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嘉峪檢測(cè)網(wǎng) 2021-07-21 13:05
1、背景
隨著雜質(zhì)研究的要求越來(lái)越高，系統(tǒng)適用性溶液中雜質(zhì)添加數(shù)量越來(lái)越多，無(wú)形中增加了企業(yè)的成本和制備的難度，故應(yīng)制訂相應(yīng)的策略，在達(dá)到檢測(cè)系統(tǒng)適用性要求的同時(shí)，降低企業(yè)的檢測(cè)成本。
2、系統(tǒng)適用性要求
2.1分離度
2.1.1分離度要求是為了排除其它組分干擾待測(cè)物質(zhì)的檢測(cè)準(zhǔn)確性，一般情況下，待測(cè)物質(zhì)要與其它成份分離度達(dá)到1.5以上，才能判定為無(wú)干擾，要求嚴(yán)格的需要2.0以上才能符合要求。限于分離度計(jì)算方式的影響，待測(cè)物質(zhì)和相鄰其它組分峰高或者峰寬差異百倍甚至更多，造成分離度計(jì)算結(jié)果遠(yuǎn)遠(yuǎn)小于實(shí)際的分離效果，個(gè)別工作站有按峰谷比的方式計(jì)算，該種方式對(duì)峰寬差異大的組分有較好的結(jié)果，但不是所有的工作站均有該計(jì)算方式，故分離度要求可修訂為基線分離更合理。
示例1：
在中國(guó)藥典2020年版二部大多數(shù)頭孢類中就有采用峰谷比作為系統(tǒng)分離度要求的情況，如頭孢美唑鈉中聚合物檢測(cè)，截圖如下
2.1.2應(yīng)用情況
（1）含量測(cè)定目標(biāo)和相鄰組分需要制訂分離度要求；
（2）有關(guān)物質(zhì)測(cè)定主成分和相鄰雜質(zhì)需要制訂分離度要求；
（3）有關(guān)物質(zhì)中難分離的兩個(gè)雜質(zhì)且合并會(huì)超過(guò)限度的需要制訂分離度要求；
2.2重復(fù)性
2.2.1重復(fù)性要求是考察儀器進(jìn)樣精密度，主要是排除儀器進(jìn)樣誤差，對(duì)于含量測(cè)定，我們要求相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差不得過(guò)2.0%，當(dāng)然這個(gè)數(shù)值也不是一成不變的，可根據(jù)中國(guó)藥典2020年版四部9101指導(dǎo)原則（如下圖）進(jìn)行相應(yīng)的調(diào)整，這里要說(shuō)明下樣品中待測(cè)定成分的含量問題，很多理解不一致，表中所說(shuō)的應(yīng)為絕對(duì)含量，而不是標(biāo)示含量，應(yīng)予以區(qū)分，以免訂的標(biāo)準(zhǔn)過(guò)嚴(yán)，該指導(dǎo)原則主要是對(duì)常用的儀器如液相色譜儀制訂，特殊的儀器可以根據(jù)實(shí)際情況進(jìn)行適當(dāng)?shù)恼{(diào)整，如殘留溶劑測(cè)定法中相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差規(guī)定外標(biāo)法不得過(guò)10%，內(nèi)標(biāo)法不得過(guò)5%。
2.2.2應(yīng)用情況
（1）精密度差的儀器，如氣相色譜儀；
（2）進(jìn)樣量大或者進(jìn)樣量較小的方法；
（3）外標(biāo)法建議考察；
2.3理論塔板數(shù)：分離效率
2.3.1理論塔板數(shù)是直接反應(yīng)色譜柱柱效，是分離效率的一種參數(shù)，理論塔板數(shù)的高低主要是看保留時(shí)間和峰寬的比值關(guān)系，峰越寬，理論塔板數(shù)越低，造成峰高和分離度越差。
2.3.2應(yīng)用情況
（1）在一定程度上可以替代分離度要求，如干擾組分不易獲得，在理論塔板數(shù)比較高的情況下不影響分離度，可以考慮用理論塔板數(shù)作為系統(tǒng)適用性要求而不是分離度指標(biāo)；
（2）如采用峰高計(jì)算結(jié)果，則應(yīng)要規(guī)定理論塔板數(shù)；
2.4拖尾因子
