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來源：《中國醫(yī)藥工業(yè)雜志》

作者：謝沐風

 

溶出度試驗在評價口服固體制劑內(nèi)在品質(zhì)方面發(fā)揮重要作用，本篇將詳盡闡述如何制訂溶出度試驗質(zhì)量標準。

 

1、針對仿制藥

 

《藥品注冊管理辦法》中的三類新藥 ( 已在國外上市銷售但尚未在國內(nèi)上市銷售的藥品 ) 和六類新藥 ( 已有國家藥品標準的原料藥或者制劑 ) 的區(qū)別是有無“可參照的質(zhì)量標準”。在對這兩類新藥進行研發(fā)、制訂質(zhì)量標準時均可按以下思路進行。

 

1.1 既有質(zhì)量標準的可參照性

 

制訂六類仿制藥的溶出度質(zhì)量標準時可參考相關(guān)文獻，如各國藥典、國家藥監(jiān)局質(zhì)量標準、進口藥品質(zhì)量標準、《日本橙皮書》、美國 FDA 公布的溶出曲線數(shù)據(jù)庫、日本仿制藥技術(shù)申報資料概要等。

但由于這些標準 ( 包括國外藥典和進口藥品質(zhì)量標準 ) 本身的局限性，因此建議實驗者在經(jīng)過對原研品的研究驗證基礎(chǔ)上制訂仿制藥的質(zhì)量標準。這也是對國家藥品審評中心自 2008 年起就反復(fù)強調(diào)的“仿產(chǎn)品不是仿標準”宗旨的具體實踐。

 

1.2 購買原研品

 

對于六類仿制藥，均可購買到進口品或原研廠在國內(nèi)合資企業(yè)產(chǎn)品。對于三類新藥，也可通過多種途徑獲得原研品。購買原研品時皆應(yīng)盡可能獲取不同時間段的多個批號樣品 ( 如出廠不久和臨近有效期 )。

不應(yīng)以未購得原研品為借口，盲目進行處方開發(fā)與制劑工藝研究。建議將原研品的購入時間作為0月，冷藏；并與仿制品同時進行6個月的加速試驗與長期穩(wěn)定性試驗。每一時間點樣品取出后均應(yīng)冷藏。

 

首先測定末次采樣點的多條溶出曲線 ( 包括有關(guān)物質(zhì) )，觀測與0月相比的變化情形，再酌情考慮是否需測定其他時間點樣品。根據(jù)原研品溶出曲線的波動情況對仿制品研發(fā)和品質(zhì)做出正確判斷與準確評估。

 

1.3 測定原研品的多條溶出曲線

 

參考美國藥典 (USP)33- 國家處方集 (NF)28<1092> 章節(jié)“溶出度檢查方法的建立和驗證”(The Dissolution Procedure: Development and Validation)和文獻，在溶出曲線測定前，須先進行以下幾項工作。

 

1.3.1 “pH- 溶解度”曲線的測定

 

取過量原藥 (可預(yù)先經(jīng)微粉化處理)，置8支具塞試管中，分別加 pH 1.0～8.0 溶出介質(zhì)適量，置 37 ℃水浴振蕩過夜，使之形成過飽和溶液。過濾，取續(xù)濾液經(jīng) HPLC 法測得準確濃度，計算溶解度并繪制 pH-溶解度曲線。對于難溶性藥物，對照品溶液可酌情采用純甲醇或純乙腈配制。

 

該曲線可提供眾多信息：如曲線與 X 軸平行，說明藥物在不同pH介質(zhì)中的溶解度幾近一致，由此可預(yù)測多條溶出曲線應(yīng)重合；如曲線有陡峭變化、甚至是有數(shù)量級差異，則可預(yù)測多條溶出曲線必會有所差異，溶出最低的情況一般是在溶解度最低的pH 介質(zhì)，這也為制劑研發(fā)方向提供了針對性的佐證素材。

 

當出現(xiàn)主成分在某 pH介質(zhì)中極不穩(wěn)定、溶解后即迅速分解，無法測定的情況，則該介質(zhì)溶解度可不測定，其溶出曲線亦可免做。

 

1.3.2 藥物 pKa 的查詢與測定

 

藥物的 pKa 也十分重要，可通過查詢或測定獲得。測定法可參照文獻。若該值未涵蓋于四條標準溶出曲線 pH 范圍，則研發(fā)時第 5、6 條溶出曲線就應(yīng)測定該 pKa 所對應(yīng)的 pH 介質(zhì)或 pH-溶解度曲線上急劇變化的 pH，這些 pH 溶出曲線的測定對于仿制制劑研發(fā)和曲線比對均具有十分重要的意義。

 

1.33 主成分在各溶出介質(zhì)中的穩(wěn)定性

 

為獲得準確試驗數(shù)據(jù)，該驗證必不可少。建議取原藥粉末配制的溶液，無需取樣品溶出液。

 

1.4 質(zhì)量標準中各參數(shù)的制訂

 

參數(shù)的制訂可參考 USP33-NF28 <1092> 章節(jié)和日本藥局方 (JP)( 青柳伸男 . 如何制訂溶出度試驗質(zhì)量標準 )。在測定了原研品和仿制品的多條溶出曲線后，才能科學客觀、合理全面地制訂質(zhì)量標準。具體如下。

 

1.4.1 溶出介質(zhì)的選擇

 

對于速釋制劑，首先應(yīng)滿足藥品在該介質(zhì)中最終溶出量達 85％以上，然后可按下列情況分別選?。?/span>

①根據(jù)該藥物在體內(nèi)吸收的主要消化道部位的生理 pH( 適用于一般情況 )。

 

