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皮膚致敏試驗(yàn)常用的測(cè)試方法為：豚鼠最大劑量法（GPMT）、封閉貼敷法（Buehler試驗(yàn)）、局部淋巴結(jié)實(shí)驗(yàn)法（LLNA），本篇文章為大家介紹封閉貼敷法（Buehler試驗(yàn)）。

首先為大家介紹一下皮膚致敏試驗(yàn)的作用機(jī)理。皮膚致敏即變應(yīng)性接觸性皮炎，是免疫介導(dǎo)的對(duì)某種反復(fù)接觸性物質(zhì)的皮膚反應(yīng)，具有致敏作用的化學(xué)物經(jīng)一定途徑作用于機(jī)體，與組織蛋白結(jié)合形成完全抗原，使體內(nèi)免疫活性細(xì)胞對(duì)其產(chǎn)生特異性免疫反應(yīng)，產(chǎn)生淋巴細(xì)胞或體液抗體；經(jīng)過(guò)1~2周的致敏期，使體內(nèi)免疫得到充分發(fā)展，形成一定數(shù)量的淋巴細(xì)胞或特異性抗體，當(dāng)機(jī)體再次接觸此化學(xué)物時(shí)，則出現(xiàn)過(guò)敏反應(yīng)。致敏反應(yīng)表現(xiàn)為瘙癢、紅斑、水腫、丘疹、大（?。┧莸取Ｋ葬t(yī)療器械的致過(guò)敏性需要受到大家的關(guān)注，本文章所介紹的封閉貼敷法致敏試驗(yàn)適用于直接與皮膚表面接觸的樣品，例如：敷料貼、繃帶、電極、耦合劑等。

試驗(yàn)?zāi)康?/span>

通過(guò)豚鼠皮膚致敏—封閉貼敷試驗(yàn)評(píng)估樣品造成豚鼠皮膚致敏反應(yīng)的潛在性。

樣品制備方法

表1  樣品制備

測(cè)試方法

將檢測(cè)樣品貼敷于每個(gè)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物（總計(jì)10只）的左上背部，再用封閉性包扎帶固定（6±0.5）小時(shí)，隨后除去固定物和敷貼片。1周連續(xù)3天重復(fù)該步驟，同法操作3周。對(duì)照組動(dòng)物（總計(jì)5只）使用無(wú)菌醫(yī)用紗布?jí)K作為檢測(cè)樣品同法操作。在最后一次誘導(dǎo)敷貼后14天用檢測(cè)樣品對(duì)全部實(shí)驗(yàn)動(dòng)物和對(duì)照動(dòng)物進(jìn)行激發(fā)，將檢測(cè)樣品貼敷于每只實(shí)驗(yàn)動(dòng)物去毛的未測(cè)試部位，如右下背部，（6±0.5）小時(shí)除去固定物和敷貼片。激發(fā)后（24±2）小時(shí)后被毛，被毛后至少2小時(shí)記錄所有敷貼部位的得分，激發(fā)后（48±2）小時(shí)再進(jìn)行評(píng)分（見(jiàn)表2）。

表2  Magnusson和Kligman分級(jí)

結(jié)果評(píng)價(jià)

按 Magnusson和Kligman分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)，對(duì)照組動(dòng)物等級(jí)小于1，而測(cè)試組中等級(jí)大于或等于1時(shí)一般提示致敏；如對(duì)照組動(dòng)物等級(jí)大于或等于1時(shí)，試驗(yàn)組動(dòng)物反應(yīng)超過(guò)對(duì)照組中最嚴(yán)重的反應(yīng)則認(rèn)為致敏。

陽(yáng)性測(cè)試

為了確保試驗(yàn)的再現(xiàn)性和敏感性，應(yīng)進(jìn)行陽(yáng)性對(duì)照物試驗(yàn)，以驗(yàn)證試驗(yàn)系統(tǒng)并證實(shí)陽(yáng)性反應(yīng)。那么陽(yáng)性試驗(yàn)該怎么進(jìn)行呢？下面為大家介紹陽(yáng)性測(cè)試需注意關(guān)鍵點(diǎn)：

 1）陽(yáng)性對(duì)照需每6個(gè)月做一次；

 2）陽(yáng)性對(duì)照品為質(zhì)量體積比為0.1%二硝基氯苯DNCB，對(duì)照溶劑為無(wú)水乙醇；

 3）動(dòng)物數(shù)量為5只實(shí)驗(yàn)組和5只對(duì)照組；

 4）其他步驟與測(cè)試相同。