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淺析藥物研發(fā)中薄層色譜展開劑選擇及案例分析

嘉峪檢測(cè)網(wǎng)        2020-11-17 08:53

根據(jù)本人的幾年薄層層析經(jīng)驗(yàn),參考藥典等國家藥品標(biāo)準(zhǔn)和有關(guān)文獻(xiàn),將 有代表性的對(duì)照品的薄層層實(shí)例按展開劑極性排序,并對(duì)其規(guī)律做一些分析。以下的分析和介紹是總體描述性的,目的是快速、簡(jiǎn)便地選擇展開劑,僅供大家學(xué)習(xí)交流。如果大家想深入了解展開劑選擇的各種理論,請(qǐng)參考其他專著。

 

選擇展開劑,要依據(jù)溶劑極性和他們的混溶性,溶劑對(duì)被分析物的溶解性,以及被分析物的結(jié)構(gòu)。這里只討論藥典里通常使用的以硅膠為固定相主體的正相薄層,也不考慮板的活性。

 

列出溶劑極性參數(shù)表,方便以下比較展開劑。環(huán)已烷 :-0.2、石油醚(Ⅰ類,30~60℃)、石油醚(Ⅱ類,60~90℃)、正已烷:0.0、甲苯:2.4、二甲苯:2.5、苯:2.7、二氯甲烷:3.1、異丙醇:3.9、正丁醇:3.9、四氫呋喃:4.0、氯仿:4.1、乙醇:4.3、乙酸乙酯:4.4、甲醇:5.1、丙酮:5.1、乙腈:5.8、乙酸:6.0、水:10.2

 

關(guān)于溶劑混溶性,一般根據(jù)相似相溶原則,需要注意,極性相差大的不混溶,比如正己烷與甲醇。多元展開劑,主體的兩種溶劑不能混溶,就需要通過第三種溶劑來調(diào)和。比如:石油醚、正庚烷、正已烷、戊烷、環(huán)已烷和甲醇、水之類的。

 

一般正相色譜,固定相為極性,被分析物質(zhì)的極性越大,需要極性更大的展開劑。

 

了解被分析物的極性可以通過分析其結(jié)構(gòu)獲得,很難獲得它的極性指數(shù)。物質(zhì)分子化學(xué)結(jié)構(gòu)中,通常由較極性部分和非極性部分兩部分。例如下面以苯丙烷為極性小部分,隨著極性基團(tuán)部分的增加,總體的極性就增加,展開劑極性也增加了。

 

依次為肉桂酸、阿魏酸、咖啡酸、菊苣酸、綠原酸。

 

相應(yīng)展開劑分別為:正己烷—****—冰醋酸 (5:5:0.1)、苯-冰醋酸-甲醇(30:1:3)、氯仿-甲醇-甲酸(9:1: 0.5)、石油醚-乙酸乙酯-甲酸(3:6: 1)、醋酸丁酯-甲酸-水(7:2.5:2.5)。由于薄層板、比移值不同的原因,展開劑極性比較是相對(duì)的,并非絕對(duì)的后者大于前者)。

 

現(xiàn)在最重要的問題是,不同化合物,怎么定它的極性,又用什么標(biāo)準(zhǔn)來定它對(duì)應(yīng)的展開劑呢?以下分開討論不同化合物極性情況及其對(duì)應(yīng)的展開劑。      首先是極性較小的揮發(fā)性物質(zhì)。比如:冰片:石油醚 (30~60℃)—醋酸乙酯(17:3)、厚樸酚:苯-醋酸乙酯(9:1.5)、α-香附酮:苯-醋酯乙酯-冰醋酸(92:5:5)、丹皮酚:環(huán)己烷-醋酸乙酯(3:1),這類化合物,以石油醚、正構(gòu)烷和苯為體積百分?jǐn)?shù)比較大的溶劑,通常起溶解和分離化合物的作用,而用醋酸乙酯為調(diào)節(jié)Rf(比移值)的溶劑。為了減少拖尾之類其他相似相溶原則以外的影響,適當(dāng)加入添加劑,如有機(jī)酸或者有機(jī)堿。

 