②能在一定程度上反映體內(nèi)外相關(guān)性的 pH( 適用于創(chuàng)新藥 )。

 

③最能體現(xiàn)不同來源制劑間彼此差異的 pH( 適用于標準轉(zhuǎn)正 / 藥典起草、尤適合于我國大量仿制藥存在情形 )。

 

④最能反映生產(chǎn)工藝變化、偏差的 pH( 適用于企業(yè)內(nèi)控標準，用于批間樣品品質(zhì)均一性的評價 )。

 

⑤溶出最低的 pH( 適用于企業(yè)內(nèi)控標準，用于應(yīng)對國家市場檢查與監(jiān)督 )。

 

⑥溶出數(shù)據(jù)精密度更佳的pH( 某些樣品在首選介質(zhì)中精密度不佳時，更換為精密度更理想的介質(zhì) )。

 

當多條溶出曲線重合時 ( 各時間點溶出量相差不超過 10.0％ )，《日本橙皮書》傾向于首選水。其出發(fā)點為 ：雖然水的 pH 和表面張力會因來源不同而改變，且在試驗過程中也可能會因藥物影響或溶解入二氧化碳使溶出行為發(fā)生變化，但考慮到發(fā)生上述可能性的概率較小，且可通過事先驗證予以探明，故秉承環(huán)保、提高試驗效率等出發(fā)點，質(zhì)量標準中首選水。

 

而 USP 鑒于以上問題的存在，傾向于采用緩沖液。筆者更傾向日本作法，因水的 pH范圍為 5.0～7.0，已涵蓋多條溶出曲線的 pH。當多條溶出曲線不重合時，則可根據(jù)上述情形予以針對性擬定 ( 詳見“1.4.2”)。

 

對于腸溶制劑，應(yīng)規(guī)定酸中介質(zhì) (pH 1.0～1.2)和堿中介質(zhì) (pH 6.8～7.2) 釋放量的測定。酸中釋放量的測定現(xiàn)今愈發(fā)傾向通過測得準確數(shù)據(jù)予以表達，而非肉眼觀察外觀形狀進行控制(日本橙皮書皆采用此法 )，通常規(guī)定 2h 累積釋放率不得超過 10％。

 

為防止藥物在年輕人體內(nèi)發(fā)生過量釋放，甚至在該階段可采用高轉(zhuǎn)速 ( 如 100 r/min)，以進一步探明藥物的內(nèi)在優(yōu)良品質(zhì)。

 

如主成分溶出后在酸性介質(zhì)中不穩(wěn)定，會迅速降解，即便立即測定也無法準確定量時，建議測定溶出杯中剩余固體顆粒中所含的主成分量，隨后用測得百分含量減去剩余百分含量，再除以測得百分含量，即為酸中釋放百分量。堿中釋放量的測定同速釋制劑。

 

但腸溶衣對紫外測定常有干擾，故建議采用紫外 - 兩點相減法或 HPLC 法測定，否則易出現(xiàn)溶出量均值高于含量3.0％以上的情況，造成對結(jié)果的誤判。

 

對于緩控釋制劑，首先應(yīng)滿足在藥物在該介質(zhì)中最終釋放量達 80％以上。當體外多條釋放曲線重合時 ( 酸中測定 2h 即可 )，建議首選水 (pH 5.0 ～7.0) 作為介質(zhì)，不宜采用酸性介質(zhì)，因人體內(nèi)十二指腸至小腸消化道器官不存在該值；也不建議參照人體內(nèi)消化器官的標準值 (pH 1.0～1.2、4.0～4.5、6.8)，采用不同時段、不同溶出介質(zhì) ( 不斷調(diào)試 ) 的費時費力方式，且此方式試驗誤差較大。當體外多條釋放曲線不重合時，建議選擇最終釋放量達 80％以上、溶出最慢的介質(zhì)。

 

一般情況下，不建議向溶出介質(zhì)中添加胃蛋白酶和胰蛋白酶。但若某些藥物須飯后服用、且生物等效性試驗需在“進食”狀態(tài)下進行時，則在研發(fā)仿制藥時也必須進行“溶出介質(zhì)中分別添加胃蛋白酶和胰蛋白酶的比對研究”，在制訂的質(zhì)量標準中亦應(yīng)加入。

 

另外，當硬膠囊使用的囊殼為明膠膠囊時，為避免產(chǎn)生交聯(lián)現(xiàn)象影響溶出時可加入胃蛋白酶或胰蛋白酶，但需進行對比驗證研究。

 

1.4.2 取樣時間點與限度的制訂

 

普通制劑：以第一次出現(xiàn)溶出量均在 85％以上兩時間點，且該兩點溶出量差在 5％以內(nèi)時 ( 即“平臺期”)，取前一時間點作為質(zhì)量標準中取樣時間點，并將該點溶出量減去 15％作為溶出限度。

這就將通常認為的“溶出度取樣時間點常選擇溶出曲線拐點處后推 10～20min”原則予以明確化和具體化，即“拐點處后的 10～20min”即為溶出飽和“平臺期”。

 

由此推斷 ：溶出限度一般僅有 70％、75％、80％、85％四個數(shù)值。如第一時間點為 20min，由于其不為刻鐘的整數(shù)倍，一般提高至 15min，但限度僅減去 10％。

 

當在低轉(zhuǎn)速條件下 ( 如 50 r/min)、各溶出曲線差異極為顯著時，建議選擇位于“中間位置”的介質(zhì)，這樣取樣時間點可能會延長至 90～120min。此時，一者傾向于適當放寬參數(shù) ( 如加大轉(zhuǎn)速或加入少許表面活性劑 )，使“平臺期”在 60 min 前出現(xiàn)，以利于產(chǎn)品日常檢驗。

