《中華人民共和國藥典》2015年版四部定義油酸聚氧乙烯酯為油酸和聚乙二醇單酯和雙酯的混合物，反應式見圖 1。
圖 1 油酸聚氧乙烯酯反應方程式
油酸聚氧乙烯酯可由動植物油酸環(huán)氧化或由油酸與聚乙二醇酯化制得。分子式以C17H33COO（CH2CH2O）nH表示。n約為5~6或10[1]。是一種非離子表面活性劑，具有低泡和生物降解性好的特點，化學結構中存在酯鍵，對熱、酸、堿等方面均不夠穩(wěn)定[2]。在藥劑中常作為乳化劑、潤濕劑、增溶劑[3-13]。其結構式見圖 2。
圖 2 油酸聚氧乙烯酯分子結構
市售的油酸聚氧乙烯酯分為460和860兩個型號，不同型號的區(qū)別在于油酸聚氧乙烯酯分子中聚氧乙烯聚合度（n）的不同，其中460的n約為5~6，860的n為10。由于其結構成分復雜，聚合度差異大，導致批間生產(chǎn)差異較大，而作為一種表面活性劑，含量組成變化不僅對乳化性、潤濕性會有明顯不同的效果，而且對化學指標、應用性能、穩(wěn)定性，甚至安全性等均有影響，這在臨床使用中會存在很大的安全風險。本文采用UHPLC-HRMS對其結構進行確證，發(fā)現(xiàn)市售的油酸聚氧乙烯酯不僅僅含有藥典定義的油酸和聚乙二醇單酯和雙酯，還含有大量游離的聚乙二醇單體，而游離聚乙二醇沒有親油端，起不到表面活性劑的功能性作用。以前報道中不同型號的聚氧乙烯酯差別在于雙酯和單酯中聚氧乙烯聚合度的不同[14]；但經(jīng)過研究發(fā)現(xiàn)市售樣品中雙酯和單酯的聚合度差別并不大，而未成酯的游離聚乙二醇聚合度差別較大。以上研究將為科學評價油酸聚氧乙烯酯的質量和功能提供依據(jù)。本研究使用的超高效液相色譜-串聯(lián)質譜法結合了色譜、質譜兩者的優(yōu)點，具有高速、高效、高分辨、微量檢測及分析自動化的性能和技術優(yōu)勢，可同時進行定性和定量檢測，且檢出限低、靈敏度高，對于同時測定多種分子量化合物是一種較好的確證方法[15]。
1 儀器與材料
1.1 儀器
安捷倫1290（Agilent 1290 Infinity UHPLC- 6500 QTOF HRMS）；MassHunter質譜工作站及數(shù)據(jù)分析功能（PCDL、FBF、MFG）。
1.2 材料
油酸聚氧乙烯酯（460）（由sigma公司提供，批號為MKBS8713V）、油酸聚氧乙烯酯（860）（由sigma公司提供，批號為11616MIV）；乙腈、四氫呋喃、正庚烷均為HPLC級；甲酸、乙酸銨均為質譜級。
2 方法
2.1 超高效液相（UHPLC）系統(tǒng)條件
WAX色譜柱（Agilent，30 m×0.32 mm），以水（含0.2%甲酸+5 mmol乙酸銨）（A）-乙腈（B）-四氫呋喃（C）為流動相，流速0. 4 mL·min-1，柱溫45℃，梯度洗脫程序見表 1。
表 1 梯度洗脫程序
2.2 飛行時間質譜（Q-TOF-MS）測定條件
離子化方式: ESI，離子極性: ES+，毛細管電壓：4000 V，MS質量掃描范圍：m/z 100~3200，霧化器壓力：35 psi。
2.3 油酸聚氧乙烯酯(460)/(860)的UHPLCHRMS分析
稱取油酸聚氧乙烯酯樣品各10 mg，用異丙醇-二氯甲烷（20:1）溶解并稀釋至100 mL，制備成油酸聚氧乙烯酯濃度約為10 mg·mL-1的樣品溶液。
