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嘉峪檢測網(wǎng) 2021-08-12 09:50
溶出度是藥品研發(fā)單位優(yōu)化片劑處方工藝和監(jiān)管部門監(jiān)測片劑質(zhì)量療效的關(guān)鍵評價指標(biāo)，是藥品生物利用度和生物等效性的首要預(yù)測手段。為了更好地使用溶出度，今天小析姐就和大家聊一聊溶出度的檢測知識。
溶出度（Dissolution rate）也稱溶出速率，是指在規(guī)定的溶劑和條件下，藥物從片劑、膠囊劑、顆粒劑等固體制劑中溶出的速度和程度。測定固體制劑溶出度的過程稱為溶出度試驗(yàn)（Dissolution test），它是一種模擬口服固體制劑在胃腸道中的崩解和溶出的體外試驗(yàn)方法。藥物溶出度檢查是評價制劑品質(zhì)和工藝水平的一種有效手段，可以在一定程度上反映主藥的晶型、粒度、處方組成、輔料品種和性質(zhì)、生產(chǎn)工藝等的差異；在產(chǎn)品發(fā)生某些變更后（如處方、生產(chǎn)工藝、生產(chǎn)場所變更和生產(chǎn)工藝放大），確認(rèn)藥品質(zhì)量和療效的一致性；也是評價制劑活性成分生物利用度和制劑均勻度的一種有效標(biāo)準(zhǔn)，能有效區(qū)分同一種藥物生物利用度的差異，因此是藥品質(zhì)量控制必檢項(xiàng)目之一。
一般認(rèn)為，難溶性 （一般指在水中微溶或不溶） 藥物，因制劑處方與生產(chǎn)工藝造成臨床療效不穩(wěn)定的藥物以及治療量與中毒量相接近的藥物（包括易溶性藥物），其口服固體制劑質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中必須設(shè)定溶出度檢查項(xiàng)。另外固體制劑的處方篩選及生產(chǎn)工藝流程制訂過程中，也需對所開發(fā)劑型的溶出度做全面考察。一個可行的溶出度試驗(yàn)法應(yīng)是在不同時間、地點(diǎn)對同一制劑的溶出度測定或不同的操作者之間的測定都必須達(dá)到試驗(yàn)結(jié)果具有良好的重現(xiàn)性。為了達(dá)到以上目的，必須對溶出度測定試驗(yàn)進(jìn)行 全面充分的研究。
生物藥劑學(xué)（BCS）分類（美國FDA ）：
第1類：高溶解度一高滲透性
第2類：低溶解度一高滲透性
第3類：高溶解度一低滲透性
第4類：低溶解度一低滲透性
高溶解度：單個制劑能在250mL，pH值1.0～8.0介質(zhì)中溶解——相當(dāng)于中國藥典的“微溶”。
高滲透性：絕對生物利用度≥90%。
上述分類可以作為設(shè)定體外溶出度質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的依據(jù)，也可用于預(yù)測能否建立良好的體內(nèi)-體外相關(guān)性的依據(jù)。BSC提示，對于高溶解度、高滲透性（1類）藥物及某些情況下的高溶解度、低滲透性（3類）藥物，其溶出度在0.1NHCL中15min時為85%即可保證藥物的生物利用度不受溶出的限制，即制劑的行為與溶液相似。
溶出度研究試驗(yàn)主要包括以下內(nèi)容：
（1）溶出介質(zhì)的選擇；
（2）溶出介質(zhì)體積的選擇；
（3）溶出方法（轉(zhuǎn)籃法與槳法）的選擇；
（4）轉(zhuǎn)速的選擇；
（5）溶出度測定方法的驗(yàn)證；
（6）溶出度均一性試驗(yàn)（批內(nèi)）；
（7）重現(xiàn)性試驗(yàn)（批間）等。
近來在新藥審評中發(fā)現(xiàn)，部分研究單位在進(jìn)行溶出度研究時存在一些問題，主要表現(xiàn)在溶出度研究資料過于簡單或溶出度研究內(nèi)容不夠全面。現(xiàn)予以具體分析，希望能對溶出度研究有一定的幫助。
01、溶出介質(zhì)的選擇：
（一）介質(zhì)種類:
水——最常用，良好脫氣水的pH值為5.0～7.0, 適用于溶解度對pH值不敏感的藥物