 

另一種傾向于保持原狀，此時雖制訂的取樣時間點較為“滯后”，但該介質(zhì)、該時間點更具區(qū)分力、更能體現(xiàn)產(chǎn)品內(nèi)在品質(zhì)，《日本橙皮書》中取樣點為 90 和 120min 的品種就不在少數(shù)。筆者也傾向后一種作法。

 

緩控釋制劑 ：應(yīng)至少設(shè)定 3 個時間點 ( 服用方式一天 2 次 ) 或 4 個時間點 ( 服用方式一天 1 次)：第一點為避免“突釋”，應(yīng)設(shè)定為試驗 1～2 h 后或釋放量相當于標示量 10％～ 30％的時間點 ；第二點是為考察藥品溶出特性，應(yīng)設(shè)定在釋放量約 50％的時間點 ；最后一點是為確保藥物釋放量超過 80％的時間點。

 

如共擬定 4 點，第 2、3、4 個時間點的釋放量應(yīng)分別約為 40％、60％和 80％。任何一點的擬定范圍均不應(yīng)超過標示量的20％，且各點釋放限度交叉范圍建議不要超過 5％，除非體內(nèi)特征可顯示出相應(yīng)的可接受性和波動性。對于零級釋放產(chǎn)品，因其釋放曲線為“一條直線”，故還應(yīng)增加每小時釋放量的規(guī)定 ( 即斜率 )，如硝苯地平控釋片進口質(zhì)量標準中就有 (6％～ 8％)/h的嚴格規(guī)定。

 

治療窗狹窄藥物 ：為防止突釋，較傾向于采用兩點法測定。一方面可采用“5 或 10min 的第一測定時間點溶出量不得大于某一限度 ( 以控制突釋 )，第二測定時間點溶出量規(guī)定不得小于某一限度以確保溶出完全”的作法，如《日本橙皮書》中規(guī)定卡馬西平片 5min 時溶出度不得超過 60％和 30min時不得少于70％。

 

另一方面可采用效仿緩控釋制劑擬定法 ：第一點規(guī)定 5 或 10min 時的溶出量為一限度范圍而非一上限，以保證其溶出曲線呈現(xiàn)緩慢上升，如 USP 中規(guī)定卡馬西平片 10min 時溶出度應(yīng)為 30％～ 50％，45min 時不得少于 75％，該規(guī)定還可有效防止處方中加入大量表面活性劑或增溶劑的投機取巧作法，值得借鑒。

 

各國制訂的技術(shù)指導(dǎo)原則中收載的此類藥物有 ：氨茶堿、茶堿、膽茶堿、雙羥丙茶堿、苯妥因鈉、丙戊酸、炔雌醇 / 孕酮制劑、地高辛、洋地黃毒苷、華法令鈉、甲磺酸異他林吸入氣霧劑、卡馬西平、可樂定透皮貼劑、磷酸丙吡胺、硫酸胍乙啶、硫酸奎尼丁、硫酸哌唑嗪、硫酸異丙腎上腺素、米諾地爾、撲米酮、碳酸鋰、鹽酸克林霉素、鹽酸可樂定、鹽酸普魯卡因胺、左甲狀腺素鈉、環(huán)孢霉素 A、他克莫司、西羅莫司、丙戊酸 / 丙戊酸鈉等。

 

1.4.3 裝置的選擇

 

建議首選通用性強、耐用性好、廣泛普及的籃法與槳法。膠囊劑首選籃法、片劑首選槳法。

對于不宜采用籃法 ( 如會發(fā)生堵塞轉(zhuǎn)籃孔隙、樣品塌陷于籃底、或黏附于籃頂?shù)惹闆r ) 及易漂浮于液面的制劑，可考慮采用槳法、加沉降籃 ；對于采用了黏附性較強輔料的緩釋制劑，易發(fā)生試驗過程中因始終黏附于溶出杯的不同部位而導(dǎo)致溶出數(shù)據(jù)均一性較差的情況，故推薦采用沉降籃。不推薦采用自制沉降裝置，因其制作的不規(guī)范性會導(dǎo)致測定結(jié)果難以重現(xiàn)。也不推薦使用非法定或非標準試驗裝置。

 

如卻有必要采用，應(yīng)提供詳盡驗證資料和充足理由，并充分驗證其必要性與質(zhì)量可控性 ( 即實驗室間的可操作性、耐受性和易重現(xiàn)性 )?？蓞⒄詹捎?USP 第三～七法時，不能因儀器昂貴而自行設(shè)計組裝，且由于現(xiàn)階段該儀器尚難以推廣普及，故建議不要采用。

 

1.4.4 轉(zhuǎn)速的擬定

 

1.4.4.1 模擬人體內(nèi)狀態(tài)與既有觀念的錯誤

由于 50 r/min 的攪拌速度被看作與中老年人體胃腸道蠕動強度相當，且由于患者大多為中老人群，故首選該轉(zhuǎn)速?，F(xiàn)今國內(nèi)仍存在一種普遍看法，認為槳法的 50 r/min≈ 籃法的 100 r/min[ 藥典注釋 ( 中國藥典 1990 年版二部 )1131 頁 ]，其實這是錯誤的。

文獻報道攪拌強度為——①最弱級：槳法 50 r/min≈ 籃法 50 r/min( 樣品在籃內(nèi) )≈ 籃法100 r/min( 樣品在籃外，即沉于杯底 )。

 