極性較小的不揮發(fā)性物質(zhì),比如:β -谷甾醇:環(huán)己烷-醋酸乙酯-甲醇(6:2.5:1)或者環(huán)己烷-****(5:2) 、熊果酸:甲苯-醋酸乙酯-冰醋酸(12:4:0.5)、齊墩果酸:氯仿-甲醇(40:1)、豬去氧膽酸:氯仿-****-冰醋酸(2:2:1)、大黃素:苯—醋酸乙酯—甲醇(15:2:0.2)或者苯—乙醇 (8:1)、丹參酮ⅡA:苯-醋酸乙酯-甲酸(40:25:4) 、穿心蓮內(nèi)酯:氯仿-無水乙醇(9:1)、靛玉紅、靛藍(lán)氯仿-乙醇(9:1)或者苯-氯仿-****(5:4:1)。這類物質(zhì)展開劑極性比極性較小的揮發(fā)性物質(zhì)洗脫力強(qiáng)一些,因?yàn)檫@類物質(zhì)極性小的母核大,而極性大的基團(tuán)通常可以形成氫鍵,比如羧酸、羥基。以上物質(zhì),母核分子量減小、母核結(jié)構(gòu)中不飽和健的增加(尤其是出現(xiàn)苯環(huán)),極性基團(tuán)的增加,都使極性增加,展開劑極性也增大。這個(gè)范圍內(nèi)的物質(zhì)很多,一般展開劑大百分?jǐn)?shù)的溶劑可以從環(huán)己烷—〉甲苯—〉二甲苯—〉苯—〉氯仿的順序,按照極性要求選擇。這里注意,異丙醇、正丁醇極性指數(shù)也比較小,在這范圍的化合物很少用,因?yàn)檎承源?、展開慢,造成斑點(diǎn)擴(kuò)散;另外,羥基的氫鍵作用力也有不利。調(diào)節(jié)Rf值的溶劑,從醋酸乙酯—〉甲醇—〉****—〉乙醇。揮發(fā)性物質(zhì)也有很多帶羰基、羥基的,但從它的揮發(fā)性就可以明白,分子間作用力不強(qiáng),另外,母核與石油醚、正構(gòu)烷和苯的結(jié)構(gòu)差異小,估計(jì)更容易脫離硅膠吸附,更快進(jìn)入溶劑中,而不需要通過提高展開劑的極性。

淺析藥物研發(fā)中薄層色譜展開劑選擇及案例分析

皂苷類

 

人參皂苷:氯仿-甲醇-水 (65:35:10)10℃以下放置的下層溶液或正丁醇-醋酸乙酯-水(4:1:5)的上層溶液或氯仿-醋酸乙酯-甲醇-水(15:40:22:10)10℃以下放置的下層溶液、芍藥苷:氯仿-醋酸乙酯-甲醇-甲酸(40:5:10:0.2)、黃芩苷:醋酸乙酯-丁酮-醋酸-水(10:7:5:3)、橙皮苷:苯—醋酸乙酯—甲酸—水(1:12:2.5:3)的上層溶液、葛根素:氯仿-甲醇-水(14:5:0.5)、蘆丁:醋酸乙酯-甲酸-水(8:1:1)。這類物質(zhì),由于存在糖的多羥基結(jié)構(gòu),苷元的結(jié)構(gòu)影響變小。展開劑中使用極性大的有機(jī)溶劑(氯仿、醋酸乙酯、甲醇、正丁醇)和水。乙酸和甲酸的使用,一方面增大展開劑極性,另外也可以抑制硅膠羥基的作用,減少拖尾。由于混溶性和硅膠耐酸能力的限制,水和酸的使用是有限度的。

 

極性大的小分子有機(jī)酸。沒食子酸:氯仿-醋酸乙酯-甲酸 (5:4:1)、阿魏酸、咖啡酸、菊苣酸、綠原酸、異綠原酸。這類物質(zhì)多數(shù)是苯乙烯母核的,這個(gè)結(jié)構(gòu)的極性本身比較大,另外有酚羥基和羧酸基團(tuán),個(gè)別有多羥基配基。皂苷的展開劑差不多,極性大。

 

含氮有機(jī)物。鹽酸小檗堿:苯-醋酸乙酯-甲醇-異丙醇-濃氨試液(12:6:3:3:0.6)(氨蒸氣飽和) 或正丁醇-冰醋酸-水(7:1:2)、****堿:氯仿-甲醇-濃氨試液(20:5:0.5)或正丁醇-冰醋酸-水(8:2:1)、甘草酸銨:醋酸乙酯-甲酸-冰醋酸-水(15:1:1:2)。由于NH2硅醇基的作用很強(qiáng),在強(qiáng)極性展開劑加有機(jī)酸、有機(jī)堿掃尾。對(duì)于極性化合物,使用正丁醇對(duì)斑點(diǎn)擴(kuò)散影響較小,因?yàn)榛衔锖凸枘z的作用強(qiáng)。

 

進(jìn)行薄層分析基本可以根據(jù)母核、基團(tuán),選擇相似的化合物對(duì)號(hào)入座。當(dāng)然,具體的條件優(yōu)化則需要根據(jù)實(shí)際情況了。

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來源:Internet

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