您當(dāng)前的位置：檢測資訊 > 科研開發(fā)
嘉峪檢測網(wǎng) 2021-09-01 20:14
注射劑作用迅速可靠，不受pH、酶、食物等影響，無首過效應(yīng)，可發(fā)揮全身或局部定位作用，適用于不宜口服藥物和不能口服的病人，但研制生產(chǎn)過程復(fù)雜，安全性及機(jī)體適應(yīng)性差，成本較高。本期我們將對在注射劑無菌保證工藝研究與驗(yàn)證常見技術(shù)問題進(jìn)行匯總講解。希望能在工藝驗(yàn)證和驗(yàn)證過程中能夠?qū)δ兴鶐椭酉聛砦覀儊砜聪孪嚓P(guān)問題及解答。
1、按照歐盟決策樹的要求，不能達(dá)到121℃，15分鐘滅菌，可選擇F0≥8的殘存概率法。請問，若產(chǎn)品能達(dá)到121℃，12分鐘滅菌，是否就不能選擇121℃，10分鐘，同樣，能達(dá)到10分鐘，就不能選擇8分鐘，都是F0≥8的情況。
答：從微生物殺滅的數(shù)學(xué)模型可知，在初始污染相同的情況下，滅菌F0值越大，無菌保證水平越高。因此，顯然為降低產(chǎn)品殘留微生物的風(fēng)險，盡量選擇高的F0值是順理成章的。
2、在產(chǎn)品質(zhì)量穩(wěn)定的條件下，均能滿足121℃，8分鐘和115℃，30分鐘，哪個條件應(yīng)該優(yōu)先選擇呢？
答：不考慮產(chǎn)品理化質(zhì)量穩(wěn)定性，理論上這兩種條件達(dá)到的F0值幾乎相等，無所謂優(yōu)選哪個。但實(shí)際生產(chǎn)中，還要考慮滅菌器內(nèi)產(chǎn)品中熱穿透的情況，滅菌器內(nèi)不同部位的產(chǎn)品實(shí)際獲得的F0值的差異，不同滅菌批次間產(chǎn)品的F0的差異等。應(yīng)該選擇熱分布差異小，產(chǎn)品F0值差異較小的滅菌工藝。
3、申報資料中的滅菌條件為“121℃，滅菌30分鐘”，這種表示法是否規(guī)范？
答：暫不說滅菌條件為“121℃，滅菌30分鐘”是否規(guī)范，“121℃，滅菌30分鐘”本身不能稱為終端滅菌，因“121℃，滅菌30分鐘”幾乎不能計(jì)算F0值。滅菌條件的表示可以參照中國藥典2020年版四部通則1421滅菌法。
4、同品種10ml、20ml注射劑，采取相同的滅菌方式是否合適？
答：同品種10ml、20ml注射劑，可以采取相同的滅菌方式，但應(yīng)進(jìn)行熱穿透試驗(yàn)，考察不同體積樣品的熱穿透是否有一致，同時考慮采用的滅菌方式應(yīng)能保證大體積產(chǎn)品的無菌保證水平。
5、選擇最高無菌保證水平的滅菌工藝，可能會與產(chǎn)品的質(zhì)量，如有關(guān)物質(zhì)、穩(wěn)定性等方面有沖突，如何平衡這一矛盾？另外，國外上市的是粉針劑，國內(nèi)申報時是否還需要進(jìn)行滅菌工藝的選擇研究？
答：實(shí)際上，在進(jìn)行滅菌工藝選擇研究過程中就應(yīng)該進(jìn)行不同滅菌條件下樣品質(zhì)量變化的研究，選擇滅菌工藝的過程也是平衡無菌保證水平和（樣品質(zhì)量）理化指標(biāo)的過程，在產(chǎn)品有臨床需求的情況下，滅菌工藝的選擇應(yīng)以其自身能達(dá)到的最高無菌保證水平為原則。對國外上市的粉針劑，國內(nèi)申報時也應(yīng)對其采用粉針劑型進(jìn)行研究，如主藥確系對熱、對水分不穩(wěn)定，則可以采用與國外相同的粉針劑；如果主藥不是對熱、對水分不穩(wěn)定，則應(yīng)根據(jù)主藥的性質(zhì)選擇無菌保證水平高的劑型。
6、最終滅菌工藝的選擇原則是首選F0≥12，而不是F0≥8；還是只要達(dá)到F0≥8即可？
答：可參考?xì)W盟滅菌工藝選擇的決策樹。
7、決策樹中殘存概率法是否亦優(yōu)先選擇121℃的溫度條件？
答：不一定，要根據(jù)產(chǎn)品的穩(wěn)定性確定，如果采用更高溫度和更短的時間能滿足殘存概率法時，可能比較低溫度，更長時間的滅菌條件對產(chǎn)品更有利。如果產(chǎn)品不能耐受121℃的高溫，則可以降低溫度，并保證微生物的殘存概率小于10-6。
8、對熱不穩(wěn)定藥品（如蛋白質(zhì)類、生物制品等），應(yīng)該直接進(jìn)行無菌生產(chǎn)工藝的驗(yàn)證。
