中文字幕一级黄色A级片|免费特级毛片。性欧美日本|偷拍亚洲欧美1级片|成人黄色中文小说网|A级片视频在线观看|老司机网址在线观看|免费一级无码激情黄所|欧美三级片区精品网站999|日韩av超碰日本青青草成人|一区二区亚洲AV婷婷

各種因疾病、創(chuàng)傷導(dǎo)致的骨缺損是現(xiàn)階段臨床中常見的骨科疾病。受限于損傷及患者狀況的復(fù)雜性，許多過大或合并其他異常的骨缺損無法完全依靠人體自身的修復(fù)能力，而需要利用修復(fù)植入體來實(shí)現(xiàn)形態(tài)與功能的恢復(fù)。目前，國內(nèi)外骨缺損修復(fù)中的植入材料主要包括異體骨、組織工程骨和人工骨，其中，人工骨因效果確切、質(zhì)量可控且成本適宜，已具有不可取代的重要地位，并被廣泛應(yīng)用于臨床治療中。人工骨修復(fù)材料的種類多樣，包括羥基磷灰石、生物活性玻璃、磷酸鈣骨水泥等[1-3]。不同的材料在生物相容性和成骨性能等方面存在差異，并因此導(dǎo)致其應(yīng)用范圍存在差別。動(dòng)態(tài)評(píng)價(jià)修復(fù)材料植入后的局部反應(yīng)、成骨性能及與機(jī)體自身骨修復(fù)的適應(yīng)能力，是決定其臨床適應(yīng)證及應(yīng)用安全性與有效性的關(guān)鍵[4-5]。因此，尋找有效的評(píng)價(jià)方法，并將其應(yīng)用于動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中來評(píng)價(jià)人工骨的安全性和有效性，為后續(xù)研究提供有效的數(shù)據(jù)支撐具有重要的意義[6-7]?；诖?，本研究擬在GB/T 16886.6-2015《醫(yī)療器械生物學(xué)評(píng)價(jià) 第6部分：植入后局部反應(yīng)試驗(yàn)》及YY/T 1575-2017《組織工程醫(yī)療器械產(chǎn)品修復(fù)和替代骨組織植入物骨形成活性的體內(nèi)評(píng)價(jià)指南》等標(biāo)準(zhǔn)[8-9]的基礎(chǔ)上，分析典型鈣磷陶瓷人工骨動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中影像學(xué)及組織病理研究等各種方法在評(píng)估動(dòng)態(tài)骨修復(fù)過程中給出的數(shù)據(jù)，考察各方法的優(yōu)勢，并給出綜合評(píng)價(jià)方案的實(shí)例。 

 

羥基磷灰石作為人工骨材料，已被廣泛應(yīng)用于臨床中[10-11]。早在20世紀(jì)80年代，羥基磷灰石的骨誘導(dǎo)性即已被發(fā)現(xiàn)[12-13]。本研究所使用的實(shí)驗(yàn)樣品及對(duì)照樣品均為羥基磷灰石人工骨，其與人體骨無機(jī)成分相似，具有良好的生物相容性、骨傳導(dǎo)性及骨誘導(dǎo)性，臨床應(yīng)用效果較好[14-15]。新型羥基磷灰石人工骨的研發(fā)方向之一即是以其為基質(zhì)材料，引入各種無機(jī)物、有機(jī)物、金屬等進(jìn)行復(fù)合，以解決單純的羥基磷灰石力學(xué)強(qiáng)度低、韌性差、無法應(yīng)用在承力 骨中等局限性問題[16-18]。這些新技術(shù)可能帶來新的與安全性、有效性相關(guān)的風(fēng)險(xiǎn)，因此，可能需要重新進(jìn)行相應(yīng)的評(píng)價(jià)。在當(dāng)前的評(píng)價(jià)實(shí)踐中，除了按照GB/T 16886.1標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行的生物學(xué)評(píng)價(jià)外，針對(duì)其有效性及與成骨相關(guān)性質(zhì)的 研究往往仍需要通過臨床前動(dòng)物實(shí)驗(yàn)來完成[19-20]。

 

1材料與方法

 

1.1  材料 

1.1.1  實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 

新西蘭白兔30只[由邳州市東方養(yǎng)殖有限公司提供；生產(chǎn)許可證號(hào)：SCXK（蘇）2017-0002 ；使用許可證編號(hào)：SCXK（川）-2013-14]，體重2.0~3.0 kg，雌雄不限（雌兔未產(chǎn)無孕），均在普通環(huán)境下飼養(yǎng)，室溫控制在 20~23 ℃，相對(duì)濕度控制在44%~52%，采用人工控制12 h光照、12 h黑暗。

