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硅凝膠瘢痕貼的生物相容性

嘉峪檢測網 2019-12-03 11:06

〔摘　要〕

目的　對硅凝膠瘢痕貼進行生物學評價，為產品臨床應用提供安全依據。

方法　參照GB/T 16886《醫(yī)療器械生物學評價標準》的要求，對硅凝膠瘢痕貼進行細胞毒性試驗、皮膚刺激試驗和遲發(fā)型超敏反應試驗。

結果　樣品的細胞反應為1級，無皮膚刺激反應和致敏反應。

結論　硅凝膠瘢痕貼具有良好的生物相容性。

皮膚損傷是瘢痕形成的主要原因，而皮膚擦傷、燒傷、感染及外科手術等都能造成皮膚損傷，形成瘢痕。瘢痕不僅影響著患者局部外觀或者功能，而且常給患者帶來局部瘙癢、不適以及疼痛等慢性癥狀，從而影響患者的日常生活。醫(yī)用硅膠作為一種高分子有機化合物，有著較好的物理和化學穩(wěn)定性。從20世紀80年代起，硅凝膠就被用于預防和治療增生性瘢痕[1]。硅凝膠產品不僅能夠有效地預防病理性瘢痕的形成，而且可使瘢痕變軟、變薄[2]。但硅凝膠貼類產品在防治瘢痕時，瘢痕部位可能出現皮疹、瘙癢及感染等并發(fā)癥。為了系統(tǒng)評估硅凝膠瘢痕貼的生物相容性，本研究按照GB/T 16886《醫(yī)療器械生物學評價標準》的要求，對硅凝膠瘢痕貼生物相容性進行安全性評價。

1 材料與方法

1.1 材料

小鼠成纖維細胞L-929（ATCC），胎牛血清（Gibco），胰蛋白酶（Gibco），MTT（美國Sigma公司），MEM（Gibco），完全弗氏佐劑（美國 Sigma公司），成年新西蘭兔（華蘭生物疫苗有限公司，合格證號：41001700005019），體重2.2~2.7kg，健康初成年白化豚鼠（華蘭生物疫苗有限公司，合格證號：41001700005096），體重300~500g。

1.2 方法

1.2.1 體外細胞毒性試驗

無菌條件下取樣品，按照1.25cm²/ml的浸提比例制備樣品浸提液。將處于對數生長期的L-929細胞用胰酶消化后，加入細胞培養(yǎng)液，調整細胞濃度為1×104個/ml。將配置好的細胞懸液接種于96孔板中，每孔100μl。置5% CO₂培養(yǎng)箱37℃，培養(yǎng)24h后，棄去原培養(yǎng)液?？瞻讓φ战M加入新鮮MEM細胞培養(yǎng)液，供試品組加入樣品浸提液，陰性對照組加入高密度聚乙烯浸提液，陽性對照組加入含5%二甲基亞砜的培養(yǎng)液，每孔100μl，置CO₂培養(yǎng)箱繼續(xù) 培養(yǎng)72h。更換培養(yǎng)液72h后，將上述各組置于顯微鏡下觀察細胞形態(tài)，并在每孔加入5g/L的MTT溶液20μl。繼續(xù)培養(yǎng)4h后棄去孔內液體，加入150μl 的DMSO，振蕩10min后，在570nm和630nm波長下用酶標儀測定吸光度，并計算相對增殖率=試驗組吸光值/空白對照組吸光值×100%^[3]。按表1進行分級標準判定。

表1　細胞毒性反應分級

硅凝膠瘢痕貼的生物相容性

1.2.2 皮膚刺激試驗

取新西蘭兔3只，于試驗前12h，剃除家兔背部脊柱兩側被毛，將其平均劃分為4個試驗區(qū)域，其中左上和右下為試驗部位，左下和右上為對照部位。將樣品裁剪成2.5cm×2.5cm大小，直接貼敷于試驗部位。對照部位放置相同大小的紗布塊?？噹Х忾]固定4h后去除。并在去除固定后1、24、48、72h觀察皮膚紅斑和水腫反應。樣品的原發(fā)性刺激記分是將每只動物在每一規(guī)定時間試驗材料引起的紅斑與水腫的原發(fā)性刺激記分相加后再除以觀察總數之和計算得出的。而樣品的原發(fā)性刺激指數是試驗樣品原發(fā)性刺激記分與對照的原發(fā)性刺激記分之差^[4]。