答：對熱不穩(wěn)定藥品（如蛋白質(zhì)類、生物制品等），首先應(yīng)對采用的無菌工藝進(jìn)行研究，是采用除菌過濾+無菌生產(chǎn)工藝，還是采用無菌組裝工藝；然后再對無菌工藝進(jìn)行驗(yàn)證。
9、是否在產(chǎn)品注冊申報時就已形成本產(chǎn)品的完整的工藝規(guī)程中規(guī)定的各項(xiàng)參數(shù)的驗(yàn)證？
答：藥品注冊管理辦法規(guī)定，申請人在申報“藥品注冊申請表”后，經(jīng)藥品審評中心審評符合規(guī)定的，通知申請人向藥品認(rèn)證管理中心申請生產(chǎn)現(xiàn)場檢查，現(xiàn)場檢查目的是確認(rèn)核定生產(chǎn)工藝的可行性，同時抽取1批樣品，并規(guī)定樣品的生產(chǎn)應(yīng)當(dāng)符合GMP要求。由此可見，申報產(chǎn)品注冊時，應(yīng)對用于正式上市產(chǎn)品生產(chǎn)的工藝有了足夠的認(rèn)識。這種認(rèn)識是建立在產(chǎn)品和工藝開發(fā)，擴(kuò)產(chǎn)、設(shè)備和系統(tǒng)的驗(yàn)證以及驗(yàn)證批的生產(chǎn)整個過程上的。驗(yàn)證批的目的是要證明在規(guī)定的工藝參數(shù)的范圍內(nèi)，工藝過程能始終生產(chǎn)出合格的產(chǎn)品來。因此，在進(jìn)行驗(yàn)證批生產(chǎn)前，應(yīng)已充分了解并能控制工藝中各種關(guān)鍵的可變因素。
10、在進(jìn)行滅菌工藝驗(yàn)證時，一般會放置一個校驗(yàn)的探頭在滅菌柜控制探頭旁邊，這兩者之間的溫度差異有什么要求？是否應(yīng)按校樣標(biāo)準(zhǔn)，只允許±0.5℃的偏差？
答：一般來說:
① ：滅菌器自帶的獨(dú)立的記錄探頭與監(jiān)控探頭就應(yīng)完成足夠的驗(yàn)證數(shù)據(jù)，然后對存在的偏差作修正；
② ：驗(yàn)證所用的測溫探頭的精度應(yīng)優(yōu)于滅菌器自帶的記錄探頭和監(jiān)控探頭；
③：驗(yàn)證本身的作用之一是對滅菌器自帶的監(jiān)控探頭和記錄探頭進(jìn)行修正，以便正常使用時達(dá)到較為準(zhǔn)確的溫度值。
目前沒有找到“只允許±0.5℃的偏差”的說法。
11、在同一條大容量注射劑生產(chǎn)線上，如果有一臺滅菌柜，需要進(jìn)行多個規(guī)格產(chǎn)品（如250ml,100ml）以及不同滅菌參數(shù)產(chǎn)品（比如滅菌溫度和時間不同）的滅菌，那么在進(jìn)行驗(yàn)證和再驗(yàn)證的過程中，如何進(jìn)行熱分布以及熱穿透的驗(yàn)證設(shè)計(jì)？是否各種規(guī)格、各種滅菌條件均需分別進(jìn)行驗(yàn)證？
答：一般來說，各種規(guī)格、各種滅菌條件均需分別進(jìn)行驗(yàn)證。
不同規(guī)格混合裝載的滅菌，除非能夠確認(rèn)很多的相關(guān)內(nèi)容，否則不推薦應(yīng)用。
12、在對濕熱滅菌器進(jìn)行驗(yàn)證或再驗(yàn)證過程中，進(jìn)行熱分布、熱穿透的驗(yàn)證時，如果柜內(nèi)設(shè)置12個或16個熱電偶進(jìn)行溫度測試時，找到的冷點(diǎn)在3次驗(yàn)證中可能不同，如果出現(xiàn)這種情況該如何處理？
答：一般來說，空載熱分布的冷點(diǎn)應(yīng)該是在確定的位置周圍，否則就可能是設(shè)備、壓力、空氣置換不完全、蒸汽質(zhì)量等原因引起。
對于裝載熱穿透，大容量注射劑（LVP，>100ml）冷點(diǎn)位于產(chǎn)品的幾何中心和沿縱軸位于產(chǎn)品的底部，但需要驗(yàn)證確認(rèn)。冷點(diǎn)的定位在小容量注射劑中并不典型，因?yàn)槿芤杭訜岬乃俾蕩缀跖c滅菌器相同。
還有，容器的方向也會影響冷點(diǎn)的位置，當(dāng)容器旋轉(zhuǎn)或翻轉(zhuǎn)時，可能不存在可辨別的冷點(diǎn)。
如果裝載不變，容量相同，蒸汽穿透不存在阻隔等，冷點(diǎn)仍然無法重現(xiàn)，則應(yīng)檢查設(shè)備、工藝、壓力、蒸汽質(zhì)量等方面可能存在的不確定性。
13、滿載熱分布和空載熱分布對于滅菌效果上體現(xiàn)出的意義有何不同？