 

1.1.2  實(shí)驗(yàn)樣品

實(shí)驗(yàn)樣品為羥基磷灰石人工骨，規(guī)格Φ5 mm×8 mm，白色圓柱體多孔材料；對(duì)照樣品為已上市的羥基磷灰石人工骨，規(guī)格Φ5 mm×8 mm，白色圓柱體多孔材料。

 

1.1.3  主要儀器及軟件 

BX60奧林巴斯顯微鏡、DP22顯微鏡成像系統(tǒng)（Olympus Corporation公司，日本），小動(dòng)物X線成像系統(tǒng)（kubtec，美國），viva CT 80（SCANCO MEDICAL，瑞士），EXAKT 300 CP/400 CS硬組織切磨系統(tǒng)（EXKT Apparatebau GmbH & Co.KG，德國），石蠟切片機(jī)及自動(dòng)脫水系統(tǒng)（LEICARM2135 TP1020，德國），全自動(dòng)染色機(jī)（Thermo Scientific Gemini AS，美國），包埋機(jī)（Thermo Fisher Histo Star，美國），Image-Pro Plus 6.0，Materialise Mimics Innovation Suite 19.0。 

 

1.1.4  主要試劑 

（1）HE染色：二甲苯（成都市科隆化學(xué)品有限公司），蘇木素、伊紅染液（Thermo）。（2）甲苯胺藍(lán)染色：二甲苯（成都市科隆化學(xué)品有限公司），甲苯胺藍(lán)染色液（索萊寶），丙酮（成都市科隆化學(xué)品有限公司）。（3）免疫組化：α-SMA一抗抗體（abcam），二抗試劑盒（中杉金橋），DAB 顯色液（中杉金橋），抗原修復(fù)液（博士德）。 

 

1.2  方法 

1.2.1  動(dòng)物分組 

于各時(shí)間點(diǎn)隨機(jī)分配，每個(gè)時(shí)間點(diǎn)10只。

 

1.2.2  手術(shù)方法 

 

動(dòng)物側(cè)臥，用取骨環(huán)鉆在其左右側(cè)大腿股骨髁處各造 一個(gè)直徑5 mm、深8 mm的圓柱形缺損，分別植入實(shí)驗(yàn)樣品 及對(duì)照樣品；于植入術(shù)后4、13、26周，分別處死動(dòng)物，取出植入材料及其周圍組織。 

 

1.2.3  染色方法 

（1）HE染色：切片脫蠟至水；蘇木素染色5 min；流水沖洗；1% 鹽酸分化數(shù)秒；自來水藍(lán)化；伊紅染色30 s ；脫水、透明、中性樹膠封片。（2）甲苯胺藍(lán)染色：切片脫 蠟至水；甲苯胺藍(lán)染色液染色10 min；水洗；入丙酮分化至骨和軟骨細(xì)胞清楚；脫水、透明；中性樹膠封片。（3）免疫組化：切片脫蠟至水；高溫抗原修復(fù)，切片入抗原修復(fù)液內(nèi)微波20 min ；過氧化氫封閉10 min ；血清封閉10 min ；一抗4 ℃過夜孵育后，PBS沖洗；二抗孵育30 min 后，PBS沖洗；三抗孵育30 min后，PBS沖洗；DAB顯色，適時(shí)自來水沖洗終止；蘇木素淡染、藍(lán)化、脫水、透明；中性樹膠封片。 

 

1.2.4  數(shù)據(jù)獲取及評(píng)價(jià)方法 

 

通過X線攝片觀察結(jié)合Micro-CT 分析，評(píng)價(jià)骨缺損區(qū)域的骨形成、骨連接和骨塑形情況；通過組織病理學(xué)觀察，評(píng)價(jià)骨缺損區(qū)域的組織性質(zhì)、組織反應(yīng)、骨形成、髓腔再通及成骨細(xì)胞數(shù)量。 

 

本研究關(guān)注影像學(xué)及組織病理研究相結(jié)合對(duì)骨形成的評(píng)價(jià)，因此，研究中的組織病理切片位置的選取，將以影像學(xué)結(jié)果為基礎(chǔ)。其原則為切片切面須包含植入樣品與周邊新生骨組織的交界處，并盡量沿骨形成與重塑的界面區(qū)域隨機(jī)選擇。

