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嘉峪檢測(cè)網(wǎng) 2019-12-05 15:21
所謂藥典方法，顧名思義，藥典專論所收載的方法，但是否每個(gè)人都知道，藥典方法考慮到各個(gè)實(shí)驗(yàn)室的差異，有一定的可調(diào)范圍。下面我們具體的來(lái)探討一下這個(gè)問(wèn)題吧!
一、中國(guó)藥典2015規(guī)定
0512高效液相色譜法規(guī)定如下：品種正文項(xiàng)下規(guī)定的條件除填充劑種類、流動(dòng)相組分、檢測(cè)器類型不得改變外，其余如色譜柱內(nèi)徑與長(zhǎng)度、填充劑粒徑、流動(dòng)相流速、流動(dòng)相組分比例、柱溫、進(jìn)樣量、檢測(cè)器靈敏度等，均可適當(dāng)改變，以達(dá)到系統(tǒng)適用性試驗(yàn)的要求。調(diào)整流動(dòng)相組分比例時(shí)，當(dāng)小比例組分的百分比例 X 小于33%時(shí)，允許改變范圍為0.7X ?1.3X ; 當(dāng)X大于33%時(shí)，允許改變范圍為X —10%?X+ 10%。
由上文可知，中國(guó)藥典專論方法除填充劑種類、流動(dòng)相組分（比例調(diào)整在規(guī)定范圍內(nèi)）、檢測(cè)器類型不得改變外，其他條件改變了，還是認(rèn)為是藥典方法。但中國(guó)藥典沒(méi)有規(guī)定方法確認(rèn)之說(shuō)，所以，即使是中國(guó)藥典方法，也是應(yīng)該按分析方法驗(yàn)證的相關(guān)規(guī)定進(jìn)行全套的方法驗(yàn)證。
二、美國(guó)藥典41規(guī)定
USP41 <621> CHROMATOGRAPHY 規(guī)定如下：
為符合系統(tǒng)適用性的要求而調(diào)整的操作條件是允許的，除非專論項(xiàng)下另有規(guī)定，下面為所列的最大的可調(diào)范圍，這些調(diào)整需要額外的確認(rèn)數(shù)據(jù)。為確認(rèn)新條件對(duì)方法的適用性，評(píng)估調(diào)整對(duì)相關(guān)分析性能特征存在的潛在影響。多條件的調(diào)整，將對(duì)系統(tǒng)性能產(chǎn)生累積影響，實(shí)施前需仔細(xì)考慮。
1、pH of mobile phase(HPLC): 流動(dòng)性緩沖液的pH:±0.2 units，適用梯度及等度。
2、Concentration of salts in buffer (HPLC): ±10%（pH允許情況下），適用梯度及等度。
3、Ratio of componentsin mobile phase (HPLC):
流動(dòng)相中組分（≤50%）可以在此比例上再調(diào)節(jié)±30%，且任一組分比例的調(diào)節(jié)不應(yīng)超過(guò)±10%（相對(duì)于總的流動(dòng)相），含三組分的流動(dòng)相的調(diào)節(jié)可以分組分進(jìn)行，含雙組分的流動(dòng)相的調(diào)節(jié)可在最小的組分進(jìn)行，雙組份和三組分的調(diào)節(jié)實(shí)例如下：
雙組分：例如流動(dòng)相50:50，其中一組分50%的30%是15%，但是它超過(guò)了占總體比例±10%的規(guī)定，所以這個(gè)流動(dòng)相比例的調(diào)節(jié)范圍應(yīng)以±10%為限，可以在不超過(guò)40:60~60:40的范圍之間調(diào)節(jié)。再例如流動(dòng)相比例為2:98，其中小組分2%的30%是0.6%，這個(gè)值不超過(guò)占總體比例±10%的規(guī)定，此流動(dòng)相的比例可以在不超過(guò)1.4:98.6~2.6:97.4的范圍之間調(diào)節(jié)。
