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培養(yǎng)和計(jì)數(shù)

（1）取上述經(jīng)熱激活處理的芽孢懸液，用滅菌純化水進(jìn)行10倍系列稀釋，采用傾注法或涂布法進(jìn)行芽孢計(jì)數(shù)。
（2）傾注法即取芽孢數(shù)在30～300cfu/ml稀釋級(jí)的芽孢懸液1ml，置直徑90mm的無菌平皿中，注入15～20ml溫度不超過45℃融化的胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基，混勻，凝固，倒置培養(yǎng)。
（3）涂布法即取適量（通常15～20ml）溫度不超過45℃的胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基，注入直徑90mm的無菌平皿，凝固，制成平板，采用適宜的方法使培養(yǎng)基表面干燥，每一平皿表面接種芽孢數(shù)30～300cfu（接種量不少于0.1ml）。
（4）每稀釋級(jí)至少制備2個(gè)平板。
（5）按照表1推薦的培養(yǎng)溫度和培養(yǎng)時(shí)間培養(yǎng)。
（6）逐日點(diǎn)計(jì)和記錄各平板的菌落數(shù)，并計(jì)算每個(gè)最小單位生物指示劑的平均芽孢數(shù)。

表1　生物指示劑的芽孢計(jì)數(shù)的試驗(yàn)條件*

*芽孢計(jì)數(shù)亦可按照經(jīng)驗(yàn)證的試驗(yàn)條件進(jìn)行。

結(jié)果判定　　

D值測(cè)定儀器

（1）用于不同滅菌方法生物指示劑的D值測(cè)定一般采用不同的儀器或程序。
（2）濕熱滅菌用生物指示劑的D值測(cè)定常用的設(shè)備有兩種，一種是抗力儀（能夠?qū)崿F(xiàn)短時(shí)升溫和降溫的滅菌器），該設(shè)備適用于紙片式、自含式、芽孢懸液形式等的生物指示劑。
（3）另一種是油浴儀（能夠設(shè)定到100℃以上的恒溫設(shè)備），該設(shè)備適用于芽孢懸液生物指示劑。
（4）為保證測(cè)定結(jié)果的準(zhǔn)確性，抗力儀的各項(xiàng)參數(shù)應(yīng)滿足GB/T24628《醫(yī)療保健產(chǎn)品滅菌　生物與化學(xué)指示劑　測(cè)試設(shè)備》的要求。