答：兩項(xiàng)試驗(yàn)都是測量滅菌腔室的溫度分布情況，還不反映產(chǎn)品內(nèi)的溫度和熱效益的情況，還不能直接反映產(chǎn)品的滅菌效果。但腔室情況顯然會影響產(chǎn)品內(nèi)的情況。驗(yàn)證中依次進(jìn)行空載熱分布、滿載熱分布、產(chǎn)品熱穿透試驗(yàn)。采用這種試驗(yàn)的主要目的是用盡量少的試驗(yàn)次數(shù)，盡可能地揭示客觀情況。前道試驗(yàn)的結(jié)果為后道試驗(yàn)提供信息。
14、滿載熱分布試驗(yàn)是用空瓶進(jìn)行還是用裝注射用水的輸液瓶進(jìn)行？
答：滿載熱分布試驗(yàn)是用模擬樣品進(jìn)行。
15、如驗(yàn)證時的裝載方式為半載或滿載，在以后生產(chǎn)中處于滿載和半載之間的是否需要驗(yàn)證？
答：對于處于滿載和半載之間的裝載方式，建議使用模擬產(chǎn)品填充使其達(dá)到滿載，從而確保生產(chǎn)時的裝載方式與驗(yàn)證時一致。
16、熱穿透試驗(yàn)怎么做？
答：熱穿透試驗(yàn)的目的是確定滅菌室裝載中的“最冷點(diǎn)”，并確認(rèn)該點(diǎn)在預(yù)定的滅菌程序中獲得充分的無菌保證值，即菌種殘余量≤10-6及各檢測點(diǎn)溫度與滅菌室內(nèi)平均溫度的差值≤2.5℃。對于可能影響滅菌效果的操作情況的變更應(yīng)做相應(yīng)的驗(yàn)證，確認(rèn)操作方法。
例如：當(dāng)在每個滅菌盤上增加不銹鋼蓋后，實(shí)際產(chǎn)品（溶液）內(nèi)部的升溫時間要比不加蓋時慢2分鐘，因此要在滅菌程序設(shè)定時增加2分鐘的時間。熱電偶的放置與滿載熱分布試驗(yàn)規(guī)程一致，將標(biāo)準(zhǔn)熱電偶放在滅菌溶液中心部位。
17、熱穿透試驗(yàn)中的模擬樣品是什么概念，是指實(shí)驗(yàn)室小批量樣品嗎？
答：熱穿透試驗(yàn)中的模擬樣品是指熱穿透性能與真實(shí)樣品一致的樣品，不是實(shí)驗(yàn)室小批量樣品。
18、微生物挑戰(zhàn)試驗(yàn)的生物指示劑的種類需要根據(jù)品種選擇嗎？如何選擇？
答：微生物挑戰(zhàn)試驗(yàn)的生物指示劑的種類及選擇可以參考中國藥典2005年版二部附錄169滅菌法。
19、滅菌前微生物污染水平的測定方法？
答：濾膜過濾法是最常用的方法。使用前應(yīng)通過驗(yàn)證。
20、產(chǎn)品的微生物限度檢測結(jié)果為0CFU，沒有發(fā)現(xiàn)耐熱微生物，那么驗(yàn)證過程中能否采用D值稍低的枯草芽孢桿菌作為生物指示劑進(jìn)行驗(yàn)證？
答：1）、微生物限度的檢測結(jié)果和選擇D值稍低的枯草芽孢桿菌作為生物指示劑之間不存在因果關(guān)系。
2）、根據(jù)提問者的問題，可以認(rèn)為其采用的是殘存概率法的滅菌工藝。對于殘存概率法的滅菌工藝可以選擇生物指示劑進(jìn)行殘存概率測試，僅僅是因?yàn)楫a(chǎn)品或包裝本身不能承受過度殺滅，從而選擇比較嚴(yán)格的過程控制，加上產(chǎn)品的初始菌數(shù)量控制，或者再加上除菌過濾工藝等等，然后選擇生物指示劑進(jìn)行靈敏度測試，測出平均含菌量N0，再進(jìn)行不少于4個梯度菌量、足夠批次、數(shù)量的產(chǎn)品的滅菌前后微生物限度測試（若必需，對不同滅菌時間也要進(jìn)行測試），尋找并得到大于下降6個對數(shù)等級的狀態(tài)參數(shù)，在滿足F0值在8~12之間的條件下，從而推算出D值。
21、請問滅菌前微生物污染水平和耐熱性（D值）的測試方法？
答：微生物污染水平通常采用濾膜過濾法截留微生物，再將濾膜轉(zhuǎn)移到固體培養(yǎng)基表面，培養(yǎng)并作微生物計(jì)數(shù)。應(yīng)注意過濾的體積、截留微生物的數(shù)量，保證足夠的檢出率（足量的過濾量）和可計(jì)數(shù)性（截留的微生物太多就沒法計(jì)數(shù)了）。
每批產(chǎn)品都進(jìn)行的耐熱性測試并非D值測試，而是所謂沸騰試驗(yàn)－一種定性試驗(yàn)。將截留了微生物的濾膜放入裝有同種產(chǎn)品藥液的試管中，進(jìn)行水浴煮沸15分鐘或更長時間，對該藥液進(jìn)行無菌檢查，如陰性則通過，呈陽性，說明污染菌是耐熱菌，則需要進(jìn)一步測D值。99%以上的檢品是非耐熱菌。