三組分：例如流動(dòng)相60:35:5，它的次組分35%的30%是10.5%，但是它超過(guò)了占總體比例±10%的規(guī)定，所以這個(gè)流動(dòng)相比例中的次組分的調(diào)節(jié)范圍應(yīng)以±10%為限。對(duì)于最小組分5%的30%是1.5%?？梢栽诓怀^(guò)50:45:5~70:25:5或58.5:35:6.5~61.5:35:3.5的范圍之間調(diào)節(jié)。
4、Wavelength ofUV-visible detector (HPLC): 專論中規(guī)定的檢測(cè)波長(zhǎng)不允許改變，檢測(cè)器供應(yīng)商的程序或另一個(gè)驗(yàn)證程序來(lái)說(shuō)明，波長(zhǎng)檢測(cè)誤差，最多不得超過(guò)±3nm。
5、Stationary phase
Column length (GC): 可以在±70%范圍內(nèi)調(diào)節(jié)。
Column length (HPLC): 見(jiàn)粒徑項(xiàng)下。
Column inner diameter (HPLC): 如果線速度保持恒定，可以調(diào)整。見(jiàn)HPLC流速。
Column inner diameter (GC): 最大可調(diào)整至±50%。
Film thickness (capillaryGC): 最大可在−50% to100%調(diào)整。
6、Particle size(HPLC): 等度洗脫：粒度和柱長(zhǎng)均可以修改，但柱長(zhǎng)與粒度的比值（L/dp）恒定或在規(guī)定柱長(zhǎng)與粒度的比值的-25%~+50%范圍內(nèi)。或者（當(dāng)粒度通過(guò)表面多孔顆粒調(diào)整時(shí)），其它柱長(zhǎng)（L）和粒度（dp）的柱子可以使用，但理論塔板數(shù)N應(yīng)在規(guī)定柱的-25%~+50%范圍內(nèi)。如果調(diào)節(jié)導(dǎo)致更高的理論塔板數(shù)時(shí)應(yīng)注意，這樣將產(chǎn)生更小的峰容量，應(yīng)通過(guò)縮小額外柱外峰拓寬的因素調(diào)整，例如儀器的管路、檢測(cè)器的體積、采樣速率和進(jìn)樣體積。當(dāng)專論中未規(guī)定粒度時(shí)，該比值應(yīng)采用規(guī)定柱的最大粒度計(jì)算。
7、Particle size (GC): 如果色譜圖的符合系統(tǒng)適用性要求以及粒徑范圍比相同，粒度大小可以從大變小或從小變大，粒徑范圍比的定義是最大粒度直徑除以最小粒度直徑。
8、Flow rate (GC): 流速可以最大在±50%調(diào)整。（備注：如果專論中規(guī)定了線性速度參數(shù)，如果載氣系統(tǒng)可以按設(shè)置的控制，線性速度可以在 +50%~ −25%范圍內(nèi)調(diào)整）
9、Flow rate (HPLC)：當(dāng)粒度改變時(shí)，流速也許需要調(diào)整，因?yàn)闉檫_(dá)到相同的性能，小粒度的柱子需要更高的線速度（測(cè)量通過(guò)較少塔板高度），流速、柱內(nèi)徑、粒度通過(guò)下面公式換算。
F2=F1×[(dc22×dp1)/(dc12×dp2)]
其中：
|
F1 |
= 專論中規(guī)定的流速； |
|
F2 |
= 調(diào)整后的流速； |
|
dc1 |
=專論中規(guī)定的柱內(nèi)徑； |
|
dc2 |
=使用的柱子的柱內(nèi)徑； |
|
dp1 |
=專論中規(guī)定的柱子粒度； |
|
dp2 |
=使用的柱子粒度。 |
對(duì)于等度洗脫，如果粒度從≥3μm變化到＜3μm時(shí)，將增加線速度（通過(guò)調(diào)整流速），如果柱效不下跌20%以上，相同地，如果粒度從＜3μm變化到≥3μm時(shí)，應(yīng)減少線速度（流速）來(lái)避免柱效降低20%以上。梯度洗脫：流速、柱內(nèi)徑、粒度將不允許調(diào)整。另外，流速可以在±50%調(diào)整。（只適用于等度洗脫）