 

1.3  統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 

 

本研究中的定量數(shù)據(jù)，如切片上特定細(xì)胞的比較等，采用SPSS 2.3統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行處理，各組間比較采用單因素方差分析，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 

 

2結(jié)果

 

2.1  X線影像學(xué)檢查及 Micro-CT分析

X線影像學(xué)檢查結(jié)果見圖1。植入術(shù)后即刻，樣品組與對(duì)照組缺損模型位置準(zhǔn)確，植入材料與自體骨貼合緊密，密度接近，但可見明顯的界限，雙側(cè)股骨髁均未出現(xiàn)骨折及其他缺損；術(shù)后4周，樣品組與對(duì)照組區(qū)域輪廓不清晰， 部分區(qū)域與自體骨界限模糊，可見骨連接，缺損區(qū)域密度增高，可見新骨形成；術(shù)后13周，樣品組與對(duì)照組區(qū)域輪廓不清晰，與周邊自體骨開始融合，與自體骨界限模糊，可見骨連接，缺損區(qū)域密度增高，可見新骨形成，雙側(cè)股 骨髁均未出現(xiàn)骨折及其他新的缺損；術(shù)后26周，樣品組與對(duì)照組缺損區(qū)域消失，與自體骨無明顯的界限。由此可見，本研究通過對(duì)骨缺損區(qū)域的X線攝片檢查，可以較好地判斷骨連接情況，但無法計(jì)算骨形成的準(zhǔn)確面積，無法判斷 皮質(zhì)骨塑形及骨髓腔形成。 

注：a為術(shù)后即刻樣品組股骨髁X線片；b為術(shù)后即刻對(duì)照組股骨髁X線片；c為術(shù)后4周樣品組股骨髁X線片；d為術(shù)后4周對(duì)照組股骨髁X線片；e為術(shù)后13周樣品組股骨髁X線片；f為術(shù)后13周對(duì)照組股骨髁X線片；g為術(shù)后26周樣品組股骨髁X線片；h為術(shù)后26周對(duì)照組股骨髁 X 線片

圖1　X線影像學(xué)檢查結(jié)果

 

Micro-CT結(jié)果見圖2。植入術(shù)后4、13周，對(duì)照組降解程度大于樣品組，至術(shù)后26周，對(duì)照組與樣品組降解程度接近，但在現(xiàn)有分辨力的條件下無法定量計(jì)算各自的體積分?jǐn)?shù)；通過對(duì)股骨髁三維重建情況進(jìn)行分析發(fā)現(xiàn)，術(shù)后 4周，樣品組與對(duì)照組骨缺損區(qū)域明顯，未見明顯骨塑形，而術(shù)后13、26周，樣品組與對(duì)照組骨缺損區(qū)域皮質(zhì)骨可見明顯骨塑形，股骨髁外形基本恢復(fù)。

注：a為術(shù)后4周，對(duì)照組（左）樣品組（右）；b為術(shù)后4周股骨髁三維重建，對(duì)照組（左）樣品組（右）；c為術(shù)后13周，對(duì)照組（左）樣品組（右）；d為術(shù)后13周股骨髁三維重建，對(duì)照組（左）樣品組（右）；e為術(shù)后26周，對(duì)照組（左）樣品組（右）；f為術(shù)后26周股骨髁三維重建，對(duì)照組（左）樣品組（右） 

圖2　Micro-CT 結(jié)果

 

2.2  組織病理學(xué)觀察 

2.2.1  組織性質(zhì)、炎癥反應(yīng)、髓腔重塑（軟組織HE染色） 

植入術(shù)后26周實(shí)驗(yàn)樣品和對(duì)照樣品的組織學(xué)觀察結(jié)果見圖3。在植入術(shù)后26周，實(shí)驗(yàn)樣品和對(duì)照樣品的骨缺損區(qū)域見植入材料，材料周圍見纖維組織、新骨形成及骨髓組織，纖維組織中可觀察到極少量的炎癥細(xì)胞，主要為多 形核白細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、巨細(xì)胞。觀察其他時(shí)間點(diǎn)HE染色 切片可見，樣品組，術(shù)后4周，骨缺損區(qū)域未見明顯骨髓腔的重塑，術(shù)后13周，在骨缺損區(qū)域外圍的材料周圍觀察到少量的骨髓樣組織，至術(shù)后26周，骨缺損區(qū)域可見廣泛分布的骨髓組織；對(duì)照組，術(shù)后4周，在骨缺損區(qū)域外圍的材料周圍觀察到少量的骨髓組織，術(shù)后13周，骨缺損區(qū)域內(nèi)開始出現(xiàn)骨髓樣組織，至術(shù)后26周，骨缺損區(qū)域骨髓組織廣泛分布。由此可見，樣品組及對(duì)照組骨缺損區(qū)域未見異常 組織及明顯的炎癥反應(yīng)；術(shù)后26周，骨髓組織在缺損區(qū)域廣泛分布，髓腔再通，骨缺損區(qū)域的髓腔逐漸形成。

