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Abstract  Objective： To improve the assay method of Shangshi Qutong Ointment. Methods： Gas chromatography with hydrogen flame detector were used for determination. A GC method for the simultaneous determination of 5 volatile components such as camphor was established. Results： The good linear relationships and resolutions of camphor， menthol， borneol，isoborne and methyl salicylate were obtained. Conclusion：The improved assay method for Shangshi Qutong Ointment is feasible，and benefits quality control of the product.

 

Key words： Shangshi Qutong Ointment; assay;camphor; GC

 

傷濕祛痛膏是由生川烏、生草烏、麻黃、蒼術(shù)、當(dāng)歸、白芷、干姜、山柰、八角茴香、薄荷腦、冰片、樟腦、水楊酸甲酯等13味藥物組成的一種常用的橡膠膏劑，具有祛風(fēng)濕、止痛的功效，主要用于治療頭痛，風(fēng)濕痛，神經(jīng)痛，扭傷及肌肉酸痛[1]。全國現(xiàn)有26個(gè)生產(chǎn)廠家、30個(gè)批準(zhǔn)文號。

 

傷濕祛痛膏的現(xiàn)行質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)共有4個(gè)，對揮發(fā)性成分的含量測定項(xiàng)目或缺失，或成分測定控制指標(biāo)較少[2-5]，不能有效的控制該藥品揮發(fā)性成分，而樟腦等揮發(fā)性成分是該藥品發(fā)揮療效的重要組成部分。本文通過研究建立采用氣相色譜法同時(shí)測定樟腦、薄荷腦、冰片(龍腦、異龍腦)和水楊酸甲酯等5種揮發(fā)性成分，有效地提高和改進(jìn)了傷濕祛痛膏的含量測定方法，有利于提高該藥品的質(zhì)量。

 

1 儀器與試藥

 

1.1 儀器

 

島津GC-2010型氣相色譜儀、梅特勒-托利多XP205型分析天平。

 

1.2 試藥

 

樟腦、薄荷腦、龍腦、異龍腦、冰片對照品，批號分別為：110747-201810(98.7%)、110728-201707 (100%)、110881-201709(99.6%)、111512-201603(96.7%)、110707-201614(100%)，均購自中國食品藥品檢定研究院；萘、甲苯、乙酸乙酯、無水硫酸鈉均購自國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司。樣品收集自全國生產(chǎn)企業(yè)，共計(jì)7家22批樣品，分別為遼寧A公司20181104；內(nèi)蒙古B公司18072701、19013102、19042202、19042301、19042401；河北C公司19042511、19042712、19042713、19042814、19042815、19042107；山東D公司20181202；黑龍江E有限公司20181103078、20181101、20181102；吉林F公司160805、170101、190101；河南G公司190501、190502、190503。

 

2 方法和結(jié)果

 

2.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性

 

色譜柱：HP-INNOWAX毛細(xì)管柱(0.32 mm×30 m，0.25 μm)；檢測器：氫火焰檢測器(FID)；柱溫：140℃；進(jìn)樣口溫度：180 ℃；檢測器溫度：230 ℃；分流比為20∶1；進(jìn)樣量均為1 μL。理論塔板數(shù)：按內(nèi)標(biāo)物萘峰計(jì)算應(yīng)不低于5 000[6-9]。

 

2.2 溶液的制備

 

2.2.1 校正因子測定溶液

 

取萘、樟腦、薄荷腦、龍腦、異龍腦及水楊酸甲酯對照品適量，其中萘為內(nèi)標(biāo)，加乙酸乙酯制成每1 mL含各成分質(zhì)量濃度分別約為：萘1 mg·mL-1、樟腦1 mg·mL-1、薄荷腦2 mg·mL-1、龍腦1 mg·mL-1、異龍腦0.5 mg·mL-1、水楊酸甲酯1.5 mg·mL-1的混合對照品溶液，進(jìn)樣測定，計(jì)算校正因子。

 

2.2.2 供試品溶液

 

取樣量為210 cm2，去除橡膠膏背面的蓋襯，剪成長條狀或小方塊狀，置適宜的圓底燒瓶中，加水適量至沒過供試品，按揮發(fā)油測定法甲法(《中國藥典》2015年版通則2204)加熱提取3 h，接收溶劑為2mL甲苯，提取完成后甲苯液用3 mL乙酸乙酯稀釋，并加入適量無水硫酸除去水分，濾過，使用乙酸乙酯洗滌揮發(fā)油提取器并定容至裝有5 mL萘內(nèi)標(biāo)溶液(質(zhì)量濃度為5mg·mL-1)的25 mL量瓶中。進(jìn)樣測定，即得。

 

2.2.3 陰性樣品溶液

 