2.4.1拖尾因子主要是反映峰對(duì)稱情況，有時(shí)也叫對(duì)稱因子，峰形拖尾或者前沿，會(huì)影響到積分邊際線的位置，使得峰高或者峰面積改變，對(duì)定量檢測(cè)的準(zhǔn)確性產(chǎn)生影響，即使是定性，也會(huì)影響到靈敏度的判斷，故一般情況下會(huì)規(guī)定以峰高作為定量參數(shù)的規(guī)定拖尾因子應(yīng)在0.95~1.05范圍內(nèi)，是以峰面積作為定量參數(shù)，則規(guī)定0.8~1.2范圍內(nèi)，當(dāng)然也可以根據(jù)實(shí)際情況適當(dāng)放寬，如限度范圍比較寬的，積分邊際線稍微調(diào)整影響不大的情況下可放寬標(biāo)準(zhǔn)。
2.4.2應(yīng)用情況
（1）峰高作為定量參數(shù)時(shí)應(yīng)制訂要求；
（2）峰面積作為定量參數(shù)，且積分邊際線影響到定量結(jié)果的時(shí)候應(yīng)制訂要求；
2.5靈敏度
2.5.1靈敏度是考察系統(tǒng)對(duì)含量較小的成分的檢測(cè)能力，一般情況下定量檢測(cè)規(guī)定靈敏度溶液信噪比不小于10，定性檢測(cè)信噪比不小于3。
2.5.2應(yīng)用情況
（1）靈敏度差的檢測(cè)系統(tǒng)應(yīng)制訂靈敏度要求；
（2）制訂忽略限的檢測(cè)方法也應(yīng)考察靈敏度；
2.6線性
2.6.1在定量過(guò)程中，待測(cè)物和參照物濃度不可能是同一個(gè)值，或多或少會(huì)有差異，當(dāng)差異大時(shí)，誤差可能會(huì)很大。線性是定量的基礎(chǔ)，方法驗(yàn)證時(shí)，線性范圍應(yīng)盡可能考慮待測(cè)物質(zhì)的檢出濃度，使得檢出濃度在線性范圍內(nèi)，否則定量結(jié)果很難保證準(zhǔn)確性。當(dāng)有效成分測(cè)定時(shí)，一般規(guī)定相關(guān)系數(shù)應(yīng)大于0.999，在安全性和有效性能有效保障的情況下可放寬至0.99。
2.6.2應(yīng)用情況
（1）標(biāo)準(zhǔn)曲線法：當(dāng)待測(cè)物濃度不明確時(shí)，應(yīng)采用考察線性，特別是線性受環(huán)境等條件影響較大時(shí)；
（2）當(dāng)基質(zhì)干擾較大時(shí)，也就是方法驗(yàn)證時(shí)線性截距占比較大，這種情況下不適合采用一點(diǎn)法進(jìn)行定量，應(yīng)采用標(biāo)準(zhǔn)加入法進(jìn)行測(cè)定。
2.7重現(xiàn)性
2.7.1這里說(shuō)的重現(xiàn)性不是方法驗(yàn)證里的重現(xiàn)性，是參照物平行配制的情況，如對(duì)照品溶液配制第二份，測(cè)得的量相對(duì)于第一份的回收率，確認(rèn)配制的結(jié)果準(zhǔn)確性，一般情況下規(guī)定回收率范圍為98%~102%，也可以根據(jù)中國(guó)藥典2020年版四部9101指導(dǎo)原則（如下圖）進(jìn)行相應(yīng)的調(diào)整。
2.7.2應(yīng)用情況
定量參照物配制耐用性差的應(yīng)制訂該要求，如稱量或移取量比較少，誤差比較大。
3、系統(tǒng)適用性制訂
3.1方法開發(fā)階段
3.1.1有關(guān)物質(zhì)
對(duì)于有關(guān)物質(zhì)來(lái)講，不管是定量檢測(cè)還是定性檢測(cè)，分離度指標(biāo)至關(guān)重要，所以有關(guān)物質(zhì)系統(tǒng)適用性的分離度指標(biāo)無(wú)可避免；理論塔板數(shù)和拖尾因子也只是側(cè)面提高分離度的，所以在考慮分離度的情況下可不用考察該指標(biāo)；而有關(guān)物質(zhì)一般情況下含量比較低，準(zhǔn)確度可允許的偏差比有效成分要求較低，故重復(fù)性和重現(xiàn)性就不是很關(guān)鍵；雜質(zhì)定量檢測(cè)時(shí)，線性在方法驗(yàn)證階段證明即可，無(wú)需訂入系統(tǒng)適用性要求，定性檢測(cè)則不用考察線性；但是由于有關(guān)物質(zhì)含量比較低，檢測(cè)能力就顯得很重要，故靈敏度是在考慮的范圍內(nèi)。
（1）在有關(guān)物質(zhì)方法開發(fā)階段，專屬性至關(guān)重要，雜質(zhì)譜分析應(yīng)全面，盡可能的得到工藝雜質(zhì)和降解雜質(zhì)，對(duì)已知雜質(zhì)進(jìn)行定性，配制混合溶液進(jìn)行方法開發(fā)，要求雜質(zhì)和主成分應(yīng)能有效分離，雜質(zhì)之間也盡可能的分離，所有雜質(zhì)應(yīng)能檢出，不能檢出的應(yīng)有相應(yīng)的補(bǔ)充方法。