②中級 ：槳法 75 r/min≈ 籃法 75 r/min( 樣品在籃內(nèi) )≈ 槳法 50 r/min( 樣品置沉降籃內(nèi) )。

 

③最強級 ：槳法 100 r/min≈ 籃法 100 r/min( 樣品在籃內(nèi) )≈ 槳法75r/min( 樣品置沉降籃內(nèi) )。

 

當樣品置沉降籃內(nèi)，在試驗過程中將始終處于杯底，由此受到的外來渦旋力將大于樣品隨意漂浮或停滯于杯中某處，故其級別比未置于沉降籃內(nèi)高出一級。

 

1.4.4.2 需放寬試驗參數(shù)時不能隨意采用高于 50 r/min 的轉(zhuǎn)速，因為這將極大地弱化對不同制劑或處方溶出行為的區(qū)分力。

 

對于有必要放寬溶出度試驗參數(shù)的情況，應(yīng)分別考察增大轉(zhuǎn)速至 75 ～ 100 r/min 和加入表面活性劑兩種方式，以更好地建立起體內(nèi)外相關(guān)性并能區(qū)分不同來源制劑內(nèi)在品質(zhì)優(yōu)劣。

目前傾向于采用“不提高轉(zhuǎn)速、加入表面活性劑”方式，因?qū)τ谥欣夏昊颊?，雖胃腸道蠕動較弱，但體內(nèi)存在膽堿類物質(zhì)，可用表面活性劑表達。但當樣品在杯底出現(xiàn)錐度堆積、呈“小山狀”時，則傾向于加大轉(zhuǎn)速，而非加入表面活性劑的方式。

 

添加的表面活性劑濃度應(yīng)從 0.01％起始，通常照1、2、5序列增加(即逐步試驗濃度0.01％、0.02％、0.05％、0.1％、0.2％、0.5％、1.0％、2.0％，最高至 3.0％)。

 

另外，配制溶出介質(zhì)、溶解表面活性劑及無機鹽時，一定要采用加熱煮沸方式，切忌采用振搖或超聲。當兩級別間溶出曲線差異較顯著時，則應(yīng)適當增加中間濃度以進一步研究。不宜未經(jīng)以上逐步增大濃度的研究，根據(jù)漏槽條件推斷出某濃度后直接采用的作法 ( 詳見“3.5”項下內(nèi)容 )。

 

研究時應(yīng)注意不同來源的表面活性劑可能會對試驗結(jié)果帶來顯著性差異的情況?，F(xiàn)傾向于在研究時采用主流品牌 ( 分析級 )，并在質(zhì)量標準中注明，以便于其后的試驗易于重現(xiàn)。

 

如采用多個品牌、并且未在質(zhì)量標準中注明，將導(dǎo)致試驗結(jié)果無法預(yù)料。綜上所述，若質(zhì)量標準中采用 50r/min 以上轉(zhuǎn)速或溶出介質(zhì)中添加了表面活性劑，就應(yīng)在研發(fā)資料和起草說明中予以詳盡驗證和闡述。

 

1.4.4.3 最極端試驗條件

 

質(zhì)量標準中擬定的最極端條件建議為 ：槳法，100r/min，溶出介質(zhì)中加入 3.0％表面活性劑。因目前上市的所有原研制劑，在此條件下的溶出量皆能達到 85％ ( 或 80％ ) 以上；

 

并且，如在該條件下不能達到上述溶出量，亦可推斷出該制劑在人體內(nèi)的生物利用度不甚理想，這一點對于創(chuàng)新藥的制劑研發(fā)也具有較強的指導(dǎo)意義。溶出介質(zhì)中禁止添加有機溶劑。因為這將極大地降低體內(nèi)外相關(guān)性，嚴重背離溶出度試驗的應(yīng)用理念。如添加有機溶劑則是典型的“為了溶出合格而設(shè)定”的質(zhì)量標準。

 

1.4.4.4 特例

 

溶出介質(zhì) (pH 值 ) 特例 ：鑒于 3.0％表面活性劑的加入，對于配制和試驗操作皆會帶來困難，此時若在 pH 大于 8.0 的介質(zhì)中 ( 即溶解度顯著提高的pH) 可找到一個較為溫和的試驗條件，此條件下的最終溶出量可達 85％以上，則推薦采用該 pH，即便該值已背離人體正常生理值。

如 USP 中“阿維 A酸膠囊 (acitretin capsule)”的溶出度試驗要求為 ：采用籃法，100r/min，以加 3.0％十二烷基磺酸鈉的緩沖液 (pH 9.6～10.0) 作溶出介質(zhì)，900ml，30min 時要達到 85％的限度。

 

轉(zhuǎn)速特例 ：除非是針對特定劑型或特定工藝，否則不宜采用低于 50 r/min 的轉(zhuǎn)速。如中國藥典中“布洛芬緩釋膠囊”的釋放度轉(zhuǎn)速為 30 r/min。此時則應(yīng)格外注意儀器的適用性，曾發(fā)現(xiàn)不同儀器間測定結(jié)果存在顯著差異情況 ( 即低轉(zhuǎn)速下顯示出儀器間性能差異 )。又如懸浮劑一般采用 25 ～ 50 r/min的轉(zhuǎn)速，但對于出現(xiàn)錐度堆積的情況，可通過適當增加轉(zhuǎn)速予以改善。

 

1.4.5 溶出介質(zhì)用量的選擇

 