1.2.3 遲發(fā)型超敏反應試驗

取豚鼠15只，分為試驗組10只和對照組5只，于試驗前12h剃除動物左上背被毛。將樣品裁剪成2.5cm×2.5cm大小，直接貼敷于試驗部位并用繃帶固定。對照組使用相同大小的紗布，并固定。6h后，去除包扎。1周中連續(xù)3d 重復此步驟，連續(xù)3周。最后一次誘導敷貼14d后，去除豚鼠右上背被毛，將樣品貼敷6h后去除。對照組使用紗布做相同操作。于去除敷貼后24，48h觀察皮膚致敏反應情況，并評級^[4]。

2 結果

2.1 細胞毒性試驗

倒置顯微鏡下觀察可見，除陽性組細胞數量減少，細胞形態(tài)呈球形，其他組別細胞生長狀態(tài)良好，形態(tài)未見異常。MTT結果顯示，樣品的細胞增殖率為92%。見表2。

表 2　試驗樣品的細胞相對增殖率

硅凝膠瘢痕貼的生物相容性

2.2 皮膚刺激試驗

試驗觀察結果表明，除了去除固定1h時可見輕微皮膚紅斑和水腫，剩下在時間點均未見動物皮膚出現紅斑和水腫，即樣品的原發(fā)性刺激指數為0。

2.3 遲發(fā)型超敏反應

試驗觀察結果表明，動物在去除固定后24h和48h，皮膚均未出現明顯改變，表明試驗樣品無遲發(fā)型超敏反應。

3 討論

手術后常常留下嚴重的增生性瘢痕，給患者身心健康帶來嚴重的影響。因此預防和治療增生性瘢痕顯得至關重要。有研究認為，硅膠敷料可以通過“水合作用”抑制瘢痕增生^[5]。使用硅凝膠瘢痕貼后，皮膚水分蒸發(fā)減少，使皮膚角質層水分增多，從而軟化瘢痕。此外，含水的角質層有利于提高氧的通透性，減少了低氧對瘢痕生長的刺激，從而進一步抑制了瘢痕的增生。本研究按照 GB/T 16886《醫(yī)療器械生物學評價標準》的要求，采用細胞毒性、皮膚刺激、遲發(fā)型超敏反應對硅凝膠瘢痕貼進行生物學安全性評價。結果表明硅凝膠瘢痕貼具有良好的生物相容性。

【參考文獻】

［1］Perkins K,Davey RB,Wallis KA.Silicone gel:a new treatment for burn scars and contractures[J].Burns Ind Therm Inj,1983, 9(3):201-204.

［2］Meaume S,Le Pillouer-Prost A, Richert B,et al.Management of scars: updated practical guidelines and use of silicones[J].Eur J Dermatol,2014, 24(4):435-443.

［3］國家藥品監(jiān)督管理局.GB/T16886.10-2005《醫(yī)療器械生物學評價第5部分：體外細胞毒性試驗》[S].北京：中國標準出版社，2003.

［4］國家藥品監(jiān)督管理局.GB/T16886.10-2005《醫(yī)療器械生物學評價第10部分：刺激與遲發(fā)型超敏反應試驗》[S].北京：中國標準出版社，2005.

［5］Mustoe TA.Evolution of silicone therapy and mechanism of action in scar management[J].Aesthetic Plast Surg,2008,32(1): 82-92.

作者：韓穎，徐玉茵，田林奇，周靜，劉康博

單位：河南省醫(yī)療器械檢驗所

來源：Internet

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