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標(biāo)準(zhǔn)平板菌落計數(shù)法

嘉峪檢測網(wǎng) 2021-09-01 20:28

檢測食品中微生物數(shù)量，一般采用標(biāo)準(zhǔn)平板菌落計數(shù)法(SPC)對食品中的活的微生物進行菌落形成單位(CFU)數(shù)量的檢測，即將部分樣品取出混合均勻，用適當(dāng)?shù)南♂屢哼M行梯度稀釋，取一定量的稀釋液涂布或傾注瓊脂平板，在合適的溫度下培養(yǎng)一定的時間，然后通過肉眼觀察或電子計數(shù)器對所有可見菌落進行計數(shù)。雖然日常檢測大多采用傾注平板的方法，但是涂布法在檢測熱敏性菌體方面更有優(yōu)勢，能取得更好的計數(shù)結(jié)果，而且更適合于嚴(yán)格好氧菌。涂布法的缺點是涂布時瓊脂表面不干燥和培養(yǎng)后菌落蔓延導(dǎo)致無法計數(shù)。

一.菌落計數(shù)器

平板上的菌落個數(shù)可用肉眼直接觀察進行計數(shù)，也可以借助儀器進行。菌落計數(shù)器是一種數(shù)字顯示式自動細菌檢驗儀器。由計數(shù)器、探筆、計數(shù)池等部分組成，計數(shù)器采用CMOS集成電路精心設(shè)計，LED數(shù)碼管顯示，字高13mm,清晰明亮，配合專用探筆，計數(shù)靈敏準(zhǔn)確。黑色背景式計數(shù)池內(nèi)，熒光燈照明，菌落對比清楚，便于觀察。菌落計數(shù)器分手動、半自動和全自動三種類型，可根據(jù)對精確度的要求，選擇不同的計數(shù)器。

使用方法：

1.接通電源，平板去蓋，皿底朝下放入計數(shù)器后開始計數(shù)，從平板的頂部開始計數(shù)，用方格線標(biāo)記防止重復(fù)計數(shù)，利用這種機械式手動計數(shù)器，計數(shù)每一個菌落，無論多小或不典型。

2.將探筆插入儀器上的探筆插孔內(nèi)。打開計數(shù)器，接通電源，計數(shù)池也內(nèi)燈亮，并且顯示窗內(nèi)顯示明亮，可以進行計數(shù)。把待檢的培養(yǎng)皿皿底朝上放入計數(shù)池內(nèi)，并用探筆在培養(yǎng)皿底面對菌落進行計數(shù)，點到的菌落處被標(biāo)上顏色，顯示窗內(nèi)數(shù)字會自動累加。用放大鏡仔細檢查，確認(rèn)點數(shù)無遺漏后，顯示窗內(nèi)的數(shù)字即為該培養(yǎng)皿內(nèi)的菌落數(shù)。

使用注意事項：儀器要放在平整牢固的試驗臺上，點數(shù)時，探筆不要過于傾斜，輕點至有彈跳感，數(shù)字即可顯示。儀器應(yīng)防塵，放大鏡表面的灰塵，要用純化水清洗后，再用鏡頭紙擦拭干凈即可，另外還應(yīng)防潮、防劇烈震動、防日光曝曬、防酸堿等，使用完后加防護罩。儀器及探筆非專業(yè)人員不能拆卸，有故障，請專業(yè)技術(shù)人員檢修。

二.菌落計數(shù)計算

1. ISO方法

根據(jù)ISO 7218: 2007 (E)菌落計數(shù)的原則，按如下方法進行計數(shù)：

(1)若有兩個連續(xù)稀釋度的平板菌落數(shù)(N)在100~300范圍時，按如下公式計算。

N=ΣC/V×1.1×d

式中：

N一平板菌落數(shù)；

ΣC-平板(含適宜范圍菌落數(shù)的平板)菌落數(shù)之和；

V-接種菌液的體積；

d-稀釋因子（第一稀釋度）。

結(jié)果保留兩位有效數(shù)字，按“四舍五入”原則修約，以整數(shù)報告。

也可以用10的指數(shù)形式(科學(xué)計數(shù)法)來表示，按“四舍五入”的原則修約后，采用兩位有效數(shù)字。

(2)平板上的數(shù)小于10時，分四種情況計數(shù)：

①平板上的菌落數(shù)小于10大于4時，結(jié)果的計算用第一部分的方法，報告時以估計數(shù)報告。平板上的菌落數(shù)小于3大于1時，精確度太低，結(jié)果的報告是微生物檢出并且小于4/d CFU/g(mL).