D值測定相當(dāng)復(fù)雜，請參考《藥品生產(chǎn)驗(yàn)證指南》（藍(lán)皮書，國家藥監(jiān)局編）第三篇第三章第一節(jié)，有詳細(xì)介紹。
22、怎樣根據(jù)D值計(jì)算接種量？
答：芽孢接種量的計(jì)算：Ni＝10Do(lgNo+6)/Di
其中Ni為生物指示劑耐熱孢子接種數(shù)量；No為預(yù)定產(chǎn)品中滅菌前污染微生物的限度；Do為污染微生物允許的最大D值；Di為生物指示劑耐熱孢子在產(chǎn)品中的D值。
23、對于選擇殘存概率法最終滅菌的產(chǎn)品，如果滅菌前每批檢測微生物限度，而微生物限度檢測時間為72小時，而實(shí)際連續(xù)生產(chǎn)的生產(chǎn)周期遠(yuǎn)遠(yuǎn)短于72小時，其檢測結(jié)果僅是對滅菌后產(chǎn)品無菌保證水平的參考嗎？
答：顯然滅菌前微生物含量檢查的結(jié)果遠(yuǎn)遠(yuǎn)滯后于生產(chǎn)過程，其目的不是用于對當(dāng)批產(chǎn)品的中間控制。
該檢查的意義主要有兩項(xiàng)：第一，用于評價該批產(chǎn)品的無菌保證水平；第二，長期積累了多批滅菌前微生物含量的數(shù)據(jù)后，可以對生產(chǎn)系統(tǒng)在滅菌前的各工藝步驟的微生物污染狀況作整體的評估，從而指示該生產(chǎn)體系是否有效地將微生物污染控制在很好的水平，是否需要進(jìn)行改進(jìn)等。
24、請問微生物種類、數(shù)量研究的方法？所需的設(shè)備？如果采用殘存概率法，是否在生產(chǎn)過程中必須對微生物水平進(jìn)行測定，如果引入將增加多少成本？作為大輸液生產(chǎn)企業(yè)，采用殘存概率法，是否要建立專門的微生物實(shí)驗(yàn)室檢測滅菌前藥液微生物污染水平？
答：微生物污染的程度－即數(shù)量的檢查可以按照藥典收載的微生物限度檢查方法進(jìn)行；微生物的種類即鑒別可以從以下幾方面依次展開：1）通過肉眼觀察菌落形態(tài)；2）鏡檢形態(tài)和運(yùn)動性；3）一般生化試驗(yàn)：革蘭氏染色或3％KOH試驗(yàn)；4）生化鑒定（即API試驗(yàn)）鑒別到種。
采用殘存概率法時，應(yīng)該檢測產(chǎn)品滅菌前微生物污染水平，包括污染菌的煮沸試驗(yàn)（如100℃，15分鐘）和微生物計(jì)數(shù)。
注射劑生產(chǎn)企業(yè)，微生物實(shí)驗(yàn)室是必不可少的，其基本功能應(yīng)包括原輔料的微生物限度檢查，產(chǎn)品滅菌前微生物污染量檢查，產(chǎn)品無菌檢查，細(xì)菌內(nèi)毒素檢查，生產(chǎn)環(huán)境動態(tài)檢查（空氣微粒、浮游菌和沉降菌計(jì)數(shù)）。有條件的實(shí)驗(yàn)室還可開展以下工作：微生物的鑒別試驗(yàn)（建議企業(yè)集團(tuán)的中心實(shí)驗(yàn)室開展API鑒定），生物指示劑的標(biāo)定（即D值測定，建議企業(yè)集團(tuán)中心實(shí)驗(yàn)室開展該項(xiàng)工作）。
25、對于過度殺滅法是否需要進(jìn)行滅菌工藝驗(yàn)證？殘存概率法的產(chǎn)品研發(fā)工藝研究與實(shí)際生產(chǎn)中驗(yàn)證有何區(qū)別？
答：當(dāng)然需要驗(yàn)證，歐盟CGMP附錄第83條：所有的滅菌工藝都應(yīng)驗(yàn)證。
殘存概率法是滅菌工藝的設(shè)計(jì)，本身就需要驗(yàn)證確認(rèn)。
26、過度殺滅法是否確定不需進(jìn)行微生物挑戰(zhàn)試驗(yàn)？
答：過度殺滅法的內(nèi)涵是產(chǎn)品中的微生物下降12個對數(shù)，微生物挑戰(zhàn)試驗(yàn)是證明微生物的殘存概率不大于10-6，故過度殺滅法可以不進(jìn)行微生物挑戰(zhàn)試驗(yàn)。
27、最終滅菌產(chǎn)品是否每個申請注冊的品種都要單獨(dú)進(jìn)行設(shè)備驗(yàn)證？是否可以只進(jìn)行一次設(shè)備驗(yàn)證，其它品種可以通用？設(shè)備驗(yàn)證資料是否可不附在品種驗(yàn)證資料中，只作為存檔備查？