 

 

注：a為實(shí)驗(yàn)樣品100×；b為實(shí)驗(yàn)樣品400×；c為對(duì)照樣品100×；d為對(duì)照樣品400×

圖3　植入術(shù)后26周實(shí)驗(yàn)樣品和對(duì)照樣品的組織學(xué)觀察結(jié)果（HE染色）

2.2.2  纖維化（α-SMA染色） 

實(shí)驗(yàn)樣品和對(duì)照樣品的α-SMA染色結(jié)果見圖4。植入術(shù)后4周，實(shí)驗(yàn)樣品和對(duì)照樣品的骨缺損區(qū)域纖維組織廣泛分布，且包裹區(qū)較厚；術(shù)后13周，雖然實(shí)驗(yàn)樣品和對(duì)照樣品的骨缺損區(qū)域纖維組織分布仍廣泛，但厚度較術(shù)后4周有了明顯的降低；術(shù)后26周，纖維組織主要分布于骨缺損中心區(qū)域，其他區(qū)域不明顯，其厚度較術(shù)后4、13周進(jìn)一步降低。

 

 

注：a為術(shù)后4周的實(shí)驗(yàn)樣品；b為術(shù)后4周的對(duì)照樣品；c為術(shù)后13周的實(shí)驗(yàn)樣品；d為術(shù)后13周的對(duì)照樣品；e為術(shù)后26周的實(shí)驗(yàn)樣品；f為術(shù)后26周的對(duì)照樣品 

圖4　實(shí)驗(yàn)樣品和對(duì)照樣品的免疫組化結(jié)果（α-SMA染色）

 

2.2.3  成骨細(xì)胞數(shù)量（軟組織HE染色） 

樣品組與對(duì)照組各取4只動(dòng)物，于病理組織切片后進(jìn)行觀察，并于每只動(dòng)物的骨缺損區(qū)域隨機(jī)取5個(gè)視野，在400×下，進(jìn)行成骨細(xì)胞計(jì)數(shù)，取平均值，結(jié)果見表1~3。本研究中，無論是樣品組還是對(duì)照組，早期成骨均活躍， 植入術(shù)后4周時(shí)缺損區(qū)材料周邊均可見新生骨小梁周邊的成骨細(xì)胞分布，見圖5。 

 

表1　術(shù)后4周的成骨細(xì)胞數(shù)量

 

表2　術(shù)后13周的成骨細(xì)胞數(shù)量

 

表3　術(shù)后26周的成骨細(xì)胞數(shù)量

注：a 為實(shí)驗(yàn)樣品 400×；b 為對(duì)照樣品 400×

圖5　植入術(shù)后4周實(shí)驗(yàn)樣品和對(duì)照樣品新生骨中成骨細(xì)胞觀察結(jié)果（HE染色）

2.2.4  骨形成（甲苯胺藍(lán)染色） 

以甲苯胺藍(lán)染色后進(jìn)行的骨形成評(píng)價(jià)結(jié)果見表4~6及圖6。在行甲苯胺藍(lán)染色后，缺損區(qū)域呈現(xiàn)3種顏色，其中植入材料為黑色，骨組織為藍(lán)色，其余區(qū)域?yàn)榘咨?；采用圖像分析軟件Image-Pro Plus 6.0分別統(tǒng)計(jì)出3種顏色的面積，可幫助觀察新骨的形成。

 

表4　術(shù)后4周的新骨形成百分比

 

表5　術(shù)后13周的新骨形成百分比

 

表6　術(shù)后26周的新骨形成百分比

注：a為術(shù)后4周的實(shí)驗(yàn)樣品；b為術(shù)后4周的對(duì)照樣品；c為術(shù)后13周的實(shí)驗(yàn)樣品；d為術(shù)后13周的對(duì)照樣品；e為術(shù)后26周的實(shí)驗(yàn)樣品；f為術(shù)后26周的對(duì)照樣品 

