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細(xì)胞毒測試的測試標(biāo)準(zhǔn)和測試方法及應(yīng)用

嘉峪檢測網(wǎng)        2021-02-26 08:59

什么是細(xì)胞毒試驗(yàn)

該試驗(yàn)測試的是器械對哺乳動物細(xì)胞的毒性

 

通用性:廣泛應(yīng)用各種醫(yī)療和材料評價(jià)

 

意義:

 

1.作為是否進(jìn)行體內(nèi)實(shí)驗(yàn)的依據(jù) 

 

2.作為遺傳毒性體外細(xì)胞畸變試驗(yàn)劑量設(shè)計(jì)的依據(jù)

 

優(yōu)點(diǎn):是一套靈感度高,周期短,操作性強(qiáng)和成本低的試驗(yàn)方法

 

 應(yīng)用范圍舉例:

細(xì)胞毒測試的測試標(biāo)準(zhǔn)和測試方法及應(yīng)用

測試方法

 

1、浸提液法

 

2、間接接觸法

 

3、直接接觸法

細(xì)胞毒測試的測試標(biāo)準(zhǔn)和測試方法及應(yīng)用

測試標(biāo)準(zhǔn)

 

常見測試標(biāo)準(zhǔn):

 

1、醫(yī)療器械生物學(xué)評價(jià) 第5部分:體外細(xì)胞毒性試驗(yàn) ISO 10993-5/GB/T 16886.5

 

2、醫(yī)用輸液、輸血、注射器具檢驗(yàn)方法 第2部分:生物學(xué)試驗(yàn)方法 GB/T 14233.2

 

3、醫(yī)用有機(jī)硅材料生物學(xué)評價(jià)試驗(yàn)方法 GB/T 16175

 

測試步驟

 

1、測試樣品和對照樣品準(zhǔn)備

 

2、細(xì)胞培養(yǎng)準(zhǔn)備

 

4、加樣,培養(yǎng)24h

 

5、添加MTT,吸光度值測試

 

6、數(shù)據(jù)分析和判定

 

結(jié)果判定

 

細(xì)胞毒性判定

 

1、定性評價(jià)方法:評價(jià)一般形態(tài)、空泡形成、脫落、細(xì)胞溶解和膜完整性等方面的變化。

 

2、定量評價(jià)方法:測定細(xì)胞死亡、細(xì)胞生長抑制、細(xì)胞繁殖或細(xì)胞克隆形成;評價(jià)細(xì)胞數(shù)量、蛋白總量、酶的釋放、活體染料釋放和還原

 

細(xì)胞毒主流測試方法

 

MTT(噻唑藍(lán))比色法:鑒定細(xì)胞活力——總細(xì)胞中活細(xì)胞所占的百分比,定量方法

 

活細(xì)胞能將MTT還原成不溶于水的藍(lán)紫色產(chǎn)物Formazan, 死細(xì)胞沒有這種功能

 

DMSO溶解沉積在細(xì)胞中藍(lán)紫色結(jié)晶物,溶液顏色深淺與所含的Formazan量成正比

 

使用酶標(biāo)儀測定溶液在570nm處的吸光度:濃度越大,吸光度越大

 

結(jié)果判定

細(xì)胞毒測試的測試標(biāo)準(zhǔn)和測試方法及應(yīng)用

細(xì)胞毒測試的測試標(biāo)準(zhǔn)和測試方法及應(yīng)用

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