答：最終滅菌產(chǎn)品不一定每個申請注冊的品種都要單獨(dú)進(jìn)行設(shè)備驗(yàn)證，如果注冊品種采用相同的或更低的滅菌條件，可以只進(jìn)行較高溫度滅菌條件下的設(shè)備驗(yàn)證；針對品種滅菌條件的設(shè)備驗(yàn)證資料也應(yīng)附在品種的驗(yàn)證資料中。
28、非溶液劑型、半固體或粉針劑的滅菌工藝可以計(jì)算出類似于F0值的數(shù)值嗎？可以計(jì)算出SAL嗎？具體規(guī)定是多少？
答：非溶液劑型、半固體或粉針劑的滅菌工藝不可以計(jì)算出F0值，但可以計(jì)算出SAL，具體可參考?xì)W盟滅菌工藝選擇的決策樹。
29、關(guān)于培養(yǎng)基灌裝試驗(yàn)，是針對生產(chǎn)線驗(yàn)證的，還是針對申報產(chǎn)品進(jìn)行的（每個產(chǎn)品都要灌裝三批驗(yàn)證），請問：（1）生產(chǎn)線驗(yàn)證能否代替申報產(chǎn)品的灌裝試驗(yàn)（同類品種）？（2）采用何種培養(yǎng)基，硫乙醇酸鹽和改良馬丁兩種培養(yǎng)基都要嗎？（3）GMP檢查中不同包裝規(guī)格是否都需要進(jìn)行三批次的灌裝試驗(yàn)？
答：（1）培養(yǎng)基模擬灌裝試驗(yàn)應(yīng)根據(jù)產(chǎn)品、包裝規(guī)格、包裝形式的不同而分別進(jìn)行。例如，如果產(chǎn)品是粉針劑，則培養(yǎng)基模擬灌裝試驗(yàn)通常會先灌裝液體培養(yǎng)基，然后再灌裝模擬產(chǎn)品的無菌粉末（如PEG無菌粉）；如果無菌注射液或凍干粉針劑，則只需灌裝液體培養(yǎng)基即可；如果包裝的規(guī)格有2ml、5ml、10ml幾種，則即便是同一種產(chǎn)品也需要分別進(jìn)行各自規(guī)格的培養(yǎng)基模擬灌裝試驗(yàn)；如果包裝的形式有西林瓶或者其他形式（如預(yù)充式注射器、安瓿），因采用不同生產(chǎn)線需要分別進(jìn)行培養(yǎng)基模擬灌裝試驗(yàn)。
在具體工作中，考慮到培養(yǎng)基模擬灌裝試驗(yàn)實(shí)際上是對整個生產(chǎn)線的系統(tǒng)驗(yàn)證，包括生產(chǎn)設(shè)備、環(huán)境和人員操作等，所以，如果進(jìn)行培養(yǎng)基模擬灌裝試驗(yàn)采用最差條件，即瓶子最大，灌裝速度最慢，人員最多，時間長于正常生產(chǎn)的時間等，則也可以不必進(jìn)行每個產(chǎn)品、每個規(guī)格的培養(yǎng)基模擬灌裝試驗(yàn)；如果不是最差條件，則應(yīng)根據(jù)產(chǎn)品、包裝規(guī)格、包裝形式的不同分別進(jìn)行。
（2）一般采用廣譜的培養(yǎng)基，能促進(jìn)革蘭氏陽性、陰性、酵母菌和霉菌的生長，如大豆胰蛋白胨培養(yǎng)基，厭氧培養(yǎng)基只在特殊情況下使用。
（3）只有在首次驗(yàn)證時，每種規(guī)格需要連續(xù)成功進(jìn)行3次培養(yǎng)基模擬灌裝試驗(yàn)，以后每年進(jìn)行2次，每次進(jìn)行1批次培養(yǎng)基模擬灌裝試驗(yàn)即可。
30、培養(yǎng)基灌裝試驗(yàn)中，培養(yǎng)基滅菌后、灌裝前，再經(jīng)濾膜除菌過濾，以觀察濾器在消毒安裝過程中的無菌效果，是否可行？
答：培養(yǎng)基灌裝試驗(yàn)是對包括無菌過濾在內(nèi)的所有步驟的無菌性保證程度的考察，推薦配制培養(yǎng)基后直接用于無菌過濾及隨后的灌裝過程，實(shí)際操作中要注意防止不溶性顆粒堵塞濾器。
31、培養(yǎng)基灌裝試驗(yàn)?zāi)甓仍衮?yàn)證每年兩次，每次幾批？
答：對于某個產(chǎn)品的年度再驗(yàn)證，通常的做法是每年進(jìn)行兩次培養(yǎng)基灌裝試驗(yàn)，每次一批。
32、中國藥典2005年版無菌培養(yǎng)時間已變?yōu)?4天，培養(yǎng)基模擬灌裝后在兩個溫度的培養(yǎng)試驗(yàn)是否也需延長？
答：總培養(yǎng)時間不得少于14天，可以分成兩個溫度（22.5度和32.5度）各培養(yǎng)至少7天，也可以一個溫度（22.5度）直接培養(yǎng)。
33、培養(yǎng)基灌裝試驗(yàn)合格標(biāo)準(zhǔn)置信限為95%，染菌概率0.1%，請具體解釋一下使用哪個統(tǒng)計(jì)方法，如何計(jì)算查表得出。