圖6　實(shí)驗(yàn)樣品和對(duì)照樣品新骨形成結(jié)果（甲苯胺藍(lán)染色）

 

組織病理學(xué)觀察表明，植入術(shù)后4周，實(shí)驗(yàn)樣品和對(duì)照樣品的新骨形成主要集中在骨缺損區(qū)域的邊緣，于骨缺損區(qū)域內(nèi)只能觀察到極少量的新骨形成，樣品組新骨形成百分比均值低于對(duì)照組，但組間比較未見顯著性差異；術(shù)后 13周，實(shí)驗(yàn)樣品和對(duì)照樣品骨缺損區(qū)域內(nèi)的新骨形成量均明顯高于術(shù)后4周，樣品組新骨形成百分比均值略低于對(duì)照組，但組間比較未見顯著性差異；術(shù)后26周，實(shí)驗(yàn)樣品和對(duì)照樣品骨缺損區(qū)域內(nèi)可見大面積的新骨形成，樣品組新 骨形成百分比均值高于對(duì)照組，但組間比較未見顯著性差異，兩組動(dòng)物新骨形成百分比均已接近40%。 

 

3 討論

 

骨缺損是現(xiàn)階段臨床中常見的疾病。自體骨、同種異體骨、異種骨是較為理想的骨修復(fù)物來源，但是這些修復(fù)植入物仍存在來源、排異、病源因子傳染等問題[21-22]。人工骨因具有效果確切、質(zhì)量可控、成本適宜等優(yōu)點(diǎn)，可能是 較理想的骨修復(fù)材料[23-24]。隨著生物材料科學(xué)的發(fā)展和制造技術(shù)等的進(jìn)步，大量的新工藝、新材料被應(yīng)用到人工骨中，但是，隨之而來的在患者風(fēng)險(xiǎn)與受益上的擔(dān)憂，阻礙了一些新型人工骨的上市[25-26]。因此，高效、合理地綜合 評(píng)估人工骨的安全性與有效性，對(duì)于充分認(rèn)識(shí)新技術(shù)帶來的風(fēng)險(xiǎn)與收益、解除其上市障礙具有重要的意義[27-28]。當(dāng)前，臨床前動(dòng)物實(shí)驗(yàn)仍是綜合進(jìn)行器械安全有效研究的重要手段之一，但是，對(duì)于如何結(jié)合臨床前動(dòng)物實(shí)驗(yàn)所能獲 得的各種數(shù)據(jù)，綜合評(píng)估人工骨的骨形成情況尚缺乏具體的指導(dǎo)[29-30]。為此，本研究參考 GB/T 16886.6-2015《醫(yī)療器械生物學(xué)評(píng)價(jià) 第6部分：植入后局部反應(yīng)試驗(yàn)》及YY/T 1575-2017《組織工程醫(yī)療器械產(chǎn)品修復(fù)和替代骨組織植入物骨形成活性的體內(nèi)評(píng)價(jià)指南》等標(biāo)準(zhǔn)，并結(jié)合人工骨產(chǎn)品的自身特點(diǎn)，考察影像學(xué)及組織病理研究數(shù)據(jù)對(duì)骨形成能力進(jìn)行評(píng)價(jià)的適用性，對(duì)綜合使用各方法進(jìn)行全面的評(píng)價(jià)進(jìn)行探索。 

 

對(duì)骨缺損區(qū)域成骨面積/體積的評(píng)估，是評(píng)價(jià)植入材料成骨性能的首要任務(wù)[31-32]。傳統(tǒng)的評(píng)價(jià)方法有：（1）通過X線檢查，估算骨缺損區(qū)域的成骨面積，該方法誤差較大，無法做到準(zhǔn)確的定量分析；（2）組織病理學(xué)觀察，無論采用何種染色方法，因切片受取材等過程的影響，只能單純依靠鏡下觀察，同樣存在誤差大、無法準(zhǔn)確定量的問題；（3） Micro-CT等可3D重建的觀察方法，可從植入?yún)^(qū)的整 體角度進(jìn)行比較分析，但受限于分辨力及植入材料與新生骨CT信號(hào)差異性大小等因素，當(dāng)需比較的植入材料之間差異性較小時(shí)，數(shù)據(jù)之間的可比較性仍存在問題。因此，本研究將影像學(xué)與組織病理學(xué)圖像分析相結(jié)合，首先通過X線及Micro-CT結(jié)果構(gòu)建缺損區(qū)新骨形成及重塑在時(shí)間與空間維度上的整體印象，尋求各時(shí)點(diǎn)各缺損修復(fù)變化需觀察的“感興趣”區(qū)域；之后，通過對(duì)“感興趣”區(qū)域取材組織進(jìn)行甲苯胺藍(lán)染色，計(jì)算得到新骨面積占骨缺損區(qū)域面積的百分比；最后，結(jié)合影像學(xué)與組織病理觀察到的新生 骨量及分布數(shù)據(jù)，分析缺損的修復(fù)及重塑情況。通過該方法，可以較為準(zhǔn)確地了解到各個(gè)時(shí)期、不同材料在骨缺損區(qū)域特定位置成骨量的差異，從而獲得更多的數(shù)據(jù)信息，為評(píng)價(jià)材料的成骨性能提供更為可靠的依據(jù)。 

