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1. 準(zhǔn)備工作

● 查閱文獻(xiàn)

● 做好樣品前處理，萃取濃縮分離純化

● 有條件的可先在HPLC上摸好LC條件，能夠基本分離更好，緩沖體系符合MS要求

● 溶劑包括水的純度，最好色譜純以上

● 新的色譜柱可能要先沖洗很長時間才能干凈,某些樣品非常容易吸附在進(jìn)樣閥和管路中，用溶劑清洗

● 質(zhì)譜儀須校準(zhǔn)，預(yù)熱時間要足夠長，氣流的穩(wěn)定也很重要，液N氣閥開度要注意，達(dá)到穩(wěn)定程度

 

2. MS條件優(yōu)化——先定性后定量

● 首先，確定離子化方式：

ESI or APCI，POS or NEG

 

● 用10-100ppm的純樣，Q1 SCAN 察看存在哪些離子，要能夠看到待測的母離子，應(yīng)明顯比周圍的噪聲離子高，通過改變DP,觀察離子的增減,若為POS方式，看M+1，M+18，M+23等等,初步判斷分子離子,如看不到則可能是濃度太低或離子化方式不合適，或選擇的溶劑體系不合適

 

● 母離子選M+H,或M-H最好,但有時只有M+NH4,M+Na等,這樣CAD能量可能需要高些,選擇[M+H]+，還是+NH4，+Na等，要由化合物決定。加合離子若穩(wěn)定，則可用，不穩(wěn)定則可能需換流動相，但+H通常好些，所需碰撞能量低，靈敏度高；如含Cl可選擇2個母離子峰

 

● SIM與MRM，單級Q只能SIM，MRM可看成2個SIM，選擇性更好

 

● 再根據(jù)上一步確定的母離子進(jìn)行PRODUCT SCAN，確保所有碎片離子都來自待測化合物，而不是溶液中的雜質(zhì)，找出較強(qiáng)的碎片離子信息。還可改變CE，從中選定MRM需要測定的一對或更多離子對,為最后LC-MS/MS聯(lián)用做準(zhǔn)備

 

● 做PRODUCT SCAN時，注意小數(shù)點(diǎn)后的位數(shù),MRM輸入要準(zhǔn),靈敏度才高

 

● 先多選幾個離子對，待出現(xiàn)基質(zhì)干擾時可換，最后根據(jù)法規(guī)要求確定離子對數(shù)目

 

● MRM方式優(yōu)化儀器，通過優(yōu)化儀器參數(shù)，使得母、子離子都達(dá)到一定強(qiáng)度水平，使MRM靈敏度最高?？上茸寖x器自動優(yōu)化參數(shù)，然后再手動細(xì)致優(yōu)化，只檢測一對離子時根據(jù)TIC的強(qiáng)度來確定儀器參數(shù)，一次優(yōu)化多對離子時，要根據(jù)每對離子的XIC強(qiáng)度來分別確定儀器參數(shù)

 

● 先用注射泵優(yōu)化COMPOUND項下面的參數(shù)，如DP、CE及CAD等，再接通LC，用FIA優(yōu)化其他參數(shù)如溫度，氣流和IS電壓及離子源位置，或接一個三通，樣品仍由注射泵進(jìn)入離子源，同時LC保持需要的流量. 然后進(jìn)行MRM測定。

 

● CURTAIN GAS在不降低靈敏度情況下盡量大些，霧化輔助加熱氣流不用太大，這樣可以提高信噪比，保持信號穩(wěn)定。

 

● 分辨率的選擇：當(dāng)樣品較純，Q3可選LOW，提高靈敏度，若選LOW后本底噪聲太高則意義不大。

 

3. LC條件優(yōu)化

 

● 色譜柱長度可根據(jù)分離的要求而定，定性可長些,定量在能有效排除干擾情況下盡量短,提高效率；內(nèi)徑最好選細(xì)徑柱如2mm的,1mm的,IS可不分流, 4.6mm柱用1ml流量時如不分流靈敏度還不是最佳,不如流量低時更好。流速高，峰形好

 

● 不同牌號色譜柱，效果很可能不同

 

● PH的影響-正離子方式PH要低些，負(fù)離子方式PH要高些，除對離子化有影響外，還影響LC的峰形，以至定量誤差。流動相加乙酸銨可適合大部分測定要求

 

● 用流動相配的標(biāo)樣，初步優(yōu)化確定LC條件是否合適

 

● 標(biāo)準(zhǔn)品工作液現(xiàn)配現(xiàn)做，尤其是較低濃度，時間長了可能因吸附分解等降低

 

● 進(jìn)樣順序要先稀后濃

 

● 洗針液要常換，進(jìn)過濃樣后要進(jìn)一針空白，檢驗是否有殘留污染

 

● 順序：純樣-添加樣-實際樣品

 

● 流動相液優(yōu)化后，空白提取液配制標(biāo)準(zhǔn)再優(yōu)化，看干擾，空白添加再提取后看回收率

 

● 用空白提取液配制標(biāo)準(zhǔn)樣做曲線，準(zhǔn)確，有效排除干擾因素

 

前處理方法的優(yōu)化

 

● LC，MS都優(yōu)化還不行，改提取方法

 

● 離子抑制-改變前處理方法或LC條件

 

● 內(nèi)標(biāo)用法，藥代動力學(xué)時多采用內(nèi)標(biāo)，選擇原則：內(nèi)標(biāo)物與被測物的化學(xué)性質(zhì)有區(qū)別時，要注意干擾基質(zhì)對他們的離子化影響的不同，盡量選同系物。還可利用同位素標(biāo)記

 

● 衍生化：有時有助于信號強(qiáng)，且穩(wěn)定，例如硝基呋喃類，衍生化后容易測量。

 

4. 數(shù)據(jù)處理

 

● 最低檢出限，信噪比～3:1，定量限～10:1

 

● 同一物質(zhì)幾對離子的比例應(yīng)相對恒定，誤差不超過15%，峰面積比峰高準(zhǔn)確

 

● 當(dāng)濃度低，信號弱，自動積分不準(zhǔn)時可對峰面積手動積分

 

● 平滑次數(shù)與峰寬因子、保留時間等設(shè)置都會影響積分值

 

● 曲線過零點(diǎn)時，可用4個點(diǎn)；不用，則要5個點(diǎn)

 

● 線性范圍太寬，有時意義不大