鹽酸溶液——模擬酸性胃液的介質(zhì), 適用于酸中穩(wěn)定的藥物,濃度一般為0.1～0.01mol/L，pH值一般為1.0～2.2。
磷酸鹽緩沖液(PBS)——模擬中等酸性至弱堿性胃液或腸液的介質(zhì), 濃度一般為0.05mol/L，pH值一般為4.5～7.6。
醋酸鹽緩沖液——模擬中等酸性胃液的介質(zhì), 濃度一般為0.05mol/L，pH值一般為3.4～6.0, 醋酸易揮發(fā)，導(dǎo)致pH值變化，溶出速率變化、測定時間長的藥物不宜采用醋酸鹽緩沖液作介質(zhì)。
（二）普通制劑 ：
(1)酸性藥物制劑 pH值分別為1.0或1.2、5.5~6.5、6.8~7.5和水；
(2)中性或堿性藥物/包衣制劑 pH值分別為1.0或1.2、3.0~5.0、6.8和水；
(3)難溶性藥物制劑 pH值分別為1.0或1.2、4.0~4.5、6.8和水；
(4)腸溶制劑 pH值分別為1.0或1.2、6.0、6.8和水；
（三）調(diào)釋制劑 ：
pH值分別為1.0或1.2、3.0～5.0、6.8～7.5和水查詢藥物的PKa值，PKa＜3.0,為酸性物質(zhì)；PKa≥3.0為堿性/中性藥物。
（四）介質(zhì)的pH值:
原則：根據(jù)體內(nèi)吸收部位的pH值環(huán)境。
藥物溶解度對pH值的敏感性(pH-溶解度曲線測定：取過量的原料藥，置具塞試管中，分別加PH1.0-8.0的溶出介質(zhì)適量，使之成飽和溶液，過濾，取續(xù)濾液經(jīng)HPLC法測定準(zhǔn)確溶度，計算溶解度并繪制pH-溶解度曲線；觀察曲線與PH的變化情況)。
藥物的穩(wěn)定性來選擇介質(zhì)的pH值（確保主成分在溶出介質(zhì)中的穩(wěn)定性）。
02、溶出體積的選擇
籃法和槳法的溶出體積應(yīng)在500～1000ml，目前多采用大杯法900-1000ml。除有充足理由。不建議采用該范圍以外的體積。該體積范圍的設(shè)定是為滿足藥物的漏槽條件 —— 溶出介質(zhì)體積應(yīng)大于藥物全部溶解所需體積的三倍，以保證藥物溶出不受其溶解性影響而設(shè)。而對于小杯法是相對小規(guī)格固體制劑，當(dāng)采用紫外法檢測無法滿足測定要求時，從第二法衍生改良而得，截至目前僅我國收載。但該法對于某些活性成分，由于無法滿足溶出度試驗(yàn)漏槽條件的要求，故建議在新產(chǎn)品溶出度研究與擬定上盡量勿采用該法，解決的辦法：
①加大進(jìn)樣量體積至100~200μl。
②調(diào)整流動相使主成分保留時間縮短，色譜峰成“尖峰”狀，積分將更加準(zhǔn)確、精密度自然提高。
③不選最大吸收波長，選擇末端強(qiáng)吸收處波長作為檢測波長，以加大響應(yīng)值。
03、溶出方法裝置和轉(zhuǎn)速的選擇
籃法和槳法是目前通用性最強(qiáng)、耐用性最高、儀器最為普及的法定溶出方法，因此，建議首選該兩法，槳法—首選，只要藥物不上浮就應(yīng)選槳法，推薦50轉(zhuǎn)/分，一般選用50~75rpm，不推薦采用100轉(zhuǎn)甚至更高的轉(zhuǎn)速，因?yàn)檫@將嚴(yán)重降低對于不同來源同一制劑的區(qū)分力，且大大降低體內(nèi)外相關(guān)性，除非在已驗(yàn)證該制劑體內(nèi)具有良好生物利用度的前提下，并應(yīng)提供充足的理由與驗(yàn)證資料；
轉(zhuǎn)籃法推薦100轉(zhuǎn)/分，一般選用50~100rpm；槳法通常將轉(zhuǎn)籃法/100轉(zhuǎn)強(qiáng)度看作與槳板法/50轉(zhuǎn)相當(dāng)、且將該強(qiáng)度看作與中老年人體的胃腸道蠕動強(qiáng)度等同；
當(dāng)采用槳法/75rpm試驗(yàn)條件難以準(zhǔn)確評價質(zhì)量時，可改為籃法/120rpm。但是在某溶出介質(zhì)中，當(dāng)結(jié)束時間點(diǎn)溶出量仍達(dá)不到90%，緩/控85%時，可放寬溶出參數(shù)，如現(xiàn)增加轉(zhuǎn)速75轉(zhuǎn)/分，未果的話可以加入表面活性劑。