 

材料的骨傳導(dǎo)性是判斷與比較其體內(nèi)修復(fù)能力的關(guān)鍵[33-34]。本研究結(jié)合 HE 染色及甲苯胺藍(lán)染色考察了在植入材料周圍的骨形成情況，結(jié)果顯示，植入術(shù)后4周，新骨開始在材料區(qū)域邊緣形成；術(shù)后13周，新骨沿材料表面向材料區(qū)域內(nèi)長入，并與材料貼合緊密；術(shù)后26周，骨缺損區(qū)域中心的植入材料內(nèi)可觀察到貼合緊密的新骨，說明受試樣品對(duì)新骨形成起到了支架作用，具有良好的骨傳導(dǎo)性，此外，骨缺損區(qū)域除留存未降解的部分植入材料外，材料空隙區(qū)域可見大面積成片連接的新骨形成。通過HE染色可見，在骨植入術(shù)后4周，植入材料周圍炎癥反應(yīng)輕微，可見豐富的纖維組織及少量新生的毛細(xì)血管，新骨及材料表面可見豐富的成骨細(xì)胞排列，部分區(qū)域的材料附近可以觀察到少量的破骨細(xì)胞，說明受試樣品周圍早期成骨即已活躍。但這些與成骨相關(guān)的信息，在X線觀察及Micro-CT結(jié)果中并不能得到。 

 

纖維組織形成是植入物組織反應(yīng)評(píng)價(jià)中的一項(xiàng)重要指標(biāo)。金屬、陶瓷、聚乙烯等非降解、無孔的材料，纖維化一般只局限于材料外圍，表現(xiàn)為形態(tài)完整規(guī)則的囊狀纖維層結(jié)構(gòu)，在評(píng)價(jià)中只需根據(jù)包囊壁的厚度，即可推斷纖維化的程度；而羥基磷灰石人工骨等可降解、多孔的材料，隨著實(shí)驗(yàn)周期的增加，植入材料部分降解，原有的形態(tài)結(jié)構(gòu)會(huì)發(fā)生改變，纖維組織會(huì)逐漸長入材料內(nèi)部，纖維化區(qū)域會(huì)與形成的新骨、骨髓組織及各種組織細(xì)胞交雜，僅依靠常規(guī)的 HE染色很難準(zhǔn)確判斷出纖維化的準(zhǔn)確范圍。本研究結(jié)果顯示，植入術(shù)后4周，在HE染色下觀察，由于骨缺 損區(qū)域其他組織尚未形成，纖維組織區(qū)域范圍明確，而至術(shù)后13、26周，實(shí)際上已無法確定纖維化范圍。為了進(jìn)一步對(duì)纖維化區(qū)域進(jìn)行準(zhǔn)確的定位及定量分析，本研究嘗試對(duì)骨缺損區(qū)域的病理組織進(jìn)行了α-SMA染色（免疫組化），在該染色下，呈棕褐色的纖維化區(qū)域被清晰地標(biāo)識(shí)。實(shí)際上，人工骨植入術(shù)后早期的纖維化可能提供了局部成骨微環(huán)境，一些修復(fù)相關(guān)的間充質(zhì)干細(xì)胞可能來源于此，但是，持續(xù)的界面纖維組織形成，尤其是修復(fù)中后期，可能會(huì)阻礙植入人工骨材料被骨組織替代，不利于修復(fù)，因此，對(duì)這些纖維組織形成的追蹤，在評(píng)估人工骨材料實(shí)際應(yīng)用表現(xiàn)時(shí)值得關(guān)注[35-36]。

 

綜上所述，針對(duì)受試材料的自身特點(diǎn)，設(shè)置合理的評(píng)價(jià)方法，協(xié)同各種方法，對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行綜合分析，能夠更好地反映人工骨在體內(nèi)反應(yīng)的全過程，并對(duì)其安全性與有效性進(jìn)行公允的評(píng)價(jià)。

 

【參考文獻(xiàn)】

［1］周萌萌，劉宏，郭偲.復(fù)合人工骨修復(fù)材料功能性應(yīng)用進(jìn)展[J].中國藥師，2017，20（5）：899-903.