模擬傷濕祛痛膏生產(chǎn)工藝分別制備缺樟腦、薄荷腦、冰片、水楊酸甲酯的陰性樣品，及同時(shí)缺樟腦、薄荷腦、冰片和水楊酸甲酯的陰性樣品；在按照“2.2.2”項(xiàng)下方法制備陰性樣品溶液。

 

2.3 專屬性試驗(yàn)

 

分別取空白溶液(含甲苯的乙酸乙酯混合溶劑)、萘內(nèi)標(biāo)溶液、各陰性樣品溶液、混合對照品溶液及供試品溶液各1μL進(jìn)樣，結(jié)果表明甲苯、乙酸乙酯溶劑和陰性樣品均不干擾各成分的含量測定。表明本方法專屬性良好，詳見圖1。

 

2.4 精密度試驗(yàn)

 

精密吸取混合對照品溶液1 μL，質(zhì)量濃度分別為：樟腦1.0118 mg·mL-1、薄荷腦2.007 2 mg·mL-1、龍腦1.006 8 mg·mL-1、異龍腦0.501 3 mg·mL-1、水楊酸甲酯1.500 8 mg·mL-1；內(nèi)標(biāo)物萘1.000 2 mg·mL-1。重復(fù)進(jìn)樣6次，分別以各對照品的峰面積與內(nèi)標(biāo)物萘峰面積之比值計(jì)算RSD，分別為0.23%、0.08%、0.14%、0.08%，0.23%，表明儀器精密度良好。

 

2.5 檢測限與定量限

 

采用信號噪聲比法測定本實(shí)驗(yàn)的檢測限與定量限，其中檢測限為：樟腦0.30 ng、薄荷腦0.38 ng、龍腦0.70 ng、異龍腦0.58 ng、水楊酸甲酯1.73 ng。定量限為：樟腦1.26 ng、薄荷腦1.39 ng、龍腦1.56 ng、異龍腦1.50 ng、水楊酸甲酯3.05 ng。

 

2.6  線性關(guān)系考察

 

精密量取混合對照品溶液(質(zhì)量濃度分別為：樟腦2.9674 mg·mL-1，薄荷腦6.016 9 mg·mL-1，龍腦2.713 2 mg·mL-1，異龍腦1.808 8 mg·mL-1，水楊酸甲酯4.280 8 mg·mL-1)各0.5、1、2、3、4、6、8、10mL分別置10 mL量瓶中，加質(zhì)量濃度為1.000 2 mg·mL-1的萘內(nèi)標(biāo)溶液稀釋并定容，制成8種不同濃度的混合對照品溶液。進(jìn)樣測定，樟腦、薄荷腦、龍腦、異龍腦、水楊酸甲酯的回歸方程分別為：

 

Y＝0.808X-0.027 2  r＝0.9999

 

Y＝0.832 6X-0.042 6  r＝0.9999

 

Y＝0.848 4X-0.030 6  r＝0.9999

 

Y＝0.716 9X-0.018 5  r＝0.9998

 

Y＝0.531 2X-0.032 4  r＝0.9999

 

樟腦、薄荷腦、龍腦、異龍腦、水楊酸甲酯分別在0.148 4～2.967 4 μg、0.300 8～6.016 9 μg、0.135 7～2.713 2 μg、0.0904～1.808 8 μg、0.214 0～4.280 8 μg進(jìn)樣范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

 

 

1.樟腦(camphor)  2.薄荷腦(menthol)  3.異龍腦(isoborneol)  4.龍腦(borneol)  5.萘(naphthalene)  6.水楊酸甲酯(methyl salicylate)

圖1  甲苯、乙酸乙酯混合溶劑(A)、萘內(nèi)標(biāo)溶液(B)、缺樟腦陰性樣品溶液(C)、缺薄荷腦陰性樣品溶液(D)、缺冰片陰性樣品溶液(E)、缺水楊酸甲酯陰性樣品溶液(F)、缺樟腦、薄荷腦、冰片、水楊酸甲酯陰性樣品溶液(G)、混合對照溶液(H)、樣品溶液(I)氣相色譜圖

Fig.1  GC chromatograms of mixed solvent of toluene and ethyl acetate (A)，Naphthalene internal standard solution (B)， negative sample solution lack of camphor (C)， negative sample solution lack of menthol (D)，negative sample solution lack of borneol (E)， negative sample solution lack of methyl salicylate (F)， negative sample solution lack of camphor， menthol， borneol and methyl salicylate (G)，mixed control solution(H)， sample solution (I)

 

2.7 耐用性試驗(yàn)

 

