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柱色譜是天然藥化實(shí)驗(yàn)中必不可少的分離手段，小編將結(jié)合教研室?guī)熜值亩嗄杲?jīng)驗(yàn)，對(duì)柱色譜及相關(guān)知識(shí)進(jìn)行簡(jiǎn)單的介紹和經(jīng)驗(yàn)總結(jié)，本期內(nèi)容是硅膠柱色譜和凝膠色譜柱。

硅膠色譜柱

相信做過(guò)天然藥化實(shí)驗(yàn)的同學(xué)們肯定對(duì)硅膠柱都有一些印象，硅膠柱色譜的原理是在一定條件下，硅膠與被分離物質(zhì)之間產(chǎn)生作用，這種作用主要是物理和化學(xué)作用兩種，物理作用來(lái)自于硅膠表面與溶質(zhì)分子之間的范德華力；化學(xué)作用主要是硅膠表面的硅羥基與待分離物質(zhì)之間的氫鍵作用。所有層析法所依據(jù)的工作原理都是憑借于待分離的幾種物質(zhì)在將它們進(jìn)行分配的兩相之間的溶解度或者吸附能力上的差別。

大家都知道硅膠柱使用的幾個(gè)步驟：拌樣、裝柱、上樣、梯度洗脫、點(diǎn)板、合并，但同樣的步驟，得到的分離效果卻不一定一樣，以下列出了幾點(diǎn)需要注意的地方。

1、明確目的
提取得到的浸膏成分十分復(fù)雜，因此第一次過(guò)硅膠柱的主要目的就是粗分和劃段，并不是直接分得單體化合物。

2、硅膠柱的選擇
明確了過(guò)硅膠柱的目的，在硅膠柱的選擇上就很好解釋了。細(xì)長(zhǎng)的柱子雖然能使樣品有足夠的時(shí)間和空間展開，但也導(dǎo)致擴(kuò)散和交叉，因此師兄建議使用盡量短和粗一些的柱子。

3、裝柱硅膠用量
使用200-300目的硅膠，裝柱高度大約為樣品高度的5-8倍。

4、裝柱的技巧
裝柱分為濕法和干法兩種，在這里師兄的建議是使用濕法裝柱，特別是對(duì)于初學(xué)者來(lái)說(shuō)，濕法裝柱的好處就是可以使硅膠緊實(shí)、平整、均勻。當(dāng)然，為了不產(chǎn)生氣泡，在裝柱時(shí)一定要注意攪拌，用溶劑充分浸泡。

5、樣品的處理
拌樣時(shí)使用的硅膠可以比裝柱硅膠粗一些，100-200目甚至80-100目都可以，用量大約1:1，取決于樣品的狀態(tài)。

6、上樣的技巧
為了不對(duì)柱床造成沖擊，上樣時(shí)選擇干法上樣。上樣后在樣品層上再加上脫脂棉和保護(hù)硅膠，以減小加液時(shí)溶劑對(duì)樣品層的沖擊所帶來(lái)的化合物交叉。

7、溶劑系統(tǒng)的選擇
溶劑系統(tǒng)一般為兩相，選擇上很靈活，其實(shí)只要兩相互溶，分離效果好，就是合適的系統(tǒng)。在這里師兄推薦給大家兩種系統(tǒng)：石油醚：乙酸乙酯；二氯甲烷：甲醇。大家可以根據(jù)樣品的極性來(lái)選擇合適的溶劑。

8、洗脫條件
由于過(guò)柱的目的是粗分和劃段，因此在洗脫時(shí)按極性從小到大每個(gè)梯度沖洗3～5個(gè)柱體積即可。

9、點(diǎn)板
點(diǎn)板盡量選擇在過(guò)柱子的時(shí)候，一邊過(guò)柱子一邊點(diǎn)板，這樣可以根據(jù)實(shí)際情況判斷和選擇更換的梯度和合適的更換時(shí)間。