［2］年利偉，趙建民，劉瑞.納米羥基磷灰石復(fù)合人工骨的研究進(jìn)展[J].內(nèi)蒙古醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)，2015，37（3）：274-277.

［3］陳濤，付海洋，李巖，等.羥基磷灰石基復(fù)合骨修復(fù)材料研究進(jìn)展[J].中國藥事，2019，33（3）：302-309.

［4］吳浩俊，譚榮雄，何艷霞，等.磷酸鈣活性人工骨與自體骨顆粒環(huán)抱式植骨治療四肢骨不連[J].中國臨床解剖學(xué)雜志，2020，38（2）：202-207.

［5］趙培安，沈建明，張冶，等.帶旋髂深血管蒂髂骨瓣聯(lián)合萬古霉素BAM骨誘導(dǎo)人工骨治療脛骨骨髓炎[J].浙江創(chuàng)傷外科，2017，22（3）：484-486.

［6］岑超德，張永，羅聰，等.3D打印PLLA/β-TCP復(fù)合人工骨及組織相容性研究[J].實(shí)用骨科雜志，2019，25（4）：326-332，365.

［7］林山，芮鋼，胡義，等.數(shù)字化珊瑚羥基磷灰石人工骨修復(fù)兔脛骨腔隙性骨缺損 [J].中國骨與關(guān)節(jié)損傷雜志，2018，33（2）：153-156.

［8］中華人民共和國國家質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)檢疫總局，中國國家標(biāo)準(zhǔn)化管理委員會(huì). GB/T 16886.6-2015醫(yī)療器械生物學(xué)評(píng)價(jià) 第6部分：植入后局部反應(yīng)試驗(yàn)[S/OL].（2015-12-10）[2017-04-01].http://www.csres.com/detail/278215.html.

［9］國家食品藥品監(jiān)督管理總局.YY/T 1575-2017組織工程醫(yī)療器械產(chǎn)品修復(fù)和替代骨組織植入物骨形成活性的體內(nèi)評(píng)價(jià)指南[S/OL].（2017-08-18 ）[2018-09-01].http://www.csres.com/ detail/303301.html.

［10］Huang QL, Liu YS, Ouyang ZX, et al.Comparing the regeneration potential between PLLA/Aragonite and PLLA/Vaterite pearl composite scaffolds in rabbit radius segmental bone defects[J].Bioactive Materials, 2020,5(4): 980-989.

［11］羅婷苑，張森林 .珊瑚羥基磷灰石聯(lián)合濃縮生長因子修復(fù)兔顱骨缺損[J]. 醫(yī)學(xué)研究生學(xué)報(bào)，2017，30（4）：376-379.

［12］王超民，劉鐵堅(jiān)，宋振華，等.離體滅活多孔骨瓣結(jié)合BAM骨誘導(dǎo)人工骨修復(fù)大鼠顱骨缺損的效果評(píng)價(jià)[J].南方醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)，2018，38（6）：748-754.

［13］陳浩東，姚金鳳，梁志剛.磷酸鈣的固有骨誘導(dǎo)性及其應(yīng)用[J].中國組織工程研究，2016，20（25）：3785-3792.

［14］辛雷，蘇佳燦.人工骨修復(fù)材料的現(xiàn)狀與展望[J].創(chuàng)傷外科雜志，2011，13（3）：272-275，284.

［15］Yu YK,Wang Y,Zhang WD, et al.Biomimetic periosteum-bone substitute composed of preosteoblast-derived matrix and hydrogel for large segmental bone defect repair[J].Acta Biomaterialia, 2020.

［16］張?jiān)?，王瑾，劉克達(dá)，等.納米羥基磷灰石/膠原復(fù)合材料在口腔骨缺損中的應(yīng)用及研究進(jìn)展 [J].中國實(shí)用口腔科雜志， 2020，13（6）：375-378. ［17］全君杰，羅剛，李志容，等.絲素蛋白/殼聚糖/羥基磷灰石膜具有好的生物相容性及促成骨性能[J].分子影像學(xué)雜志，2020，43（3）：543-547.