②平板上沒有菌落數(shù)時，結(jié)果小于1/d CFU/g (或CFU/mL), d為稀釋因子，樣品沒有稀釋時d=100=1。

③如果第一個稀釋度d1的菌落數(shù)大于300個并且都是典型的或確認(rèn)的菌落，連續(xù)的稀釋度d2平板菌落數(shù)小于300并且沒有可見的典型菌落或確認(rèn)的菌落，計數(shù)方法如下：結(jié)果記作小于1/d1CFU/g (或CFU/mL)大于1/d2CFU/g (或CFU/mlL) 。

④如果第一個稀釋度d1的平板菌落數(shù)大于300并且沒有典型的或確認(rèn)的菌落，計數(shù)方法如下：結(jié)果記作小于1/d2CFU/g(或CFU/mL)。

(3)當(dāng)?shù)谝粋€稀釋度d1平板菌落數(shù)大于300,第二個連續(xù)的稀釋度d2平板菌落數(shù)小于10。

①如果第一個稀釋度d1的平板菌落數(shù)在300-334之間，計數(shù)方法同前。

②如果第一個稀釋度d1的平板菌落數(shù)大于334,第二個稀釋度d2的平板菌落數(shù)大于8小于10,計數(shù)以估計數(shù)報告，小于1/d2CFU/g (或CFU/mL)。

③如果第一個稀釋度d1的平板菌落數(shù)大于334,第二個稀釋度d2的平板菌落數(shù)小于8則結(jié)果是無效的。

④兩個連續(xù)的稀釋度d1和d2上的平板菌落數(shù)都大于300,結(jié)果報告如下：大于300/d2，或大于300x b/Ax1/d2。b是可疑菌落A中證實的陽性菌落數(shù)。

⑤當(dāng)最高稀釋度的平板菌落數(shù)(N‘)在10-300之間，按如下公式計算：

N‘=c/V×d

式中：

c一平板上的菌落數(shù)；

V一接種菌的體積數(shù)；

d一稀釋因子。

當(dāng)有蔓延菌落時，若蔓延菌落小于平板面積的四分之一，可計算剩余部分的菌落數(shù)，然后推算出整個平板的菌落數(shù)；如果大于四分之一，不能計數(shù)；一個鏈狀菌落，只作為一個菌落計數(shù)。

2.國標(biāo)方法

我國的國標(biāo)中菌落計數(shù)原則如下：

選取菌落數(shù)在30 CFU ~300 CFU之間、無蔓延菌落生長的平板計數(shù)菌落總數(shù)。低于30CFU的平板記錄具體菌落數(shù)，大于300 CFU的可記錄為多不可計。每個稀釋度的菌落數(shù)應(yīng)采用兩個平板的平均數(shù)。其中一個平板有較大片狀菌落生長時，則不宜采用，而應(yīng)以無片狀菌落生長的平板作為該稀釋度的菌落數(shù)；若片狀菌落不到平板的一半，而其余菌落分布又很均勻，可計算半個平板后乘以2,代表一個平板菌落數(shù)。當(dāng)平板上出現(xiàn)菌落間無明顯界限的鏈狀生長時，則將每條單鏈作為一個菌落計數(shù)。

(1)若只有一個稀釋度平板上的菌落數(shù)在適宜的計數(shù)范圍內(nèi)，計算兩個平板菌落的平均值，再將平均值乘以相應(yīng)稀釋倍數(shù)，作為每克或每毫升樣品中菌落總數(shù)結(jié)果。

(2)若有兩個連續(xù)的稀釋度的平板菌落數(shù)在適宜的范圍按如下公式計算：

N=ΣC/(n1 + 0. 1n2)/d

式中：

N一樣品中菌落數(shù)：

ΣC-平板(含適宜范圍菌落數(shù)的平板)菌落數(shù)之和；

n1一第一稀釋度(低稀釋倍數(shù))平板個數(shù);

n2一第二稀釋度(高稀釋倍數(shù))平板個數(shù);

d----稀釋因子(第一稀釋度)。

(3)所有稀釋度的平板上菌落數(shù)均大于300CFU,則對稀釋度最高的平板進行計數(shù)，其他平板可記錄為多不可計，結(jié)果按平均菌落數(shù)乘以最高稀釋倍數(shù)計算。

(4)若所有稀釋度的平板菌落數(shù)均小于30CFU,則應(yīng)按稀釋度最低的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)計算。

(5)若所有稀釋度(包括液體樣品原液)平板均無菌落生長，則以小于1乘以最低稀釋倍數(shù)計算。

(6)若所有稀釋度的平板菌落數(shù)均不在30CFU~300 CFU之間，其中一小部分小于30CFU或大于300CFU時，則以最接近30CFU或300CFU的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)計算。

菌落數(shù)結(jié)果按以下原則報告結(jié)果：菌落數(shù)小于100CFU時，按“四舍五入”原則修約，以整數(shù)報告。菌落數(shù)大于或等于100CFU時，第3位數(shù)字采用“四舍五入”原則修約后，取前2位數(shù)字，后面用0代替位數(shù)；也可用10的指數(shù)的形式來表示，按“四舍五入”原則修約后，采用兩位有效數(shù)字。若所有平板上為蔓延菌落而無法計數(shù)，則報告菌落蔓延。若空白對照上有菌落生長，則此次檢測結(jié)果無效。稱重取樣以CFU/g為單位報告，體積取樣以CFU/mL為單位報告。

來源：Internet

標(biāo)準(zhǔn)平板菌落計數(shù)法

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