04、測定時間點(diǎn)和結(jié)束時間點(diǎn)的設(shè)定
測定時間點(diǎn)：普通和腸溶制劑可分別為5、10、15、20、30、45、60、90、120min，此后每隔1小時測定。
緩/控制劑：15、30、45、60、90分鐘和2、3、4、5、6、8、10、12、24小時。
結(jié)束時間點(diǎn)：在酸性介質(zhì)（ph1.0-3.0）中最長為2h，其他PH介質(zhì)中，普通和腸溶為6h，緩/控為24h，擔(dān)當(dāng)連續(xù)兩點(diǎn)達(dá)90%（緩/控85%），且差值小于5%時，可提前結(jié)束。
05、取樣時間點(diǎn)和限度的擬定
高溶解度且快速溶解產(chǎn)品：單個時間點(diǎn)，大多數(shù)情況。對于普通制劑，建議以第一次出現(xiàn)溶出量均在85%（或90%）以上的兩時間點(diǎn)，且該兩點(diǎn)溶出量差值在5%以內(nèi)，取前一時間點(diǎn)作為質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中的取樣時間點(diǎn)，并將該點(diǎn)的溶出量減去15%作為溶出限度。取樣時間一般為5的倍數(shù)，3以上可向上約靠。
低溶解度且溶出緩慢的制劑或?qū)θ艹龆扔刑厥庖蟮闹苿簝蓚€時間點(diǎn)。
緩釋制劑：藥物作用8小時的一般至少設(shè)3個時間點(diǎn)。
作用12～16小時的至少設(shè)4個時間點(diǎn)。
作用24小時或以上的至少設(shè)5個時間點(diǎn)。
06、含量測定方法的選擇與驗(yàn)證
原則：專屬好、重復(fù)性好、方便快捷、易于自動化盡可能與含量測定方法相同
紫外分光光度法——首選。
無紫外吸收的，可衍生化后比色。
溶出度測定普遍采用方便快捷的UV法，但一定要注意輔料的干擾。特別是在短波長處，更應(yīng)注意輔料的末端吸收等干擾因素的存在。一般認(rèn)為輔料的干擾應(yīng)在2%以內(nèi)，否則UV法不適用。
采用UV法測定前，一定要進(jìn)行紫外掃描，以考察輔料是否存在干擾。
方法為：分別取對照品溶液和供試品溶液（濃度最好與對照品溶液一致或略低），進(jìn)行紫外掃描。著重觀察供試品溶液圖譜情況：是否存在基線被抬升的現(xiàn)象，以及與對照品溶液圖譜重合的情況。如輔料無干擾，則供試品溶液圖譜應(yīng)與對照品溶液圖譜基本重合或整體略低于對照品圖譜；如輔料有干擾，就會出現(xiàn)基線或末端吸收處被抬高的現(xiàn)象。
圖1. 供試品溶液圖譜（上方）與對照品溶液圖譜（下方）相比，基線被整體“抬高”
圖2. 輔料呈一“斜坡形”吸收（下方圖譜）， 在測定波長處的吸收度值約占供試品溶液（上方圖譜）的5%左右
另一方法可采用HPLC法，將其測定結(jié)果與UV法進(jìn)行比較，以判定輔料是否有干擾。
當(dāng)輔料干擾紫外法測定時，通常可采用以下方法：
雙波長吸收度差值法、導(dǎo)數(shù)光譜法
HPLC法：在HPLC色譜柱上可輕松將輔料與主成分分離，該法測定最為準(zhǔn)確、可靠，只是工作量略顯增加。
驗(yàn)證：
溶出度檢測方法按照既定的方法學(xué)認(rèn)證各項(xiàng)要求驗(yàn)證，尚需注意以下各事項(xiàng)：
(1) 對于某些難溶性藥物，如難以采用溶出介質(zhì)直接溶解對照品，可先加少量有機(jī)溶劑（如甲醇或乙醇）溶解后，再加溶出介質(zhì)稀釋的辦法，建議最終溶液中有機(jī)相比例不超過5%。如超出，應(yīng)予以相應(yīng)驗(yàn)證。
(2) 線性范圍應(yīng)考慮到有可能出現(xiàn)的低濃度點(diǎn)情況，如對于溶出曲線或調(diào)釋制劑的測定等。并為減小外標(biāo)一點(diǎn)法的測定誤差，建議將對照品溶液配制為約50%釋放量濃度。