建議采用 900或1000ml。900ml與人體消化道內(nèi)體液總體積較為接近，1 000ml 則是為便于計算。建議不要采用其他用量。至于中國藥典收載的第三法——小杯法，是特定歷史時期的產(chǎn)物 ( 當時液相色譜儀不普及，對于小規(guī)格制劑，即便采用 5cm 吸收池，仍無法滿足紫外吸收度應(yīng)達 0.2 的最低要求，于是在第二法的基礎(chǔ)上衍生改良而來 )。

 

由于該法不滿足當初設(shè)計溶出儀時所追求的漏槽條件，更不符合大杯法所應(yīng)具有的流體力學特征，故截至目前其他各國藥典均未采用。現(xiàn)今，隨著液相色譜儀在國內(nèi)已完全普及，即便再小規(guī)格，亦可通過各種措施解決準確測定的問題，故該法已無必要。

 

因此，即便既有國內(nèi)質(zhì)量標準擬定該法，因原研制劑在研發(fā)和質(zhì)量控制時從未采用過該法，用該法測得的原研品多條溶出曲線也是錯誤的，故建議予以更改。

 

1.5 投樣量

 

曾有為滿足樣品最低定量限的需要，采用一杯內(nèi)投入 2 片作法?，F(xiàn) HPLC 法已可解決準確測定的問題，故投樣原則必須遵循單片樣品方式。對于多計量的顆粒劑、混懸液、干混懸劑等劑型，可投入一次單位服用量。

投入方式可采用 ：樣品混勻后取 5～10ml 立即傾入已標化、帶有刻度的試管中，立即用滴管滴加樣品至刻度，迅速傾入溶出杯中，并用溶出介質(zhì)清洗試管。

 

1.6 測定法

 

無論采用何法檢測，均應(yīng)堅持“研發(fā)階段測定法與質(zhì)量標準測定法應(yīng)區(qū)別對待”的科學理性觀念。

 

1.6.1 研發(fā)時測定法

 

研發(fā)時，溶出測定工作量十分巨大，具不完全統(tǒng)計 ：速釋制劑仿制藥研發(fā)需測定約 500 條溶出曲線、緩控釋制劑需測定約 1000 條。如采用紫外法測定，就會有因不斷篩選處方而采用各種不同來源輔料對紫外測定干擾的擔憂、吸光度需達 0.2～0.8以滿足紫外檢測的要求、以及采取繁瑣稀釋步驟等操作的顧慮，故建議采用 HPLC 法進行測定。關(guān)于如何高效準確、快速便捷地測定大批量溶出度樣品可參考文獻。

 

目前市售的國產(chǎn)“光纖全自動測定溶出儀”，將光纖探頭插入溶出杯中可直接測得一條完整曲線(可每隔 20s 測定)，雖是采用紫外法測定，但由于其數(shù)據(jù)處理程序中已設(shè)定了各種校正法以確保排除各種情形的輔料干擾，故值得肯定與推薦。

 

1.6.2 質(zhì)量標準測定法

 

質(zhì)量標準檢測僅是一個介質(zhì)、一個時間點、一個限度，工作量很小，故為考慮測定的方便性，在排除輔料干擾的前提下，可考慮采用紫外法；但如含量測定為液相，則建議溶出度也采用液相，尤其是對于膠囊劑、薄膜衣片、腸溶制劑和緩控釋制劑( 因囊殼、薄膜衣、腸溶衣、緩控釋制劑輔料較易干擾紫外測定。

 

溶出度均值如超出含量 2.0％以上，則說明測定有干擾，此時就會造成不合格樣品誤判為合格的情況，必須予以查明和更改測定法。目前，國內(nèi)出現(xiàn)此種情況的品種愈發(fā)增多，推測是采用廉價劣質(zhì)的輔料所致，值得關(guān)注和警示。

 

1.7 復(fù)方制劑

 

對于復(fù)方制劑，應(yīng)在遵循以上原則的基礎(chǔ)上靈活選擇。可根據(jù)各組分情況，針對性地擬定不同的參數(shù)。測定法首選液相法。

 

1.8 如何正確看待驗證結(jié)果與既有質(zhì)量標準

 

在根據(jù)“1.2～1.7”項下內(nèi)容進行溶出度試驗質(zhì)量標準的研究后，如所得的驗證結(jié)果與既有質(zhì)量標準相符，則可參照采納 ；如不一致，則應(yīng)制訂更科學、合理的溶出度試驗參數(shù)與測定法。

 

1.9 質(zhì)量標準的漸進性與完善性

 

任何一個質(zhì)量標準都不是一成不變、不可更改的。研究者可根據(jù)產(chǎn)品在不同階段出現(xiàn)的特性和隨著對該產(chǎn)品研究的不斷深入，對質(zhì)量標準中溶出度試驗條件予以科學、客觀地更改與完善。甚至在使用溶出度試驗進行產(chǎn)品質(zhì)量控制時，亦可根據(jù)不同情形和需要采用不同方法。

例如，申報生產(chǎn)時，隨著制劑工藝放大和處方優(yōu)化，更改申報臨床時的溶出度試驗參數(shù)；省級藥檢所擬定藥典或標準轉(zhuǎn)正時，可針對不同來源樣品、擬定最具區(qū)分力的溶出介質(zhì) ；為保證批間樣品均一性，企業(yè)在完成既有質(zhì)量標準規(guī)定檢測的溶出介質(zhì)后，可建立內(nèi)控標準，增加其他更能反映批間樣品波動性的溶出介質(zhì)等。

 

1.10 溶出度試驗質(zhì)量標準擬定理念

 

