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國家衛(wèi)生健康委員會、國家市場監(jiān)督管理總局于2020年9月11日聯(lián)合發(fā)布38項食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)和4項修改單，并將于2021年3月11日起正式實施。其中GB 4789.44-2020 《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 食品微生物學(xué)檢驗 創(chuàng)傷弧菌檢驗》（以下簡稱“新標(biāo)準(zhǔn)”）的制訂引起了廣泛關(guān)注。新標(biāo)準(zhǔn)結(jié)合傳統(tǒng)的生化鑒定和PCR檢測對水產(chǎn)品中的創(chuàng)傷弧菌進(jìn)行檢測。這是首次制訂創(chuàng)傷弧菌的國家標(biāo)準(zhǔn)。

一、何為創(chuàng)傷弧菌

創(chuàng)傷弧菌屬于革蘭陰性嗜鹽性弧菌，顯微鏡下菌體呈棒狀、弧狀、卵圓狀等多種形態(tài)，無芽孢。創(chuàng)傷弧菌廣泛存在于海水及河口環(huán)境中，可造成養(yǎng)殖水產(chǎn)品的病害，同時也是一種致命的人類機(jī)會致病菌，是水產(chǎn)品主要的污染病原。人一旦感染創(chuàng)傷弧菌，往往表現(xiàn)為原發(fā)性敗血病和嚴(yán)重的創(chuàng)口感染，此外，還可引起腸胃炎、肺炎、腦膜炎等疾病[1]。

二、新標(biāo)準(zhǔn)內(nèi)容

新標(biāo)準(zhǔn)制訂的主要依據(jù)為目前國際上常用的創(chuàng)傷弧菌檢測方法，通過對我國水產(chǎn)品中除創(chuàng)傷弧菌以外的常見背景雜菌進(jìn)行分類和生長分析，選擇出最適宜創(chuàng)傷弧菌的培養(yǎng)鑒定步驟，建立檢測水產(chǎn)品中創(chuàng)傷弧菌的微生物學(xué)方法。新標(biāo)準(zhǔn)適用于魚、蝦、蟹、貝類等水產(chǎn)品中創(chuàng)傷弧菌的檢驗。

新標(biāo)準(zhǔn)的檢驗程序如下：

01、通過對3%氯化鈉堿性蛋白胨水和PNCC肉湯增菌效果的實驗比對，發(fā)現(xiàn)在同樣條件下（36℃±1℃，18h±1h），PNCC肉湯增菌效果最好。因此，新標(biāo)準(zhǔn)采用PNCC肉湯作為樣品處理的增菌液。

02、分離平板依舊選取了mCPC和CC 2種選擇性平板，并將溫度調(diào)整為36℃±1℃ 。典型的創(chuàng)傷弧菌在CC和mCPC平板上的形態(tài)為：圓形、扁平，光照下呈透明或中心不透明但邊緣透明的黃色至橘黃色菌落，菌落直徑為1mm~2mm，菌落周圍可出現(xiàn)（或不出現(xiàn)）黃色暈圈。

03、分別將創(chuàng)傷弧菌標(biāo)準(zhǔn)菌株和常見干擾菌定量接種于3% 氯化鈉胰蛋白胨大豆瓊脂平板和其他選擇性平板進(jìn)行分離培養(yǎng)基的篩選，最終確定3% 氯化鈉胰蛋白胨大豆瓊脂平板作為創(chuàng)傷弧菌的分離純化培養(yǎng)基。其菌落形態(tài)為圓形、乳白色、濕潤、隆起、直徑1mm~2mm。

04、檢驗過程中同時進(jìn)行PCR檢測快速初篩。初篩為陰性者，可直接進(jìn)行結(jié)果報告；呈陽性者再劃線接種mCPC平板和CC平板，結(jié)合生化特性得出最終的結(jié)果報告。將PCR法與傳統(tǒng)增菌培養(yǎng)法相結(jié)合的創(chuàng)傷弧菌檢測方法，可以有針對性的檢測水產(chǎn)品中創(chuàng)傷弧菌污染狀況，有效提高了創(chuàng)傷弧菌的檢測率。

05、結(jié)合革蘭氏染色、氧化酶試驗、三糖鐵試驗和嗜鹽性試驗對可疑菌落進(jìn)行初步鑒定，然后可選擇生化鑒定試劑盒做最終確證實驗。

06、新標(biāo)準(zhǔn)中，可以選用PCR技術(shù)對創(chuàng)傷弧菌進(jìn)行分型，具體分為vcgC /E、16S rRNA A/B、血清E型和生物Ⅱ型。

07、根據(jù)菌落特征、生化特性或PCR鑒定結(jié)果，報告25g樣品中檢出或未檢出創(chuàng)傷弧菌。

 近年來，隨著社會的發(fā)展，進(jìn)食海鮮的人群越來越多，因食用海產(chǎn)品而引起食物中毒、急性胃腸炎或腹瀉等疾病的事件屢有報道。新標(biāo)準(zhǔn)的出臺為創(chuàng)傷弧菌的檢測提供強(qiáng)有力的依據(jù)，進(jìn)一步加強(qiáng)了政府對食品的監(jiān)管力度。

參考資料

［1］王青柏，李良秋，徐 鵬，曾綺文，王東東，王嘉銘，譚雨婷．創(chuàng)傷弧菌生物學(xué)特性和檢測技術(shù)研究進(jìn)展［J］．安徽農(nóng)業(yè)科學(xué)，J．Anhui Agric．Sci． 2019，47( 5) : 33－36.