答：有關(guān)計(jì)算公式的詳細(xì)說明，可參照國家食品藥品監(jiān)督管理局藥品安全監(jiān)管司和藥品認(rèn)證管理中心組織編寫的《藥品生產(chǎn)驗(yàn)證指南（2003）》（化學(xué)工業(yè)出版社）一書第258頁。
有兩種計(jì)算方法。一種是采用泊松分布的近似值計(jì)算公式，即：P（X>0）=1－e-Np>0.95
其中，P為置信限，N為模擬分裝瓶數(shù)或批量，p＝0.1％（污染概率）
另一種計(jì)算方法是更為精確的二項(xiàng)式計(jì)算公式，即P(X>0)=1－（1－X）N
其中，P為置信限，N為模擬分裝瓶數(shù)或批量，X=0.1％（污染概率）
在書中的第259頁，列有“可信限為95%時一次模擬分裝中模擬分裝量、污染數(shù)量與污染概率關(guān)系表”，可從該表查出模擬分裝數(shù)量與污染數(shù)量的對應(yīng)數(shù)值。
34、在講義72頁第59張片子中提到粉針劑、凍干粉針、小容量注射劑工藝驗(yàn)證的異同點(diǎn)中培養(yǎng)基灌裝程序的差異主要是指什么，具體怎樣做，起始點(diǎn)是哪里，從哪里開始到哪里結(jié)束？
答：對于無菌粉針劑，培養(yǎng)基灌裝的形式有一些特殊性，如要準(zhǔn)備模擬的無菌粉末，分裝后用注射器將液體培養(yǎng)基加入瓶中；或?qū)o菌培養(yǎng)基粉末分裝，結(jié)束后用注射器加入無菌注射用水。但目的仍是考察整個無菌分裝過程的無菌保證程度。
35、如何進(jìn)行容器密封性驗(yàn)證？
答：容器密封性驗(yàn)證常采用物理和微生物學(xué)檢測手段。物理檢測有許多優(yōu)點(diǎn)，如靈敏度較高、使用方便、檢測迅速及低成本等。在產(chǎn)品有效期內(nèi)，均可使用物理檢測方法來確定包裝完整性是否符合規(guī)定要求。進(jìn)行包裝完整性檢測的一個重要原因是確保無菌產(chǎn)品始終保持無菌狀態(tài)。
因此，在產(chǎn)品包裝的研發(fā)階段，應(yīng)考慮采用微生物侵入試驗(yàn)，或采用經(jīng)驗(yàn)證過的并且比微生物檢測更為有效的物理試驗(yàn)方法，來檢測產(chǎn)品包裝的完整性。但是，對效期內(nèi)產(chǎn)品的穩(wěn)定性試驗(yàn)來說，因進(jìn)行微生物侵入試驗(yàn)較為困難，故建議采用物理檢測方法。
微生物侵入試驗(yàn)是對最終滅菌容器／密封系統(tǒng)完好性的挑戰(zhàn)性試驗(yàn)。在驗(yàn)證試驗(yàn)中，取輸液瓶或西林瓶(小瓶)，灌裝入培養(yǎng)基，在正常生產(chǎn)線上壓塞、壓蓋滅菌。然后，將容器密封面浸入高濃度運(yùn)動性菌液中，取出、培養(yǎng)并檢查是否有微生物侵入，確認(rèn)容器密封系統(tǒng)的完好性。同時，需作陽性對照試驗(yàn)，確認(rèn)培養(yǎng)基的促菌生長能力。
36、在采用微生物浸泡法進(jìn)行容器密封性驗(yàn)證時，為什么要事先去除鋁蓋，請問除去鋁蓋后，是不是只剩膠塞，那么在試驗(yàn)過程中會不會發(fā)生藥液泄露而影響驗(yàn)證結(jié)果？
答：去除鋁蓋是為了造成一個更為嚴(yán)格的條件，講課中以凍干粉針劑為例，通常容器內(nèi)有較高的真空，不會造成漏液，試驗(yàn)者可根據(jù)自己產(chǎn)品的特點(diǎn)判斷去除鋁蓋是否適用。
37、密封性驗(yàn)證中，如鋁桶的驗(yàn)證，用培養(yǎng)基驗(yàn)證無法觀察結(jié)果，是否有其他方法？
答：對于無菌原料的容器，建議嘗試物理的方法，如鹽水滲入法。
38、密封性驗(yàn)證一般每次取樣量是多少，再驗(yàn)證的周期是多少？
答：可以從壓蓋線上從開始、中間、結(jié)束各取至少10瓶進(jìn)行試驗(yàn)，起始驗(yàn)證應(yīng)考察有效期內(nèi)不同時間的密閉性，再驗(yàn)證一般一年可進(jìn)行一次。
39、驗(yàn)證指南中對大輸液產(chǎn)品的密封性驗(yàn)證有相關(guān)的要求，但對分裝及凍干產(chǎn)品無要求，是否不需進(jìn)行密封性驗(yàn)證？
答：對大容量注射劑、小容量注射劑、粉針劑均應(yīng)進(jìn)行容器密封性驗(yàn)證。