三、歐洲藥典9 規(guī)定
EP 2.2.46 ChromatographicSeparation Techniques 規(guī)定如下：
1、液相色譜-等度洗脫
（1）Composition of themobile phase：小組分的數(shù)量可以在相對(duì)±30%或絕對(duì)±2%范圍內(nèi)調(diào)節(jié)，兩者取其大。（例如：流動(dòng)相中次組分占10%，按相對(duì)±30%它的可調(diào)范圍在7%~13%，按絕對(duì)±2%它的可調(diào)范圍在8%~12%，取較大者7%~13%；再例如：次組分為5%時(shí)，按相對(duì)±30%它的可調(diào)范圍在3.5%~6.5%，按絕對(duì)±2%它的可調(diào)范圍在3%~7%，取較大者3%~7%），但須確保組分的絕對(duì)調(diào)節(jié)量不得超過(guò)10%。
（2）pH of the aqueouscomponent of the mobile phase：除非專論中另有規(guī)定，用于配制流動(dòng)相的pH可以在規(guī)定的值或范圍的±0.2以內(nèi)調(diào)節(jié)。如果待測(cè)品為非電離物質(zhì)（中性物質(zhì)），pH可在±1.0范圍內(nèi)調(diào)節(jié)。
（3）Concentration ofsalts in the buffer component of a mobile phase：用于配制流動(dòng)相的含水緩沖液的鹽的濃度可在±10%范圍內(nèi)調(diào)節(jié)。
（4）Flow rate：一般調(diào)節(jié)范圍為±50%，若柱尺寸改變了，流速可以更大范圍內(nèi)調(diào)節(jié)，具體可按下述公式來(lái)計(jì)算。
（5）Column parameters：
Stationary phase：固定相的屬性不能改變（例如：不能用C8來(lái)代替C18）；
particle size：最多可減小50%，不允許增加。
Column dimensions:長(zhǎng)度可以±70%范圍內(nèi)調(diào)節(jié)，內(nèi)徑可在±25%范圍內(nèi)調(diào)節(jié)。當(dāng)柱的尺寸改變時(shí)，流速通過(guò)下面公式進(jìn)行調(diào)節(jié)。
F2=F1×[(dc22×dp1)/(dc12×dp2)]
其中：
|
F1 |
= 專論中規(guī)定的流速，ml/min； |
|
F2 |
= 調(diào)整后的流速，ml/min； |
|
l1 |
=專論中規(guī)定的柱長(zhǎng)，mm； |
|
l2 |
=使用的柱子的柱長(zhǎng)，mm； |
|
d1 |
=專論中規(guī)定的柱內(nèi)徑，mm； |
|
d2 |
=使用的柱子的內(nèi)徑，mm。 |
（6）Temperature：當(dāng)專論中規(guī)定了柱溫時(shí)，可以±10℃范圍內(nèi)調(diào)節(jié)，除非另有規(guī)定。
（7）Detector wavelength：不允許改變。
（8）Injection volume：若待檢峰的靈敏度和重復(fù)性好的話可以減小，不允許提高。
2、液相色譜-梯度洗脫
梯度洗脫的液相條件調(diào)節(jié)需比等度洗脫的更加慎重。流動(dòng)相的組成/梯度洗脫可以在符合下述條件的前提下進(jìn)行小范圍的調(diào)節(jié)：
滿足系統(tǒng)適應(yīng)性的條件；
主峰的出峰時(shí)間在原定保留時(shí)間的±15%以內(nèi)；
流動(dòng)相中最終組分的洗脫能力的強(qiáng)度不得弱于原規(guī)定組分；
如果系統(tǒng)適應(yīng)性的條件達(dá)不到，則通常首選考慮滯留體積或更換柱子。