由于溶出度試驗是評價口服固體制劑質(zhì)量的核心，故擬定其標準至關(guān)重要。根本出發(fā)點為 ：制訂高標準、嚴要求的溶出度試驗質(zhì)量標準來推動制劑工藝的深入研究，尤其是工業(yè)藥劑學的研究與實踐。我國藥典或國家標準中部分品種出現(xiàn)的“加入有機溶劑”、“150 r/min 的轉(zhuǎn)速”、“加入高濃度表面活性劑”等條件，皆是與以上理念相悖的，究其原因還是這些品種的制劑工藝低劣。這樣的品種即使是合格品，其人體內(nèi)的生物利用度也值得商榷。

 

2 針對創(chuàng)新藥

 

創(chuàng)新藥質(zhì)量標準中擬定溶出度試驗的主要目的是為避免發(fā)生由于處方工藝不合理導(dǎo)致藥品生物利用度不佳的情況。如主成分在各 pH 溶出介質(zhì)中溶解度幾近一致，則體外溶出行為的追求目標一定是各條溶出曲線重合。如主成分在各 pH 溶出介質(zhì)中溶解度相差較大，則體外溶出行為的追求目標應(yīng)是盡可能地“抬高”低溶解度的溶出曲線。

 

首先篩選出生產(chǎn)工藝和處方輔料中影響生物特性的若干個關(guān)鍵性因素 ( 如 4 個因素 )，通過經(jīng)驗對各參數(shù)進行組合后設(shè)計得到十數(shù)個處方，小試制得各處方樣品，分別測定體外溶出曲線，并由此推斷出 4 個關(guān)鍵性因素的篩選方向。重復(fù)上述操作，進行 30～50 個處方研究后，應(yīng)可尋找到 ：能區(qū)分出這些處方體外溶出性能優(yōu)劣，即能辨明出“好、中、差”處方的某一溶出介質(zhì)。

 

然后通過動物試驗 ( 可從小鼠過渡到大鼠，再過渡到 Beagle 犬 ) 驗證這三類處方體內(nèi)生物利用度的差異，并與體外溶出曲線的差異性建立起相關(guān)性 ( 兩者可不斷趨同 )。規(guī)?；a(chǎn)時選擇最優(yōu)良處方進行新藥臨床研究驗證，再按照以上思路制訂該產(chǎn)品溶出度試驗質(zhì)量標準。

 

3 討論

 

3.1 溶解度與體外多條溶出曲線的關(guān)系

 

研究表明，隨年齡增長，人體內(nèi)胃酸分泌量逐漸減少，胃內(nèi)、十二指腸和小腸的 pH 范圍分別為1.2～7.6、3.1～6.7 和 5.2～6.0。制劑的體外溶出行為與主成分在各 pH 溶出介質(zhì)中的溶解度有較強相關(guān)性，仿制品只要與原研品在各介質(zhì)中皆保持一致即可。

但對于緩控釋制劑，由于在體內(nèi)停留時間長、在消化道內(nèi)經(jīng)歷各種 pH 環(huán)境，故即使主成分在不同 pH 溶出介質(zhì)中的溶解度差異較大，也應(yīng)盡可能具備體外多條釋放曲線重合的特性。絕大部分的緩控釋制劑原研品均具有該特性，但我國現(xiàn)今已上市的緩控釋制劑仿制藥與原研品有相當差距。

 

3.2 科學理性地看待既有質(zhì)量標準

 

3.2.1國內(nèi)既有質(zhì)量標準

 

由于眾多歷史原因和制訂 / 審核人員當時認知的局限性，部分品種的質(zhì)量標準是根據(jù)“溶出度跟著制劑走”( 即為了讓國內(nèi)該品種的大多數(shù)生產(chǎn)企業(yè)產(chǎn)品均合格，為了找到一個能體現(xiàn)產(chǎn)品緩控釋特性的釋放度條件 ) 的錯誤理念而制訂的。從已發(fā)表的眾多溶出度研究論文和自 2008 年 SFDA 開始實施的“全國評價性抽驗所進行的探索性研究結(jié)果”中已充分體現(xiàn)，此處不再贅述。

 

3.2.2英國 (BP)/ 歐洲藥典 (EP

 

無論是原藥還是制劑的有關(guān)物質(zhì)檢測，BP 和EP 均將各雜質(zhì)、色譜條件、系統(tǒng)適用性等關(guān)鍵性參數(shù)羅列得清清楚楚、一目了然；但收載的制劑卻很少、口服固體制劑更少，甚至有些難溶性口服固體制劑、緩控釋制劑竟未制訂溶出度檢測項。原因是溶出度試驗作為評價口服固體制劑內(nèi)在品質(zhì)優(yōu)良與否的核心指標不便公開，故索性不予登載。

 

3.2.3日本藥局方 (JP)

 

JP 的表現(xiàn)形式完全與 BP 和 EP 相同，即便收載了溶出度試驗項，也往往標注為“略”或“詳見局外規(guī)”。原因是日本藥品審評部門和國立醫(yī)藥品食品衛(wèi)生研究所 ( 國家藥檢所 ) 在意識到溶出度試驗重要性后，伴隨 1998 年開始實施的“藥品品質(zhì)再評價工程”，將溶出度試驗質(zhì)量標準單獨匯編成《日本橙皮書》( 亦稱《局外規(guī)》) 單獨出版。

 

3.2.4美國藥典 (USP)

 

USP 收載的溶出度試驗是各國藥典中最具參考價值的，但亦應(yīng)了解其產(chǎn)生過程與背景。USP 一般在該藥品行政保護到期前向原研企業(yè)和各仿制企業(yè)(FDA 已批準，但尚未上市銷售 ) 發(fā)出邀請函告知將收載該品種，希望各單位提供質(zhì)量標準。

 