40、容器密封性測試是否在安瓿、西林瓶等所有注射劑型中都必須完成？
答：容器密封性測試在安瓿、西林瓶等所有注射劑型中都必須進(jìn)行。但采用的方法不盡相同，安瓿一般采用物理測試方法，西林瓶則采用物理和微生物學(xué)檢測方法。
41、無菌過濾驗(yàn)證目前國內(nèi)廠家能夠做到什么水平？哪種水平是國家認(rèn)可的？
答：根據(jù)國家局藥品注冊司于2008年1月10日發(fā)布執(zhí)行的《化學(xué)藥品注射劑基本技術(shù)要求（試行）》（二）制備工藝第4點(diǎn)有關(guān)凍干粉針劑的要求，除菌過濾系統(tǒng)適應(yīng)性驗(yàn)證試驗(yàn)包括過濾系統(tǒng)相容性測試、過濾前后過濾膜完整性測試、必要時尚需要進(jìn)行濾膜的微生物截留量測試。
關(guān)于滅菌工藝驗(yàn)證工作目前正處于推進(jìn)過程中，以上是基于目前的認(rèn)識所提出的階段性的要求，還將隨著對此問題的認(rèn)知而不斷完善。
42、對于濾膜的微生物挑戰(zhàn)試驗(yàn)是否需對每一種特定產(chǎn)品進(jìn)行？這部分試驗(yàn)既然交由生產(chǎn)商進(jìn)行，對生產(chǎn)商資質(zhì)是否有要求？即，如何判定供應(yīng)商提供給我的檢測報告是有效的？
答：如果不同產(chǎn)品對于過濾器的通透性影響是不同的，從而導(dǎo)致截留效率的不同，應(yīng)該對分別進(jìn)行微生物挑戰(zhàn)試驗(yàn)，反之則不需要。
目前，沒有對過濾器生產(chǎn)商的資質(zhì)有法定要求，建議選擇已通過行業(yè)認(rèn)證的，其產(chǎn)品在國際國內(nèi)廣泛應(yīng)用，質(zhì)量有保證，信用度較高的生產(chǎn)商。所選擇的過濾器供應(yīng)商是否可信是基于藥品生產(chǎn)企業(yè)對于自己所要生產(chǎn)的產(chǎn)品的了解以及對于過濾工藝的了解。
過濾器生產(chǎn)商是否法定資質(zhì)并不是最重要的，最重要的是藥品生產(chǎn)企業(yè)是否清楚自己選擇的過濾器適用于所生產(chǎn)的產(chǎn)品，過濾器的材質(zhì)是否符合安全性的要求，符合制藥的要求，藥品生產(chǎn)企業(yè)是否清楚自己研發(fā)的過濾工藝是否有效。也就是說，只有自己真正理解了過濾的專業(yè)知識，了解產(chǎn)品和工藝，才能判定供應(yīng)商檢測報告的有效性。
此外，還可以到過濾器供應(yīng)商那里親眼看看檢測過程，對供應(yīng)商進(jìn)行質(zhì)量審計(jì)，這也有助于增強(qiáng)判斷的準(zhǔn)確性。
43、除菌過濾使用二個濾芯串聯(lián)，是否孔徑一致？如對主藥成分有影響，如何解決？
答：串聯(lián)的兩個除菌過濾器，其濾膜孔徑應(yīng)一致，如果串聯(lián)的兩個除菌過濾濾芯是不同生產(chǎn)批號的，就更好。
如果濾膜對主要成分有影響，應(yīng)根據(jù)過濾系統(tǒng)相容性測試的結(jié)果選用其他材質(zhì)的濾膜，使其對主藥成分沒有影響。
44、請具體介紹一下過濾器完整性試驗(yàn)的測試方法，如“擴(kuò)散流試驗(yàn)”。
答：過濾器完整性試驗(yàn)的測試方法應(yīng)參照供應(yīng)商說明書提供的方法。如果采用擴(kuò)散流方法，請根據(jù)供應(yīng)商說明書使用指定的介質(zhì)潤濕過濾器，再與擴(kuò)散流法的專用儀器、壓力氣體（壓縮空氣或氮?dú)猓┫噙B接，向過濾器提供供應(yīng)商說明書確定的壓力，專用儀器會自動打印出測試結(jié)果，表明試驗(yàn)通過還是不通過。
45、過濾器驗(yàn)證哪些是生產(chǎn)企業(yè)必須進(jìn)行的？哪些是供應(yīng)商提供的？
有的老師在講課中提到“微生物挑戰(zhàn)性試驗(yàn)由供應(yīng)商做，以避免污染產(chǎn)品”，有的老師在講課中提到無菌過濾器微生物挑戰(zhàn)試驗(yàn)，應(yīng)該在實(shí)際的生產(chǎn)參數(shù)下進(jìn)行驗(yàn)證，且微生物截留試驗(yàn)必須在藥液中進(jìn)行，這似乎只能由藥品生產(chǎn)企業(yè)完成。如何理解？如何進(jìn)行此項(xiàng)試驗(yàn)更能保證驗(yàn)證的科學(xué)價值？