［18］鄔波，柳椰，馬旭，等.3D打印膠原/羥基磷灰石支架對(duì)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞成骨分化的作用研究[J].中華老年骨科與康復(fù)電子雜志，2020，6（3）：123-127.

［19］方依婷，曾艷，張星宇，等.兩種羥基磷灰石成骨能力的對(duì)比研究[J].解剖學(xué)研究，2015，37（4）：268-269，365.

［20］鮑小剛，許國華.兔脛骨大段完全骨缺損的解剖學(xué)模型構(gòu)建[J].中國組織工程研究，2016，20（24）：3508-3515.

［21］方紫焱.羥基磷灰石復(fù)合材料的應(yīng)用進(jìn)展[J].山東化工，2020，49（9）：81-82，84.

［22］孫浩遠(yuǎn)，宋科官.納米羥基磷灰石復(fù)合物治療骨缺損的研究進(jìn)展[J].中國骨科臨床與基礎(chǔ)研究雜志，2019，11（5）：300-307.

［23］高飛，閆明，朱珊珊，等.羥基磷灰石在生物材料中的應(yīng)用[J].現(xiàn)代口腔醫(yī)學(xué)雜志，2019，33（5）：310-313.

［24］陳琦，李石巖，禹鑫，等.CGF復(fù)合絲素蛋白-羥基磷灰石支架對(duì)兔下頜骨缺損的修復(fù)作用[J]. 河北醫(yī)學(xué)，2020，26（4）：698-702.

［25］黃棣，張秀梅，徐夢潔，等.鈦納米管表面單寧酸/羥基磷灰石復(fù)合物的形成與性能表征[J].醫(yī)用生物力學(xué)，2019，34（S1）：62.

［26］張永霞，嚴(yán)亮，盧曉龍.PPC/納米羥基磷灰石復(fù)合材料的制備及其性能研究 [J].塑料科技，2019，47（8）：7-11.

［27］黃文良，鄧江，苑成，等.組織工程化人工骨種植體修復(fù)兔骨缺損效果研究 [J].山東醫(yī)藥，2010，50（20）：45-47.

［28］胡建中，呂紅斌，周江南.新型羥基磷灰石人工骨對(duì)兔成骨過程影響的電鏡觀察[J].中國運(yùn)動(dòng)醫(yī)學(xué)雜志，1997（3）：179180，191.

［29］趙建華，廖維宏，劉鵬，等.消旋聚乳酸/羥基磷灰石/脫鈣骨基質(zhì)人工骨修復(fù)兔橈骨大段骨缺損的實(shí)驗(yàn)研究 [J]. 第三軍醫(yī) 大學(xué)學(xué)報(bào)，2003（21）：1943-1946.

［30］趙登亮，孟秀英，賈玉萍，等.羥基磷灰石人工骨在醫(yī)學(xué)中的應(yīng)用[J].內(nèi)蒙古醫(yī)學(xué)雜志，1996（3）：176-177.

［31］王翠，錢秀清.新型仿生骨材料修復(fù)山羊顱骨缺損的實(shí)驗(yàn)研究[J].北京生物醫(yī)學(xué)工程，2017，36（1）：29-36.

［32］郝劍，郝釗.骨移植材料研究進(jìn)展[J].中國中西醫(yī)結(jié)合外科雜志，2016，22（1）：92-94.

［33］翁文杰，董天華，陳賢志，等.多孔型羥基磷灰石陶瓷人工骨的生物力學(xué)性能評(píng)價(jià)[J].江蘇醫(yī)藥，1995（10）：677-678.

［34］陳曉，蘇佳燦.生物植骨材料的過去、現(xiàn)在和未來[J].中華創(chuàng)傷雜志，2015，31（7）：577-580.

［35］應(yīng)呂方，賈敘鋒，程尹，等.硫酸鈣人工骨復(fù)合培養(yǎng)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞對(duì)骨誘導(dǎo)脊柱融合的影響[J].中國組織工程研究，2016，20（43）：6396-6402. ［36］蘇鵬，張巍巍，余華偉，等.脂肪干細(xì)胞在人工骨支架誘導(dǎo)下的成骨效應(yīng)[J].中國組織工程研究，2015，19（28）：4493-4497.