(3) 應(yīng)注意考察活性成分在37℃溶出介質(zhì)中的穩(wěn)定性。若不佳，應(yīng)在質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中標(biāo)注“取出后立即測定的”字樣；不建議在溶出介質(zhì)中加入抗氧劑、穩(wěn)定劑等物質(zhì)。
(4) 根據(jù)實(shí)際情況，檢測波長可選取非最大吸收波長。
(5) 當(dāng)測定法為紫外法時，由于易受輔料或膠囊殼的影響，建議分別取對照品溶液與供試品溶液進(jìn)行紫外掃描后根據(jù)所得圖譜予以明了，亦可采用高效液相法進(jìn)行佐證。如干擾存 在，可考慮采用雙波長相減法或空白膠囊殼扣除法等方法予以消除，不建議采用紫外導(dǎo)數(shù)光譜法；如干擾排除較為困難，建議采用高效液相色譜法測定。
(6) 空白膠囊殼干擾在2%以內(nèi)可忽略不計；若大于2%則應(yīng)校正，并在該品種項(xiàng)下予以注明；大于25%時，則被視為溶出試驗(yàn)無效，應(yīng)重新選擇測定方法。關(guān)于其測定法，建議取6粒樣品，徹底清除其中內(nèi)容物，同法試驗(yàn)和過濾后，分別量取相同體積混勻測定。測定時、以相應(yīng)溶劑為空白。
(7) 不應(yīng)出現(xiàn)溶出度測定結(jié)果均值高于含量測定結(jié)果3%以上的情況。如出現(xiàn)，應(yīng)重新考察溶出度測定方法的適用性。
(8) 對于小規(guī)格制劑，不建議采用大于1cm的吸收池進(jìn)行紫外法測定，而建議采用HPLC法（并可酌情加大進(jìn)樣量以提高測定精密度）。但對于具有較強(qiáng)紫外吸收的活性藥物，為提高工作效率，可在溶出曲線大批量樣品測定時，采用0.1cm~1.0cm短吸收池，但必須經(jīng)過驗(yàn)證。
(9) 對一些小規(guī)格制劑，樣品過濾時會發(fā)生吸附，判定吸附與否的方法可采用：
①取溶出液，分別過濾不同體積的初濾液后測定，觀察響應(yīng)值的變化情況，、
②取樣后一份不過濾，直接采用高速離心，取上清液測定。并與采用過濾法所得的續(xù)濾液比較，考察兩者間測定數(shù)據(jù)的差異。判定自動取樣溶出儀的固有濾膜是否存在吸附時，一般采用該法。
③取對照品溶液，經(jīng)濾膜過濾后，與原溶液進(jìn)行比較，觀察測定前后數(shù)據(jù)的變化情況。
如濾膜對藥物有吸附，可采用將濾膜在沸水中煮沸1h，或加大初濾液體積等辦法予以解決。但建議采用直接高速離心的方法。
07、溶出曲線比較
產(chǎn)品上市發(fā)生較小的變更時，采用單點(diǎn)溶出度試驗(yàn)可能就足以確認(rèn)其是否未改變產(chǎn)品的質(zhì)量和性能。發(fā)生較大變更時，則推薦對變更前后產(chǎn)品在相同的溶出條件下進(jìn)行溶出曲線比較。在整體溶出曲線相似以及每一采樣時間點(diǎn)溶出度相似時，可認(rèn)為二者溶出行為相似。
由于多pH值溶出曲線的繪制已成為剖析和表達(dá)固體制劑內(nèi)在品質(zhì)的重要手段，故對溶出曲線比較的科學(xué)評價愈發(fā)重要。截至目前，報道有多種比較方法。
但自美國和日本等國的官方機(jī)構(gòu)認(rèn)定采用模型非依賴方法之一的“相似因子比較法”之后，現(xiàn)基本上被統(tǒng)一采納。該法特點(diǎn)是對溶出曲線進(jìn)行整體評價，通過計算相似因子(ƒ2)比較溶出行為的相似性。
通常，當(dāng)ƒ2數(shù)值介于50-100認(rèn)為兩條溶出曲線是相似的，該數(shù)值限定是基于兩條比較曲線上任一比較時間點(diǎn)溶出量平均差異限度不大于10%的考慮。表5提供了溶出量平均差異與相應(yīng)ƒ2因子臨界值的關(guān)系。
對于普通制劑，15min時溶出量達(dá)85%以上，則無需進(jìn)行曲線比較，此時仿制制劑亦滿足此條件。
來源：Internet
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