢測(cè)濃度下，所有物質(zhì)均未對(duì)檢測(cè)試劑盒檢測(cè)結(jié)果造成干擾。
在攜帶污染研究中，使用相同的 GeneXpert 模塊檢測(cè)陰性 樣本后立即檢測(cè)加有極高水平甲型流感樣本或極高水平 RSV A 樣本的模擬基質(zhì)。該研究顯示一次性使用、單獨(dú)包裝的檢測(cè)盒 可避免在同一模塊檢測(cè)陰性樣本后對(duì)極高水平陽性樣本的攜帶 污染。
在重復(fù)性實(shí)驗(yàn)中，申請(qǐng)人采用三批成品試劑盒，通過對(duì)陰性樣本、Flu A 低水平陽性、Flu A 中等水平陽性、Flu B 低水 平陽性、Flu B 中等水平陽性、RSV 低水平陽性和 RSV 中等陽性 樣本的檢測(cè)，評(píng)估了試劑盒的重復(fù)性。同時(shí)，一項(xiàng)多中心的研 究檢測(cè)了包括一份陰性質(zhì)控品和濃度為其 LoD 1 倍（低水平陽 性）和 2-3 倍（中等水平陽性）的甲型流感、乙型流感或 RSV 的模擬基質(zhì)各兩份，評(píng)估了批內(nèi)/批間、日內(nèi)/日間、研究中心 間以及不同操作者之間的精密度。結(jié)果顯示試劑盒在儀器間、 批內(nèi)/批間、日內(nèi)/日間、研究中心間無統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著差異。
（四）陽性判斷值或參考區(qū)間研究
申請(qǐng)人通過臨床前研究確定陽性判斷值，并經(jīng)臨床研究采 用臨床樣本驗(yàn)證陽性判斷值。臨床前數(shù)據(jù)來源于一項(xiàng)臨床前研 究，使用該試劑盒與對(duì)比方法進(jìn)行比對(duì)試驗(yàn)，分別檢測(cè)一定例 數(shù)的樣本，通過研究二者的陽性符合率（PPA）和陰性符合率（NPA），以及真陽性結(jié)果的分布和頻率等最終得出，試劑盒對(duì) 于 Flu A（Flu A 1 和 Flu A 2）、Flu B 和 RSV 的陽性判斷值 為 Ct=40。
臨床研究共收集了 2580 份受試者樣本，其中 2167 份納入 最終統(tǒng)計(jì)。相對(duì)于參考試劑盒, 本試劑盒檢測(cè) Flu A 的 PPA、NPA 和總體百分比一致性（OPA）分別為 98.2%、98.0%和 98.0%。試劑盒檢測(cè) Flu B 的 PPA、NPA 和 OPA 分別為 100%、98.5%和98.6 %。試劑盒檢測(cè) RSV 的 PPA、NPA 和 OPA 分別為 99.0%、98.6%和 98.7%。綜合以上研究確認(rèn)，本產(chǎn)品的陽性判斷標(biāo)準(zhǔn)為 Ct 值小于或等于 40 時(shí)為陽性，Ct 大于 40 時(shí)為陰性。
（五）穩(wěn)定性研究
申請(qǐng)人對(duì)本產(chǎn)品的穩(wěn)定性進(jìn)行了研究，確定了在各種條件 下本產(chǎn)品的有效保存時(shí)間。在 2℃、28℃、35℃、45℃和 50℃ 下隨時(shí)間監(jiān)測(cè)三批試劑盒的性能。在不同時(shí)間點(diǎn)分別使用試劑 盒檢測(cè)陰性、低水平陽性和高水平陽性樣本，每批收集了 19 個(gè) 月的陽性和陰性樣本實(shí)時(shí)數(shù)據(jù)。結(jié)果顯示在 2～28℃下，試劑盒 有效期為 18 個(gè)月。
樣本穩(wěn)定性研究：將陰性和陽性樣本儲(chǔ)存于不同溫度下， 在不同的時(shí)間點(diǎn)進(jìn)行檢測(cè)，研究表明鼻咽拭子樣本在使用試劑 盒進(jìn)行檢測(cè)前，可儲(chǔ)存于室溫（15～30℃）下達(dá) 24 小時(shí)和冷藏
（2～8℃）溫度下儲(chǔ)存達(dá) 7 天。
來源：國(guó)家藥品監(jiān)督管理局
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