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前言

液相方法很多用到緩沖鹽，我在從事研發(fā)工作的過(guò)程中，發(fā)現(xiàn)很多同仁對(duì)緩沖鹽在液相方法中的應(yīng)用不是太了解，遂分享一部分我的看法，拋磚引玉，相互交流。

適用范圍

本指導(dǎo)原則僅適用于反向色譜與離子對(duì)色譜方法開(kāi)發(fā)過(guò)程。

何時(shí)應(yīng)用緩沖鹽？

樣品或樣品中需研究的關(guān)鍵雜質(zhì)有離子化傾向，其他特定少數(shù)情況另行敘述。

存在較強(qiáng)離子化傾向的組分，其中一部分是分子狀態(tài)，與反相色譜固定相結(jié)合的更好；另一部分是離子狀態(tài)，更親和于流動(dòng)相。如不使用緩沖鹽控制其電離狀態(tài)，即分子狀態(tài)和離子狀態(tài)的比例，很容易出現(xiàn)峰拖尾分叉變形的情況。這種情況下一般就不應(yīng)該使用水/有機(jī)相系統(tǒng)作為流動(dòng)相，應(yīng)選用緩沖鹽/有機(jī)相系統(tǒng)。

緩沖能力與pH選擇

流動(dòng)相如用到緩沖鹽溶液，其應(yīng)當(dāng)有一定的緩沖能力，如果減少進(jìn)樣量，峰形改善，則說(shuō)明很可能緩沖鹽溶液緩沖能力不足。緩沖鹽溶液的緩沖能力與緩沖鹽濃度、緩沖鹽溶液的pH值相關(guān)。緩沖鹽濃度越大，緩沖能力越強(qiáng)；緩沖鹽溶液的pH值越接近其pka，緩沖能力越強(qiáng)。一般緩沖鹽溶液的pH值應(yīng)在其pka±1的范圍內(nèi)，為了確保主成分的保留時(shí)間不因pH值的微小變化產(chǎn)生大的偏離，緩沖鹽溶液的pH值應(yīng)在樣品pka±2的范圍外。

截止波長(zhǎng)

每種緩沖鹽都有其對(duì)應(yīng)的截止波長(zhǎng)，方法的檢測(cè)波長(zhǎng)不得小于緩沖鹽溶液的截止波長(zhǎng)。檢測(cè)波長(zhǎng)越接近流動(dòng)相截止波長(zhǎng)，基線(xiàn)噪音越大，響應(yīng)值誤差越大，組分響應(yīng)值和靈敏度變小。

常用緩沖鹽pka與截止波長(zhǎng)列表

緩沖鹽應(yīng)用一般思路

1、 緩沖鹽濃度一般為10-50mmol/l。根據(jù)樣品性質(zhì)及進(jìn)樣量選擇緩沖鹽濃度，使其滿(mǎn)足應(yīng)有的緩沖能力。

2、 梯度洗脫中有機(jī)相比例允許的最高值，應(yīng)根據(jù)緩沖鹽與有機(jī)相混溶實(shí)驗(yàn)確定。取不同緩沖鹽-有機(jī)相比例，確定有機(jī)相比例允許最高值，如緩沖鹽：有機(jī)相為10:90、20:80、30：70等不同比例。不得在儀器上隨意設(shè)置高比例有機(jī)相，以防緩沖鹽析出損壞儀器。

3、 根據(jù)截止波長(zhǎng)、pH值和緩沖能力等多個(gè)約束條件選擇緩沖鹽，如檢測(cè)波長(zhǎng)在末端吸收，則一般應(yīng)選用磷酸鹽。

4、 常用緩沖鹽溶液有：0.1%磷酸/三氟乙酸/乙酸/甲酸溶液，0.02-0.05mol/l 磷酸二氫鉀溶液（用磷酸調(diào)節(jié)pH至3.0）等

 5、堿性化合物優(yōu)選鉀鹽，抑制拖尾效果更好。