取上述配制的油酸聚氧乙烯酯樣品溶液，按照測定條件設置UHPLC和Q-TOF-MS的各測定參數(shù)，采集樣品中油酸聚氧乙烯酯的分子離子和碎片離子信息，并分別進行結構確證。
3 結果
3.1 油酸聚氧乙烯酯（460）質譜結構表征
油酸聚氧乙烯酯（460）主要組分包括聚乙二醇單酯和雙酯（見圖 3），聚氧乙烯在含銨鹽的流動相體系下電離加合形式主要以[M+NH4]+形式存在，聚合分布n=5~19。聚合度n向高值方向變化，在7時達到峰值（見圖 4）。
圖 3 油酸聚氧乙烯酯(460)質譜表征結果
圖 4 油酸聚氧乙烯酯(460)中游離聚乙二醇質譜表征結果
油酸聚氧乙烯酯（460）脂肪酸以油酸為主，但同時含有肉豆蔻酸、棕櫚酸、棕櫚油酸、亞油酸和亞麻酸。主要以正離子模式電離，在含銨鹽的流動相體系下電離加合形式主要以[M+NH4]+、[M+2NH4]2+、[M+3NH4]3+和[2M+NH4]+形式存在；隨著聚合度的增高，二價和三價離子比例增高，見表 2。
表 2 油酸聚氧乙烯酯(460)質譜表征結果
3.2 油酸聚氧乙烯酯（860）質譜結構表征
油酸聚氧乙烯酯（860）主要組分包括聚乙二醇及其單酯和雙酯（見圖 5）；游離聚乙二醇在含銨鹽的流動相體系下電離加合形式主要以[M+NH4]+形式存在，聚合分布n=3~50。聚合度分布變化較?。ㄒ妶D 6）。
圖 5 油酸聚氧乙烯酯(860)質譜表征結果
圖 6 油酸聚氧乙烯酯（860）中游離聚乙二醇質譜表征結果
油酸聚氧乙烯酯（860）脂肪酸以油酸為主，但同時含有肉豆蔻酸、棕櫚酸、棕櫚油酸、亞油酸和亞麻酸。主要以正離子模式電離，在含銨鹽的流動相體系下電離加合形式主要以[M+NH4]+、[M+2NH4]2+、[M+3NH4]3+和[2M+NH4]+形式存在；隨著聚合度的增高，二價和三價離子比例增高（見表 3）。
表 3 油酸聚氧乙烯酯(860)質譜表征結果
4 討論
《中華人民共和國藥典》2015年版中規(guī)定油酸聚氧乙烯酯為油酸和聚乙二醇單酯和雙酯的混合物。但在本次研究中發(fā)現(xiàn)油酸聚氧乙烯酯除了單酯和雙酯外，還有大量的游離聚乙二醇。油酸聚氧乙烯酯作為一種表面活性劑，其表面活性須同時具有親水端和親油端。在油酸聚氧乙烯單酯和雙酯中，脂肪酸酯是親油端，聚乙二醇（PEG）的醇羥基作為親水端發(fā)揮作用。但游離聚乙二醇沒有親油端，起不到表面活性劑的作用。在以前的報道中未發(fā)現(xiàn)油酸聚氧乙烯酯中存在大量的游離聚乙二醇。
油酸聚氧乙烯酯（460）和油酸聚氧乙烯酯（860）是兩個不同的型號，以前報道中聚氧乙烯酯分子量差別在于雙酯和單酯中聚氧乙烯聚合度的不同，作為表面活性劑，從結構上分析油酸聚氧乙烯（860）成酯的聚氧乙烯聚合度應該更高，其親水性也應該更強；經(jīng)過研究發(fā)現(xiàn)市售樣品中油酸聚氧乙烯（860）比油酸聚氧乙烯酯（460）雙酯和單酯中聚氧乙烯的聚合度（n）普遍只增加了10個，但游離聚乙二醇的聚合度差別更大，油酸聚氧乙烯酯（460）游離聚乙二醇聚合度為5~19，而油酸聚氧乙烯酯（860）游離聚乙二醇聚合度為3~50。由于游離聚乙二醇并不能起到表面活性劑的作用，提示在今后的標準中應加入游離聚乙二醇的含量測定項目。兩個型號油酸聚氧乙烯酯中脂肪酸組成結構差別不是很大，主要都是以油酸為主，同時都含有肉豆蔻酸、棕櫚酸、棕櫚油酸、亞油酸和亞麻酸。
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