（2）對(duì)主成分進(jìn)行強(qiáng)制降解實(shí)驗(yàn)，主成分也應(yīng)能和降解雜質(zhì)有效分離，降解雜質(zhì)和已知雜質(zhì)之間也應(yīng)盡可能分離。
（3）對(duì)主成分和已知雜質(zhì)的檢出能力進(jìn)行確認(rèn)，確保方法初步可行。
（4）應(yīng)對(duì)方法的耐用性進(jìn)行初步的考察，確保方法在微小變動(dòng)的情況下能滿足要求。
示例2：
某品種根據(jù)雜質(zhì)譜分析，將生產(chǎn)工藝過(guò)程中可能產(chǎn)生的雜質(zhì)按限度濃度的十倍配制已知成分混合溶液，開發(fā)和優(yōu)化方法并考察耐用性，結(jié)果如下：
3.1.2含量
對(duì)于含量測(cè)定來(lái)講，雜質(zhì)相互之間的分離情況可以不用考慮，但雜質(zhì)和有效成分的分離度至關(guān)重要，如果分離度達(dá)不到要求，可能會(huì)影響到有效成分測(cè)定的準(zhǔn)確度，另外一種情況也需要考慮，方法能把所有雜質(zhì)洗脫出來(lái)，以免影響下一針的檢驗(yàn)；理論塔板數(shù)和拖尾因子對(duì)含量測(cè)定也有一定的影響，雖然現(xiàn)在基本采用的是峰面積計(jì)算含量，但這兩個(gè)參數(shù)影響到了積分邊際線的位置，使得峰面積有所改變；靈敏度對(duì)含量測(cè)定影響不大，所以藥典不對(duì)靈敏度進(jìn)行要求，但有些微量測(cè)定還是需要制訂靈敏度，如清潔驗(yàn)證、中藥有效成分等；在采用一點(diǎn)法測(cè)定含量的情況下，線性不作為考察的重點(diǎn)，但含量不明確或者波動(dòng)比較大的情況下需要考察，甚至采用標(biāo)準(zhǔn)曲線法測(cè)定含量；含量測(cè)定直接影響有效性，準(zhǔn)確度要求較高，故重復(fù)性和重現(xiàn)性均要考察。
（1）應(yīng)確保所有的雜質(zhì)均能和有效成分分離開，制訂分離度要求，強(qiáng)制降解純度閾值符合要求，所有雜質(zhì)均能有效系統(tǒng)；
（2）方法應(yīng)有相應(yīng)重復(fù)性，甚至重現(xiàn)性，一般情況下，參照物質(zhì)采用5+2或者6+1的方式進(jìn)行考察；
（3）采用峰面積計(jì)算結(jié)果的，理論塔板數(shù)和拖尾因子可以適當(dāng)放寬，但也不能太低，具體可以經(jīng)過(guò)研究后結(jié)合產(chǎn)品特性進(jìn)行規(guī)定；
（4）應(yīng)對(duì)方法的耐用性進(jìn)行初步的驗(yàn)證，確保測(cè)定條件微小變動(dòng)系統(tǒng)也能耐用；
3.2方法驗(yàn)證階段
3.2.1有關(guān)物質(zhì)
有關(guān)物質(zhì)方法驗(yàn)證，應(yīng)對(duì)根據(jù)雜質(zhì)譜分析對(duì)很大概率產(chǎn)生的雜質(zhì)進(jìn)行研究，而不是所有的已知雜質(zhì)都要進(jìn)行方法驗(yàn)證，否則會(huì)增加方法驗(yàn)證的難度，增加不必要的時(shí)間和經(jīng)濟(jì)成本；
（1）對(duì)于接近限度的雜質(zhì)，分離度應(yīng)達(dá)到要求，否則需要重新優(yōu)化方法再進(jìn)行驗(yàn)證。
（2）主成分和相鄰雜質(zhì)的分離度要求不可避免，應(yīng)要驗(yàn)證；
（3）對(duì)檢出的工藝雜質(zhì)和降解雜質(zhì)應(yīng)要驗(yàn)證；
（4）對(duì)多批次未檢出，且檢出可能性較小的做簡(jiǎn)單驗(yàn)證。
3.2.2含量
經(jīng)過(guò)了一定的數(shù)據(jù)積累，對(duì)含量測(cè)定的方法有了深入的了解，一些不影響的系統(tǒng)適用性要求可以考慮不再進(jìn)行考察，有些需要特別關(guān)注。
（1）如果相鄰雜質(zhì)和有效成分分離度很有保證，不管耐用性條件如何變動(dòng)，分離度均能達(dá)到要求，可以不考慮制訂分離度要求；
（2）相鄰雜質(zhì)和有效成分分離度不一定能保證，需要制訂，如果相鄰雜質(zhì)不易的或者經(jīng)濟(jì)考慮，可以順延采用就近的雜質(zhì)進(jìn)行規(guī)定，規(guī)定的要求要能保證相鄰雜質(zhì)和有效成分的分離；