當各單位提供的溶出度試驗參數(shù)不同時，USP 不予統(tǒng)一、全部登載，因為這些標準均經(jīng) FDA 審核通過，產(chǎn)品皆生物等效，這就是有時會看到個別品種會登載數(shù)個溶出度試驗條件的原因。一般情況下，TSET1為原研品。如僅登載一個條件，一般也是由原研企業(yè)提供的。

 

然而，即便如此，制訂者也不宜直接照搬 USP的溶出度試驗條件。原研品自上市到專利保護期結(jié)束期間，會歷經(jīng)大量、各人群的臨床研究驗證，原研企業(yè)可能仍在不斷優(yōu)化和完善處方與工藝，且樣品生產(chǎn)規(guī)模也早已遠大于最初臨床申報時 ( 但質(zhì)量標準是臨床申報時制訂的 )。

 

因此有些品種的質(zhì)量標準已不能準確、客觀地反映現(xiàn)今上市產(chǎn)品所具有的內(nèi)在優(yōu)良品質(zhì)，故希望制訂者參照前述試驗思路，購買現(xiàn)階段的上市品進行研判。如“尼莫地平片”，BP 和 USP 皆擬定溶出介質(zhì)中添加 0.3％表面活性劑，中國藥典完全相同。

 

可經(jīng)試驗表明，原研品在含 0～0.3％表面活性劑的溶出介質(zhì)中，溶出曲線幾無變化 ( 即完全可不添加表面活性劑 ) ；而國內(nèi)眾多仿制品卻迥然不同，采用不含表面活性劑的溶出介質(zhì)時，釋放量很少。這充分啟示對原研品的質(zhì)量評估不能照搬既有質(zhì)量標準。

 

3.2.5 日本橙皮書

 

日本自 1998 年開始實施“藥品品質(zhì)再評價工程”以來，在《仿制藥生物等效性試驗指導(dǎo)原則》、《規(guī)格不同的口服固體制劑生物等效性試驗指導(dǎo)原則》、《口服固體制劑處方變更后生物等效性試驗指導(dǎo)原則》和《固體制劑改變劑型后生物等效性試驗指導(dǎo)原則》等一系列指導(dǎo)原則出臺的背景基礎(chǔ)上，開始陸續(xù)出版《日本醫(yī)療用醫(yī)薬品品質(zhì)情報集》( 即日本橙皮書與參比制劑目錄，http://www.jp-orangebook.gr.jp/)。

截至 2010 年底，共進行了 670個品種的編撰工作，其中詳細羅列了每一品種的解離常數(shù)、在 4 種 pH 溶出介質(zhì)中的溶解度、在各 pH溶出介質(zhì)中的溶液穩(wěn)定性、4 條標準溶出曲線、溶出度試驗質(zhì)量標準，一些品種還有主成分對照品質(zhì)量標準、雜質(zhì)對照品質(zhì)量標準等信息。

 

2011 年 1 月，國家藥品審評中心組織翻譯了這些品種，并在其官方網(wǎng)站 (www.cde.org.cn) 主頁右側(cè)建立了《日本溶出曲線數(shù)據(jù)庫專欄查詢系統(tǒng) ( 中文翻譯版 )》。

 

3.2.6美國 FDA 公布的溶出曲線數(shù)據(jù)庫

 

美國 FDA-CDER( 藥品審評中心 ) 屬下仿制藥辦公室的生物等效部，為提高仿制藥內(nèi)在品質(zhì)、強化各項審評規(guī)范，從 2004 年初開始效仿日本，從多種溶出介質(zhì)中遴選出最能反映藥品內(nèi)在品質(zhì)的一個溶出介質(zhì)，并匯編成集，登載于該部官方網(wǎng)站 ：http://www.accessdata.fda.gov/scripts/cder/dissolution/ index.cfm，每季度更新一次。

截至 2011 年 1 季度，已進行了約 900 個品種的披露。同時，該部歡迎來電來函，對收載的參數(shù)提出異議和修改意見。關(guān)于該數(shù)據(jù)庫的說明與答疑內(nèi)容可在其官網(wǎng)查(http://www.fda.gov/Drugs/DevelopmentApprovalProcess/   DevelopmentResources/ucm073197.htm)。

 

3.2.7 進口質(zhì)量標準

 

由于溶出度試驗的重要性，不排除會有一些企業(yè)故意放寬溶出度試驗參數(shù)，從而確保進口的各批產(chǎn)品均符合規(guī)定。這就對審評人員和試驗復(fù)核人員提出了更高要求，故在審核資料時應(yīng)著重關(guān)注溶出度試驗法的建立驗證過程。

 

3.3 質(zhì)量標準中可不擬定溶出度試驗的品種和仿制藥研發(fā)時可申請豁免生物等效性試驗的品種

 

口服固體制劑質(zhì)量標準中并非一定要擬定溶出度檢查項，當主成分屬于寬治療指數(shù)藥物和生物藥劑學分類系統(tǒng) (BCS) 中的第Ⅰ類藥物 ( 即高溶解性、高滲透性 )，且采用槳法、50 r/min 條件下，制劑在至少4 種溶出介質(zhì)中 30min 時均達 85％以上溶出量，同時輔料量與主藥量相比未超過30％，輔料中也未加入表面活性劑、甘露醇和山梨醇 因為這些輔料可造成溶出度試驗對生物等效預(yù)測的誤判)時，質(zhì)量標準中就可不擬定溶出度檢查，僅采用崩解時限予以控制。

 

