您當(dāng)前的位置：檢測資訊 > 科研開發(fā)
嘉峪檢測網(wǎng) 2020-02-28 10:35
作者：李潔 , 李同輝 , 梁改玲
河南省食品藥品檢驗所, 鄭州 450018
摘要：
目的: 對鹽酸氮芥酊產(chǎn)生的降解產(chǎn)物進(jìn)行結(jié)構(gòu)解析，分析兩種測定方法產(chǎn)生結(jié)果差異的原因和降解產(chǎn)物來源。方法: 采用碘量法和氣相色譜法測定降解產(chǎn)物的含量，采用GC-MS法對降解產(chǎn)物結(jié)構(gòu)進(jìn)行解析。結(jié)果: 碘量法測定結(jié)果較氣相色譜法偏高，降解產(chǎn)物為2-氯乙基-（2-乙氧基）-甲基胺，是由于鹽酸氮芥與輔料發(fā)生反應(yīng)而產(chǎn)生。結(jié)論: 降解產(chǎn)物消耗滴定液使碘量法測定結(jié)果偏高，氣相色譜法專屬性強，建議生產(chǎn)企業(yè)進(jìn)一步研究該品種生產(chǎn)工藝和貯藏條件，避免或降低樣品與輔料發(fā)生反應(yīng)。
關(guān)鍵詞：鹽酸氮芥酊 碘量法 氣相色譜法 氣質(zhì)聯(lián)用法 降解產(chǎn)物
鹽酸氮芥酊為鹽酸氮芥的無水乙醇溶液, 臨床上主要用于治療白癜風(fēng)[1]。按照國家藥典委員會2015年國家藥品標(biāo)準(zhǔn)提高行動計劃要求, 需對該品種現(xiàn)行質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)[2]進(jìn)行修訂?，F(xiàn)行標(biāo)準(zhǔn)含量測定方法為碘量法, 筆者將其修訂為氣相色譜法[3]時, 檢出降解產(chǎn)物, 降解產(chǎn)物含量越高, 兩種方法測定結(jié)果差異也越大, 本研究對該降解產(chǎn)物采用GC-MS進(jìn)行結(jié)構(gòu)解析, 推測降解產(chǎn)物結(jié)構(gòu), 分析兩種測定方法產(chǎn)生結(jié)果差異的原因和降解產(chǎn)物來源, 優(yōu)化產(chǎn)品質(zhì)量控制手段。
1 儀器與試藥
1.1 儀器
Mettler T5電位滴定儀(瑞士Mettler Toledo公司, Mettler Toledo DMI 140-SC鉑電極); Agilent 7890B氣相色譜儀(G4513A自動進(jìn)樣器, 美國Agilent公司); Agilent 7010B GC/MS Triple Quad氣質(zhì)聯(lián)用儀(美國Agilent公司); Mettler Toledo XPE 205電子天平(瑞士Mettler Toledo公司)。
1.2 試藥
鹽酸氮芥酊(批號:171005005、161205006、160405001、150905002、150905003和150805001, 規(guī)格:50 mL:25 mg, 均由河南某企業(yè)提供); 鹽酸氮芥原料(批號:180128001, 含量99.9%, 由制劑生產(chǎn)企業(yè)提供); 0.05 mol·L-1碘滴定液和0.1 mol·L-1硫代硫酸鈉滴定液(均由本所配制標(biāo)定), 無水乙醇為分析純。
2 方法與結(jié)果
2.1 碘量法
精密量取本品50 mL, 置碘量瓶中, 加碳酸氫鈉0.1 g, 精密加入硫代硫酸鈉滴定液(0.1 mol·L-1)20 mL與水30 mL, 搖勻, 靜置2.5 h(溫度控制在25 ℃±2 ℃), 照電位滴定法用碘滴定液(0.05 mol·L-1)滴定, 并將滴定結(jié)果用空白試驗校正。
2.2 氣相色譜法
2.2.1 色譜條件[4]
色譜柱:DB-225色譜柱(Agilent, 0.53 mm× 30 m×1μm), 程序柱溫:起始溫度135 ℃, 維持1 min, 以8 ℃·min-1的速率升溫至160 ℃, 維持6 min; 進(jìn)樣口溫度:200 ℃, 檢測器溫度:250 ℃, 氮氣流速:3 mL·min-1, 分流進(jìn)樣, 分流比: 5:1, 進(jìn)樣量:1 μL。
2.2.2 測定方法
取本品作為供試品溶液, 精密量取1 µL, 注入氣相色譜儀, 見圖 1; 另精密稱取以五氧化二磷為干燥劑, 60 ℃減壓干燥至恒重的鹽酸氮芥原料適量, 用無水乙醇稀釋制成每1 mL中約含0.5 mg的溶液, 同法測定, 按外標(biāo)法以峰面積計算。