（3）方法驗(yàn)證階段，需要對(duì)其它雜質(zhì)的檢出和對(duì)有效測(cè)定結(jié)果的影響情況予以考慮，如果對(duì)結(jié)果影響較小，則不用考慮該雜質(zhì)的洗脫，縮短分析時(shí)間。
示例3：
某品種含量方法開發(fā)時(shí)，雜質(zhì)B和主成分比較近，分離度為1.8（圖a），但雜質(zhì)B不容易得到，如果將雜質(zhì)B和主成分的分離度作為系統(tǒng)適用性要求，則后期研究或檢驗(yàn)的時(shí)候勢(shì)必造成一定的困擾，但順延采用就近的較易得的雜質(zhì)作為系統(tǒng)分離度要求（如圖a中的雜質(zhì)A），就可以避免后期的麻煩，當(dāng)然分離度也得相應(yīng)的做調(diào)整，在該系統(tǒng)下雜質(zhì)A和主成分的分離度為2.8（圖b），在此情況下雜質(zhì)B和主成分的分離度則必大于1.5，則制訂雜質(zhì)A和主成分的分離度不小于2.8，再對(duì)方法的進(jìn)行稍微的調(diào)整，使得雜質(zhì)A和主成分的分離度保證大于2.8，滿足耐用性要求。
3.3質(zhì)量標(biāo)
準(zhǔn)制訂階段
3.3.1有關(guān)物質(zhì)
經(jīng)過(guò)方法驗(yàn)證和多批次的生產(chǎn)檢驗(yàn)，對(duì)本品的工藝和降解雜質(zhì)檢測(cè)情況已經(jīng)有了基本的數(shù)據(jù)積累，這時(shí)可以根據(jù)實(shí)驗(yàn)?zāi)康膶?duì)系統(tǒng)適用性的要求就可以相應(yīng)的進(jìn)行簡(jiǎn)化；
（1）和主峰相近的雜質(zhì)應(yīng)添加至系統(tǒng)適用性溶液中考察分離度；
（2）接近限度的雜質(zhì)應(yīng)添加至系統(tǒng)適用性溶液中考察和相鄰成分的分離度；
（3）能檢測(cè)出的雜質(zhì)應(yīng)添加至系統(tǒng)適用性溶液中進(jìn)行定性；
（4）大概率會(huì)降解產(chǎn)生的雜質(zhì)應(yīng)添加至系統(tǒng)適用性溶液中進(jìn)行定性；
（5）質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中應(yīng)附典型的系統(tǒng)適用性圖譜（可以考慮附方法開發(fā)時(shí)全雜質(zhì)的典型圖譜）；
（6）對(duì)系統(tǒng)適用性溶液穩(wěn)定性進(jìn)行考察，考察指標(biāo)可以規(guī)定為各成分含量應(yīng)為初始條件的70%~130%。
3.3.2含量測(cè)定
經(jīng)過(guò)了方法驗(yàn)證和多批次的生產(chǎn)檢驗(yàn)，有了大量數(shù)據(jù)的積累，系統(tǒng)適用性的要求可以根據(jù)經(jīng)驗(yàn)進(jìn)行進(jìn)一步的優(yōu)化。
（1）如果相鄰雜質(zhì)和有效成分分離度難保證，但基本未檢出，對(duì)結(jié)果準(zhǔn)確度影響微乎其微，也不會(huì)降解產(chǎn)生，則可不用考慮該雜質(zhì)和有效成分的分離度；
（2）定量限濃度遠(yuǎn)遠(yuǎn)小于檢測(cè)濃度，可不考慮靈敏度要求；
（3）理論塔板數(shù)和拖尾因子不會(huì)影響積分邊際線或者影響很小，可以忽略不計(jì)，則可不考慮；
（4）采用一點(diǎn)法測(cè)定含量的可不用考察線性；
（5）重復(fù)性和重現(xiàn)性應(yīng)要考察。
4、總結(jié)
4.1影響測(cè)定準(zhǔn)確性的指標(biāo)必須要考察，對(duì)準(zhǔn)確度影響很小的可不用考察；
4.2耐用性差的指標(biāo)必須要考察，耐用性好的可不用考察；
4.3法規(guī)規(guī)定的指標(biāo)必須考察，法規(guī)沒有規(guī)定的可不用考察。
5、參考文獻(xiàn)
5.1中國(guó)藥典2020年版；
5.2GMP指南2010年版；
5.3中國(guó)藥品檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)范2019年版；
5.4ICH指導(dǎo)原則；
來(lái)源：藥事縱橫
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