10、合并
合并并不是只要稍有不一樣就要分成兩個(gè)部分，這樣不僅會(huì)造成含量少的化合物被分散，同時(shí)也為后期實(shí)驗(yàn)帶來(lái)很大的工作量，要把握好合并的度。

以上幾點(diǎn)就是在過(guò)硅膠柱時(shí)需要格外注意的幾點(diǎn)，但是在這里需要提醒大家的是，分離的效果主要還是取決于待分離的浸膏是否適合此種分離方法，所以在進(jìn)行實(shí)驗(yàn)之前，一定要仔細(xì)閱讀相關(guān)文獻(xiàn)，多多總結(jié)前人的經(jīng)驗(yàn)，找到一種適合的方法和技巧再開始做，這樣才能達(dá)到事半功倍的效果。

凝膠色譜柱

以凝膠為固定相的色譜，稱為凝膠色譜。葡聚糖凝膠的分離原理是葡聚糖凝膠在吸水后形成凝膠粒子，在其交聯(lián)鍵的骨架中有許多一定大小的網(wǎng)眼。網(wǎng)眼小，只有小分子的物質(zhì)網(wǎng)眼小，只有小分子物質(zhì)才能進(jìn)入網(wǎng)眼;而超過(guò)一定限度的大分子物質(zhì)，就被排阻在凝膠粒子的外部而不能進(jìn)入網(wǎng)眼。這就使得能進(jìn)入凝膠內(nèi)部與不能進(jìn)入凝膠內(nèi)部的分子，如同按照分子大小過(guò)篩一樣，所以稱為分子篩。大分子化合物阻力小，行動(dòng)快，先流出。小分子化合物阻力大，行動(dòng)慢，后流出。

了解了凝膠的原理我們就可以看出，其與硅膠的分離原理完全不同，因此才有可能把前面硅膠按照極性分離的劃好段的樣品分離開。而凝膠柱在使用上與硅膠柱也不太一樣。

1、明確主要目的
經(jīng)過(guò)第一根凝膠下來(lái)的樣品，雖然劃分成了幾段或者十幾段，但對(duì)于一個(gè)組分依然有很多的化合物，因此過(guò)凝膠柱的主要目的依然是粗分，由于凝膠柱使用上的特殊性，有些時(shí)候也能達(dá)到精分的效果，甚至可以直接拿到結(jié)晶。

2、凝膠使用前的處理及裝柱要點(diǎn)
凝膠是可以重復(fù)使用的，和硅膠相比使用更方便，裝一次就可以一直使用。需要注意的是，凝膠在濕法裝柱之前需要用溶劑充分溶脹，再分次裝進(jìn)玻璃柱中，等其自然沉降完全、緊實(shí)后才可使用。

3、凝膠柱的選擇
一般選擇細(xì)長(zhǎng)的玻璃柱，如果樣品量大、復(fù)雜，只能粗分，也可以選擇短粗型的柱子。

4、溶劑系統(tǒng)的選擇
最常用的兩種溶劑系統(tǒng)是純甲醇系統(tǒng)和二氯甲烷：甲醇系統(tǒng)。

5、樣品的處理
用最少量的溶劑溶解樣品（一定要完全溶解）以減少樣品層厚度，上樣前過(guò)濾（0.45 µm）。

6、上樣的要點(diǎn)
基本原則是減少樣品層厚度，保證樣品層的平整。

7、洗脫條件
一般選擇等度洗脫，流速盡量慢一些，根據(jù)樣品情況調(diào)整。
以上就是本期柱色譜相關(guān)知識(shí)和經(jīng)驗(yàn)總結(jié)的全部?jī)?nèi)容啦，在這里要謝謝師兄提供的寶貴經(jīng)驗(yàn)，同時(shí)也要提醒大家，經(jīng)驗(yàn)固然重要，但也要結(jié)合實(shí)際來(lái)使用。