1. 降解產(chǎn)物；2. 氮芥。
圖 1 鹽酸氮芥酊的GC圖（DB-225色譜柱）
2.3 測定結(jié)果
對2015年、2016年、2017年生產(chǎn)的6批樣品在2018年7月(A)和2018年3月(B)分別采用碘量法和氣相色譜法進(jìn)行考察, 結(jié)果碘量法均較氣相色譜法偏高, 見圖 2。
圖 2 2018年7月（A）和2018年3月（B）兩種方法測定結(jié)果比較
每批樣品的GC色譜圖均顯示檢出降解產(chǎn)物, 按歸一化法計算降解產(chǎn)物含量, 樣品降解產(chǎn)物含量高的批次, 兩種方法測定結(jié)果差異較大, 樣品降解產(chǎn)物含量低的批次, 兩種方法測定結(jié)果差異較小, 見圖 3。
圖 3 6批樣品降解產(chǎn)物含量和兩種方法測定結(jié)果差值比較
2.4 GC-MS方法
2.4.1 GC色譜條件[5]
色譜柱: D B - 5 M S (A g i l e n t, 3 0 m × 0. 2 5 mm×0.25µm); 程序升溫:50℃維持1 min, 以15℃·min-1升溫至150℃維持5 min, 再以30℃·min-1升溫至230℃維持1 min; 載氣:氦氣(純度≥99.999%); 進(jìn)樣口溫度:230 ℃, 流速:1.0 mL·min-1;進(jìn)樣量:1 µL, 進(jìn)樣方式:分流進(jìn)樣, 分流比:10:1。
2.4.2 質(zhì)譜條件[6]
電子轟擊離子源(EI), 轟擊電壓:70 eV; 離子源溫度:230 ℃, 傳輸線溫度:280 ℃; 掃描模式:全掃描, 掃描質(zhì)量范圍:20~220。
2.4.3 測定結(jié)果
取樣品直接進(jìn)樣, 在保留時間為6.508 min處檢出降解產(chǎn)物峰, 見圖 4。
1. 降解產(chǎn)物；2. 氮芥。
圖 4 鹽酸氮芥酊總離子流圖（DB-5MS色譜柱）
采用GC法(圖 1), DB-225色譜柱檢出降解產(chǎn)物峰在主峰前, 采用GC-MS法(圖 4), DB5MS色譜柱檢出降解產(chǎn)物峰在主峰后, 為了確保2根色譜柱檢出的雜質(zhì)峰為同一雜質(zhì)峰, 使用DB5MS色譜柱在GC色譜儀上測定, 結(jié)果檢出的降解產(chǎn)物峰也在主峰后, 計算批號為160405001樣品在2根色譜柱上檢出降解產(chǎn)物峰面積與主成分氮芥峰面積比值, DB-225色譜柱為0.55, DB-5MS色譜柱為0.48, 可以確定在GC-MS上主峰后的降解產(chǎn)物與GC上主峰前的降解產(chǎn)物為同一物質(zhì)。
2.5 降解產(chǎn)物結(jié)構(gòu)解析
將該降解產(chǎn)物進(jìn)行譜庫檢索, 結(jié)果仍為氮芥, 但樣品總離子流圖中氮芥與降解產(chǎn)物為2個分離的色譜峰, 經(jīng)與譜庫檢索MS圖比較, 發(fā)現(xiàn)降解產(chǎn)物MS圖中m/z為45、72、116和165在其譜庫檢索MS圖中未發(fā)現(xiàn), 見圖 5。
圖 5 樣品中降解產(chǎn)物MS圖（A）與譜庫檢索降解產(chǎn)物MS圖（B）比對
根據(jù)這些m/z碎片推測該降解產(chǎn)物為2-氯乙基- (2-乙氧基)-甲基胺, 結(jié)構(gòu)式為見圖 6。即氮芥(見圖 7)中1個Cl被CH3CH2O取代。其裂解規(guī)律見圖 8。
圖 6 降解產(chǎn)物結(jié)構(gòu)式
圖 7 氮芥結(jié)構(gòu)式
圖 8 降解產(chǎn)物裂解規(guī)律
由于該降解產(chǎn)物既不是合成鹽酸氮芥的起始原料, 也不是反應(yīng)中間體, 筆者也未購買到其對照品, 無法進(jìn)行結(jié)構(gòu)確證。
鹽酸氮芥酊生產(chǎn)工藝為鹽酸氮芥原料溶解在無水乙醇中, 推測降解途徑為隨著貯存時間延長, 氮芥中的1個Cl離子與乙醇發(fā)生反應(yīng)產(chǎn)生該降解產(chǎn)物。見圖 9。
圖 9 推測降解途徑
3 討論
3.1 現(xiàn)行標(biāo)準(zhǔn)缺陷
