通則<1200>適用范圍，1、注重于在USP-NF決定是否收載與某項測試相關的分析方法及其驗收標準前，USP希望看到的數(shù)據(jù)類型。2、提供了一套系統(tǒng)的驗證方法和標準用以評估驗證數(shù)據(jù)。能夠提供滿足本通則要求的驗證數(shù)據(jù)的分析方法適用于藥典，也可適用于監(jiān)管的考量。3、不是為了滿足公司對于應用于生產(chǎn)基地的分析方法的驗證的需求。

 

通則<1200>對于LOD的新定義，1、配置一個在限度濃度的雜質標準品溶液。2、配置一個添加了在限度濃度的雜質標準品的樣品標準品溶液。3、配置一個添加了（限度100%-RSD%*濃度）的雜質標準品的樣品標準品溶液。如果1≤2且3＜2，則差異可以被檢測出，否則，該方法不能勝任限度檢測。*從Horwitz方程估算得出。

 

個人理解，PF39(6)1200淘汰了檢測限、定量限，提出了新的“可檢測性”，更專注于精密度和準確度的結果。2020版《中國藥典》9101分析方法驗證指導原則只是對方法的準確度和精密度做出了相關規(guī)定，但并未對方法的靈敏度做相應的更改。根據(jù)PF39(6)1200相關理念，方法的精密度驗證中待測樣品應添加規(guī)定限度的指定雜質對照品，以加樣回收率RSD%來評估方法的測定精度。因此今后的方法驗證中應采用加標樣品進行方法的精密度驗證。定量限也需重新定義為滿足準確度及精密度相關要求的最低濃度，樣品中的雜質含量若小于定量限應報告為<LOQ。

 

9101關于回收率、精密度的相關規(guī)定來源于AOAC《Guidelines for Single Laboratory Validation ofChemical Methods for DietarySupplements and Botanicals》，該文章運用Horwitz方程，將回收率、重復性和中間精密度聯(lián)系了起來，堪稱經(jīng)典，相關要求如下圖所示：

個人理解，該規(guī)定可以作為收載入藥典的方法的相關要求，但在藥品研發(fā)過程強制實施，可能會事與愿違，USP<1220>也提出了分析方法的生命周期管理，藥物研發(fā)處于藥品產(chǎn)業(yè)鏈的上游，分析方法只要可以滿足藥品的安全、有效、質量可控的評估即可，關于方法本身的準確度及精密度沒有最好，只有更好，是藥品全生命周期中逐步完善的一部分。

 

二、2020版《中國藥典》兩次征求意見對比

 

關于2020版《中國藥典》9101項下關于回收率及精密度的多次征求意見稿如下表所示：

 

個人理解，由上表可知藥典委在進行準確度、精密度的相關修訂時肯定也考慮了不少的問題，但有三處疑惑，

 

1、修訂第一稿的時候引入了PF39(6)1200Requirements For Compendial Validation，修訂第二稿時又將其刪除 ;

2、第二次修訂稿中明確（回收率、精密度與被分析物的性質、基質復雜程度、樣品溶液的制備和檢測方法等密切相關，在限度設定時應充分考慮），但在2020版正式稿中，該句話卻沒有被收載。

3、在基質復雜、組分含量低于0.01%及多成分等分析中，回收率、精密度可適當放寬，制劑輔料通常種類多、占比重，是否屬于限度可適當放寬范疇，有關物質方法通常都是同時測定十幾種雜質是否屬于多組分分析。

藥物研發(fā)屬于產(chǎn)業(yè)鏈的上游，分析方法處于成型階段，目前最新的ICHQ2(R1)及USP1225中也并未對重復性及回收率的可接受標準明確規(guī)定，但明確指出“接受標準將取決于含量和分析物的性質”。綜上所述，該限度要求作為藥物研發(fā)分析驗證的標尺，對于有些品種，可能無法滿足，在審評中應考慮實際情況，不能一刀切。

 

三、各國法規(guī)指南對該項可接受標準的相關規(guī)定。

 

各國法規(guī)指南對方法驗證中重復性、精密度項下的相關規(guī)定如下表所示，

 