答：兩者并不矛盾。過濾器生產(chǎn)廠家都應(yīng)有自己的實(shí)驗(yàn)室，如Pall和Millipore，可以利用藥品生產(chǎn)企業(yè)提供的藥液，選擇合適的過濾器并確定實(shí)際生產(chǎn)中的過濾參數(shù)，并在這些參數(shù)范圍內(nèi)進(jìn)行微生物挑戰(zhàn)試驗(yàn)。
46、過濾器使用前后起泡點(diǎn)測試中，使用以后是用注射用水沖洗后測試好，還是直接測試好？
答：起泡點(diǎn)試驗(yàn)需要保持過濾器的充分潤濕，在過濾器選擇和驗(yàn)證時就應(yīng)確定潤濕的介質(zhì)）
47、起泡點(diǎn)試驗(yàn)與前向流試驗(yàn)，在過濾器的完整性試驗(yàn)中，是只需選擇一種，還是必須兩種都作？
答：選擇一種即可，但應(yīng)根據(jù)過濾器驗(yàn)證中確定的完整性試驗(yàn)的測試條件和標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行）
48、如何補(bǔ)救吐溫使濾膜孔徑變大，以保證藥品的安全性？
答：企業(yè)應(yīng)將產(chǎn)品的成分和特性等資料提供給過濾器生產(chǎn)廠家，過濾器廠家根據(jù)產(chǎn)品特性選擇合適的過濾材質(zhì)并進(jìn)行無菌過濾驗(yàn)證）
49、無菌藥品應(yīng)如何監(jiān)控中間產(chǎn)品的微生物和細(xì)菌內(nèi)毒素污染情況？非最終滅菌？最終滅菌？通常微生物檢測需要4－5天，而中間產(chǎn)品須當(dāng)天完成才能決定是否可以進(jìn)入下道工序。
答：在無菌藥品生產(chǎn)過程中，不管是非最終滅菌還是最終滅菌工藝，盡管中間產(chǎn)品的微生物檢測需要幾天的時間，但是通常不用等微生物檢測的結(jié)果，可直接進(jìn)行下一步工序的生產(chǎn)。等中間產(chǎn)品的微生物檢驗(yàn)結(jié)果出來后，可以根據(jù)檢測結(jié)果采取相應(yīng)的措施，如中間產(chǎn)品的檢驗(yàn)結(jié)果合格，則產(chǎn)品可以繼續(xù)生產(chǎn)直至最終方行，如中間產(chǎn)品的檢驗(yàn)結(jié)果不合格，則產(chǎn)品不能放行。
50、生產(chǎn)環(huán)境的控制：（1）在生產(chǎn)過程中，無菌灌裝線上沉降碟的放置是否應(yīng)在所用操作開始前完成？（2）沉降碟需要暴露多長時間？（3）在講義60頁提到的無菌灌裝區(qū)生產(chǎn)環(huán)境監(jiān)控頻率中測試項(xiàng)目“表面微生物”是指哪種檢測項(xiàng)目，其內(nèi)容和標(biāo)準(zhǔn)是什么，監(jiān)測頻率是否是每批一次呢？（4）動態(tài)沉降菌檢測中，等結(jié)果出來已經(jīng)是2-3天后了，如何根據(jù)結(jié)果進(jìn)行判斷？（5）壓縮空氣的微生物檢測如何很好的進(jìn)行？
答：（1）是，這樣可以監(jiān)測整個操作過程。
（2）歐盟、FDA的要求是不超過4小時，目前我國的要求為30分鐘，在新GMP修訂時可能會考慮采用國際通行要求。
（3）表面微生物測試是考察如墻面、地面、操作臺面、設(shè)備等表面的微生物狀態(tài)，一般采用接觸碟或棉拭子的方法，相關(guān)的標(biāo)準(zhǔn)請參照歐盟GMP附錄1和FDA有關(guān)無菌生產(chǎn)工藝的指南。
（4）由于微生物培養(yǎng)的特點(diǎn)，批生產(chǎn)時進(jìn)行的環(huán)境微生物監(jiān)測的結(jié)果至少需要等待2-3天的時間，一旦發(fā)生超標(biāo)，需要進(jìn)行全面的分析和調(diào)查，以找出造成偏差的原因，并評估對產(chǎn)品的污染風(fēng)險。
（5）由于壓縮氣體有壓力，一般的空氣浮游菌采樣儀較難直接測定，需要先進(jìn)行減壓，現(xiàn)已有商品化的壓縮氣體浮游菌采樣儀。
來源：博藥匯
關(guān)于我們 聯(lián)系我們 營業(yè)執(zhí)照 全國服務(wù)電話：400-818-0021 嘉峪檢測版權(quán)所有 備案號：京ICP備14047019號-2 
京公網(wǎng)安備11010802046783號