現(xiàn)行標(biāo)準(zhǔn)含量測定采用碘量法, 碘滴定液既作為滴定劑也作為自身指示劑使用, 該方法所用指示劑到達(dá)滴定終點時顏色變化明顯(無色→淡黃色), 但由于碘滴定液為紅棕色溶液, 滴定管刻度線也為深色, 讀取滴定終點消耗體積時不易看清刻度線引起較大誤差。本文采用自動電位滴定儀測定, 由儀器報告滴定終點體積, 可避免人為讀數(shù)不準(zhǔn)造成的誤差, 精密度高。文獻(xiàn)[7]報道該方法測定結(jié)果受實驗室溫度影響較大, 且專屬性差, 氣相色譜法專屬性強, 建議修訂現(xiàn)行標(biāo)準(zhǔn)的含量測定方法。
3.2 碘量法較氣相色譜法測定結(jié)果偏高原因分析
碘量法測定原理為鹽酸氮芥中的兩個氯離子與硫代硫酸鈉滴定液反應(yīng)生成氮芥的本提鹽[8], 見圖 10, 過量的硫代硫酸鈉滴定液被碘滴定液滴定。由于氮芥降解產(chǎn)物仍含有1個Cl離子, 亦能消耗硫代硫酸鈉滴定液, 故碘量法測定結(jié)果為鹽酸氮芥和降解產(chǎn)物含量的總和, 而氣相色譜法測定結(jié)果僅為鹽酸氮芥的含量, 所以碘量法測定結(jié)果高于氣相色譜法, 樣品中降解產(chǎn)物量越大, 兩種方法結(jié)果差異越大。
圖 10 氮芥本提鹽
3.3 鹽酸氮芥酊穩(wěn)定性
白癜風(fēng)是臨床上常見的獲得性色素脫失性皮膚病, 目前臨床上的治療方法很多。鹽酸氮芥酊為治療白癲風(fēng)的常用藥物, 該藥物經(jīng)滲入皮膚后形成乙烯基亞胺基, 與巰基起作用, 激活、加速黑素細(xì)胞產(chǎn)生黑色素[9]。經(jīng)對樣品影響因素試驗、加速試驗和長期穩(wěn)定性試驗考察, 鹽酸氮芥酊不穩(wěn)定, 室溫放置4天即與輔料發(fā)生反應(yīng)產(chǎn)生降解產(chǎn)物, 該降解產(chǎn)物隨貯存時間增加而增大, 在高溫條件下降解更快, 在冷藏條件下降解較慢, 建議生產(chǎn)企業(yè)進(jìn)一步研究該品種生產(chǎn)工藝和貯藏條件, 避免或降低樣品與輔料發(fā)生反應(yīng)。
3.4 降解產(chǎn)物性質(zhì)
由于氣相色譜法FID檢測器為破壞型檢測器, 無法制備降解產(chǎn)物純品, 筆者試圖采用LC-MS進(jìn)行分析, LC進(jìn)行制備, 均未檢測到該雜質(zhì), 因此, 其結(jié)構(gòu)和毒性目前尚無法確證。
參考文獻(xiàn)
[1] 趙建林. 氮芥制劑治療白癜風(fēng)135例臨床觀察[J]. 臨床皮膚科雜志, 1996, 25(5): 284-285.
[2] 國家藥典委員會.國家藥品監(jiān)督管理局國家藥品標(biāo)準(zhǔn)化學(xué)藥品地方標(biāo)準(zhǔn)上升國家標(biāo)準(zhǔn): 第十五冊[S]. 161-161.
[3] 李潔. 氣相色譜法測定鹽酸氮芥酊含量[J]. 中國藥房, 2013, 24(13): 1222-1224. DOI:10.6039/j.issn.1001-0408.2013.13.25
[4] 張薇, 馬長沙, 黃曉光, 等. 氣相色譜法測定達(dá)比加群酯中10種溶劑的殘留[J]. 中國藥事, 2017, 31(3): 263-268.
[5] 劉蔓, 方科益, 韓瑩瑩, 等. GC-MS法測定醫(yī)用疫苗中抗氧化劑BHT的含量[J]. 中國藥事, 2017, 31(11): 1331-1335.
[6] 許勇, 苗水, 郟征偉, 等. GC-MS法檢測化妝品中禁用物質(zhì)氮芥的含量[J]. 中國衛(wèi)生檢驗檢疫雜志, 2012, 22(11): 2566-2570.
[7] 李有富, 李魏林, 劉小敏. 實驗溫度對鹽酸氮芥含量測定的影響[J]. 中國醫(yī)藥導(dǎo)報, 2011, 8(23): 61-62. DOI:10.3969/j.issn.1673-7210.2011.23.028
[8] 中華人民共和國衛(wèi)生部藥典委員會. 藥典注釋:中華人民共和國藥典1990年版二部[J]. 北京:化學(xué)工業(yè)出版社, 1993, 591-592.
[9] 王俠生, 楊國亮. 楊國亮皮膚病學(xué)[M]. 上海: 上?？萍嘉墨I(xiàn)出版社, 2005: 654-655.
來源：xml-data
關(guān)于我們 聯(lián)系我們 營業(yè)執(zhí)照 全國服務(wù)電話：400-818-0021 嘉峪檢測版權(quán)所有 備案號：京ICP備14047019號-2 
京公網(wǎng)安備11010802046783號