因為此類制劑在胃內(nèi) ( 任何pH) 的崩解、吸收已不受胃排空時間的影響。如拉米夫定片(規(guī)格0.1g)質(zhì)量標準即如此。當原研品屬于此類制劑時，仿制藥研發(fā)亦應(yīng)具有以上特性，且對于此類藥物，在某種情況下可申請豁免生物等效性試驗 ( 不過應(yīng)進行更多條溶出曲線測定比較 )。

世界衛(wèi)生組織于2010年11月公布了31個此類藥物 ( 對乙酰氨基酚、乙酰唑胺、阿昔洛韋、鹽酸阿米替林、阿替洛爾、磷酸氯喹、硫酸氯喹、鹽酸氯喹、西咪替丁、鹽酸環(huán)丙沙星、雙氯芬酸鉀、雙氯芬酸鈉、鹽酸強力霉素、二鹽酸乙胺丁醇、呋塞米、布洛芬、異煙肼、拉米夫定、左氧氟沙星、鹽酸甲氟喹、甲硝唑、鹽酸甲氧氯普胺、強的松龍、強的松、鹽酸普奈洛爾、吡嗪酰胺、硫酸奎納定、鹽酸雷尼替丁、利福平、鹽酸維拉帕米、甲硝唑 )，并對符合以上情形的藥物予以詳解。

藥物滲透性可通過某些網(wǎng)站查詢，如美國口服藥物傳遞研究公司 (Therapeutic Systems Research Laboratories Inc，TSRL 公司 ) 官網(wǎng)提供該項服務(wù)，查詢網(wǎng)址為 ：http://www.tsrlinc.com/resources/services/。

 

3.4 溶出儀的校正與校正片使用

 

現(xiàn)今，各儀器廠商皆已具備對儀器進行機械校正的能力。在此基礎(chǔ)上，幾乎皆可通過校正片 ( 美國 / 中國藥典委員會出品 ) 測試。如無法通過，則是溶出杯問題。原因是在手工燒制杯子底部時，無法均一性地制得內(nèi)部完整半球形 ( 燒制厚度不一所致 )。此時，更換溶出杯再行測試便可通過。故建議使用時，安裝位置、槳桿、溶出杯三者皆應(yīng)統(tǒng)一固定。

 

3.5 對“漏槽條件”的再認知

 

漏漕條件的定義為 ：溶出介質(zhì)體積應(yīng)為溶解主成分 ( 為制劑最大規(guī)格量 ) 所需體積的 3 倍以上，以保證藥物溶出不受其溶解性的顯著影響。該理念是美國學者在設(shè)計溶出儀設(shè)備、斟酌溶出杯體積時，根據(jù)當時已上市的大部分藥物折中的設(shè)計體積。

現(xiàn)今，由于溶出杯體積已固定 (900～ 1 000 ml)。因此若以此為出發(fā)點，根據(jù)某藥物在某溶出介質(zhì)中的溶解度來推算采用何種溶出介質(zhì)或添加多少濃度的表面活性劑，將極大地忽視藥物制劑作用，即是對“制劑的作用是改善藥物水難溶性程度”這一概念的擯棄。故該理念在現(xiàn)今溶出度試驗應(yīng)用中已無用武之地。歸根結(jié)底，還是要取原研制劑，采用多條溶出曲線對其予以分析和辨明。

 

3.6 需擬定溶出度檢查的劑型

 

除通常的口服片劑與膠囊劑外，難溶性藥物的顆粒劑或散劑亦需擬定溶出度檢查項，因為此劑型同樣存在主成分在體內(nèi)釋放、吸收的過程。對于咀嚼片，服用時雖要求咀嚼后吞下，但考慮到可能有部分患者誤當作普通片，故為保證該情況下藥物仍能在體內(nèi)快速崩散、溶出，發(fā)揮療效，USP 中幾乎所有咀嚼片皆擬定了溶出度檢查項，而我國目前尚未制訂，值得借鑒。

 

3.7 對“質(zhì)量標準中溶出度試驗所發(fā)揮作用”的再認識

 

質(zhì)量標準中的溶出度試驗，由于僅是一個介質(zhì)、一個時間點、一個限度的擬定。故即便已經(jīng)過以上嚴謹、周密、科學、全面的驗證，在全面評價藥物內(nèi)在品質(zhì)上仍會捉襟見肘、以偏概全，尤在考證不同來源同一制劑品質(zhì)的差異性方面，更顯不足。

此時，推薦進行溶出曲線、乃至多條溶出曲線的測定比對工作?，F(xiàn)今，國際衛(wèi)生組織針對不同來源的同一制劑的質(zhì)量監(jiān)測與評價已全面引入此法。日本對上市仿制藥的質(zhì)量評價也將溶出度試驗單列( 其他項目仍是由地方藥檢所負責 )，由國家藥檢所藥品部主持指導(dǎo)“如何采用多條溶出曲線評價口服固體制劑內(nèi)在品質(zhì)”工作，并與藥品品質(zhì)再評價工程的實施相輔相成。

 

我國藥監(jiān)部門每年均要進行大量的市場抽查監(jiān)測檢驗，僅按質(zhì)量標準檢驗往往不能更深層次地反映問題，建議引入該套評價體系。自 2008 年，SFDA 開展“國家藥品評價性抽驗工作”以來，已將該理念與作法貫徹并實施，取得顯著效果。

 

3.8 期待與展望

 

制藥行業(yè)作為高科技行業(yè)的核心體現(xiàn)就是制劑，具體至固體制劑的工業(yè)藥劑學，而這又是與體外溶出度試驗密不可分、相輔相成的。只有把握這一要點，才能切實提高固體制劑內(nèi)在品質(zhì)、提升藥物的有效性與安全性。