法規(guī)指南	回收率	精密度
ICHQ2(R1)	1、應該用已知量的雜質加入到樣品中（原料藥/制劑）來評價準確度。 2、準確度的評價需采用指定范圍內(nèi)的最少9個測定點，最少3個濃度水平。	1、精密度應該用同一均勻，權威樣品進行考察。然而，如果不能獲得同一均勻樣品，可以用人工制備樣品或樣品溶液進行考察。 2、最少6個測定值，濃度在100%的測定濃度。
USP<1225>	1、可接受標準有賴于含量及其可變性，以及具體樣品。 2、范圍：50%-120%。	1、均質樣品。 2、最少6個測定值，濃度在100%的測定濃度。
USP<1092>溶出	標示量的95-105%	至少6次測定（同一溶出杯樣品連續(xù)進針6次）；溶出曲線可只比較最低濃度與最高濃度（USP1092）。 檢測方法，RSD＜2.0%。 中間精密度的可接受標準或耐用性是預先確定的，溶出度小于 85% 的時間點，RSD不能超過 10.0%；大于 85%的時間點，RSD不能超過 5.0%。
USP42 NF37<1467>殘留溶劑	80%～120%	NMT20%
USP42 NF37<233>元素雜質	50%～150%	NMT20%
APIC清潔驗證指南（原料2014）	例如在雜質定量測試中，回收率≥ 90 %時一般認為是可以接受的。在清潔驗證中，如果回收率≥90 %，在M殘留量真值計算中可以不需要考慮回收率；如果回收率<90%，則需要在M計算時加以考慮（參見公式 4），如果回收率<50%，則該方法不適用。 M=MRES/R，M:清潔后設備上殘留物的數(shù)據(jù)真值，MRES測得殘留量 R:回收率除以100（例如，對于75%即為75/100=0.75）	整個方法濃度范圍內(nèi)的總體相對標準偏差≤10%； 一個濃度水平的相對標準偏差≤20%。
2010版GMP實施指南	限度< 0.5%，80-120% 0.5%≤限度<5%，90-110% 限度≥5%，95-105%	重復性，n≥6 限度< 0.1%，srel≤30% 0.1≤限度< 0.2%，srel≤20% 0.2≤限度<0.5%，srel≤10% 0.5≤限度<5%，srel≤5.0% 限度≥5%，srel≤2.5% 中間精密度，n≥6 限度< 0.1%，srel≤40% 0.1≤限度< 0.2%，srel≤30% 0.2≤限度<0.5%，srel≤15% 0.5≤限度<5%，srel≤7.5% 限度≥5%，srel≤4.0%
2020版《中國藥典》9101	AOAC《Guidelines for Single Laboratory Validation of Chemical Methods for  DietarySupplements and Botanicals》	AOAC《Guidelines for Single Laboratory Validation of Chemical Methods for  DietarySupplements and Botanicals》

個人理解，從國內(nèi)外相關法規(guī)指南，對于方法驗證中的精密度及回收率的考察的可接受標準不盡相同，但均需滿足確保藥品安全、有效、質量可控的底線，分析方法的精度與準確度是我們不懈追求的目標，但也需權衡儀器設備、人員及時間成本。

 

本文從“9101關于回收率、精密度相關規(guī)定的溯源”、“2020版《中國藥典》兩次征求意見對比”、“各國法規(guī)指南對該項可接受標準的相關規(guī)定”三個方面展開論述，目的是說明:

1、分析方法的準確度和精密度是分析工作者不斷追求的目標，如不滿足《中國藥典》9101項目下的相關規(guī)定，需從如何確保產(chǎn)品的安全、有效和質量可控角度進行說明。

2、《中國藥典》9101項目下精密度、準確度項下的相關規(guī)定更適宜作為收載入藥典標準的一個驗收標準，若想在藥物研發(fā)過程中實施，需明確適用范圍，畢竟“在基質復雜、組分含量低于0.01%及多成分等分析中可適當放寬”這句話在日常工作中不好把控。

 

四、文獻

 

[1] 9101分析方法驗證指導原則第二次征求意見稿

[2] 新版GMP實施指南-質量控制實驗室與物料系統(tǒng)

[3] USP鑒別、雜質檢查和含量測定的方法驗證

[4] USP<1200> 、USP<1092>、USP<233>、USP<1467>、USP<1225>

[5] 2010版GMP實施指南