（1）Dwell volume滯留體積（死體積）：儀器的結(jié)構(gòu)將會(huì)大大的改變分離度、保留時(shí)間、相對(duì)保留時(shí)間，如果這些發(fā)生，是由于滯留體積過(guò)多。專論中通常在梯度洗脫時(shí)先進(jìn)行等度洗脫。考慮到方法開(kāi)發(fā)系統(tǒng)和實(shí)際系統(tǒng)的滯留體積的不同，所以梯度洗脫的時(shí)間應(yīng)該足夠。所以使用者在進(jìn)行方法確認(rèn)時(shí)應(yīng)確認(rèn)等度洗脫的時(shí)間。如果洗脫時(shí)的滯留體積在專論中有規(guī)定，則開(kāi)始洗脫的時(shí)間點(diǎn)（t min）應(yīng)該被調(diào)節(jié)時(shí)間點(diǎn)(tc min)替代。用下面公式計(jì)算
式中：
D：滯留體積，ml；
D0：方法開(kāi)發(fā)時(shí)的滯留體積，ml；
F：流速 ml/min。
如果方法的驗(yàn)證沒(méi)有包括該步驟，用于上述目的的等度的描述可以被省略。
（2）pH of the aqueouscomponent of the mobile phase含水相的流動(dòng)相pH：不允許調(diào)節(jié)。
（3）Concentration of salts in the buffer component of a mobile phase流動(dòng)相中緩沖液鹽的濃度：不允許調(diào)節(jié)。
（4）Flow rate流速：當(dāng)柱子的內(nèi)徑改變時(shí)，調(diào)節(jié)是可以接受的，具體見(jiàn)流速公式。
（5）Column parameters柱參數(shù)
Stationary phase固定相：固定相的屬性不能改變（例如：不能用C8來(lái)代替C18）；
particle size粒徑，不允許調(diào)節(jié)。
Column dimensions柱尺寸：長(zhǎng)度可以±70%范圍內(nèi)調(diào)節(jié)，內(nèi)徑可在±25%范圍內(nèi)調(diào)節(jié)。當(dāng)柱的尺寸改變時(shí)，流速按照下面的公式進(jìn)行計(jì)算并調(diào)節(jié)。
（6）Temperature柱溫：當(dāng)專論中的檢測(cè)方法規(guī)定了具體的柱溫時(shí)，溫度可在±5℃范圍內(nèi)調(diào)節(jié)，除非另有規(guī)定。
（7）Detector wavelength檢測(cè)波長(zhǎng)：不允許改變。
（8）Injection volume進(jìn)樣體積：若待檢峰的靈敏度和重復(fù)性可滿足的話可以減小，不允許提高。
3、Gas chromatography氣相色譜
（1）Column parameters柱參數(shù)
Stationary phase固定相：粒徑最多可減少50%，不允許增加（填充柱）。膜厚可以在-50%~+100%范圍內(nèi)調(diào)節(jié)（毛細(xì)管柱）。
Column dimensions柱尺寸：色譜柱長(zhǎng)度可以±70%范圍內(nèi)調(diào)節(jié)，色譜柱內(nèi)徑可以在±50%范圍內(nèi)調(diào)節(jié)。
（2）Flow rate流速（GC）：可以在±50%范圍內(nèi)調(diào)節(jié)。
（3）Temperature柱溫（GC）：可以在±10%范圍內(nèi)調(diào)節(jié)。
（4）Injection volumeand split volume進(jìn)樣體積和分流比：若待檢峰的靈敏度和重復(fù)性可以滿足的話，可以調(diào)節(jié)。
USP與EP規(guī)定的可調(diào)范圍基本一致，相較于梯度洗脫，EP藥典更加謹(jǐn)慎，基本上不允許進(jìn)行過(guò)多的調(diào)整。此外藥典方法，EP與USP均要求進(jìn)行方法確認(rèn)，并且明確指出，藥典方法可以不進(jìn)行全套的驗(yàn)證。
來(lái)源：藥事縱橫
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