穩(wěn)定性試驗(yàn)：精密吸取同一供試品溶液(G公司，批號190501)1 μL，分別在0、2、4、6、8、10、12 h依法測定，樟腦、薄荷腦、龍腦、異龍腦、水楊酸甲酯峰面積與內(nèi)標(biāo)物萘峰面積之比值的RSD分別為0.10%、0.11%、0.29%、0.14%、0.16%，結(jié)果表明，供試品溶液在12h內(nèi)基本穩(wěn)定。

 

不同商品規(guī)格的色譜柱：考察三根不同商品規(guī)格的色譜柱，測定同一批號(G公司，批號190501)樣品，結(jié)果見表1。表1結(jié)果表明本方法耐用性良好。

 

2.8 加樣回收實(shí)驗(yàn)

 

取已知含量的本品(G公司，批號：190501，樟腦含量0.117 6 mg·cm-2、薄荷腦含量0.251 9 mg·cm-2、龍腦含量0.111 3 mg·cm-2、異龍腦0.070 1 mg·cm-2、水楊酸甲酯0.170 3 mg·cm-2)105 cm2，量取9份，分別精密加入混合對照品溶液(質(zhì)量濃度分別為樟腦5.629 1 mg·mL-1、薄荷腦13.404 7 mg·mL-1、龍腦5.172 3 mg·mL-1、異龍腦3.347 8 mg·mL-1、水楊酸甲酯8.912 0 mg·mL-1)1.6、2、2.4mL各3份，按“2.6”項(xiàng)下方法制備加樣回收溶液。進(jìn)樣，計(jì)算回收率，結(jié)果見表2～6。

 

2.9 重現(xiàn)性

 

取樣品(G公司，批號190501)210cm2，分別量取6份，按照上述含量測定方法測定，測定結(jié)果的平均RSD值為1.67%。

 

2.10  樣品測定

 

按“2.2”項(xiàng)下的含量測定方法測定本品22 批傷濕祛痛膏含量，結(jié)果見表7。

 

3 討論

 

3.1 含量測定各成分限度的擬定

 

經(jīng)調(diào)研7家生產(chǎn)企業(yè)，收集到實(shí)際投料量及制成量，其中5家企業(yè)處方及制成量基本相同，B公司和E公司與其他企業(yè)處方相同但制成量差異較大，經(jīng)理論值計(jì)算后，E公司偏低，B公司偏高，其余5家基本一致，考慮到各企業(yè)制成量不完全統(tǒng)一、工藝水平也高低不等，包裝質(zhì)量亦參差不齊，以及所測成分均為易揮發(fā)藥物，建議本品含量限度按處方相同5家企業(yè)市售的15批平均測得含量的80%或平均理論值的80%擬定限度，也可以暫不擬定限度，待進(jìn)一步考察各企業(yè)工藝歷史沿革，統(tǒng)一處方工藝后再擬定限度。

 

 

3.2 提取時(shí)間和接收溶液的考察

 

本實(shí)驗(yàn)考察了使用揮發(fā)油提取器提取1、2、3、4、5h等不同提取時(shí)間各組分含量的異同，結(jié)果表明提取3 h后各組分含量不再增加，為最佳提取時(shí)間，故選擇3h作為提取時(shí)間。揮發(fā)油接收溶液考察了甲苯、乙酸乙酯、環(huán)己烷等溶劑，結(jié)果表明甲苯作為接收溶劑，含量測定穩(wěn)定性最好，故選用甲苯作為接收溶劑。

 

3.3 貼膏劑的取樣方式的討論

 

《中華人民共和國藥典》2020年版貼膏劑含量測定取樣方法有整張取樣和按面積取樣等兩種方式。按整張取樣的優(yōu)點(diǎn)在于方便快捷，由于貼膏劑規(guī)定了規(guī)格，如7 cm×10 cm，取兩張即140 cm2，實(shí)驗(yàn)時(shí)可直接進(jìn)行取樣，效率較高，但存在一些問題。在實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)，各生產(chǎn)企業(yè)并非嚴(yán)格按規(guī)格進(jìn)行切片，一般會稍大于相應(yīng)規(guī)格，如7 cm×10 cm規(guī)格的貼膏劑，在測量后實(shí)際為7.2 cm×10.3 cm，7.1 cm×10.2 cm等，由于貼膏劑的含量限度一般都規(guī)定為每100 cm2的含量，若仍按照整張取樣計(jì)算，會產(chǎn)生計(jì)算取樣量小于實(shí)際取樣量，造成含量測定結(jié)果偏高，按面積取樣則不存在上述問題，因此本實(shí)驗(yàn)采用按面積取樣。

 

4 小結(jié)

 

通過建立氣相法同時(shí)測定樟腦等5種揮發(fā)性成分的含量，擬定了相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)限度，從而完善并提高了傷濕祛痛膏質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，可以更有效地保證傷濕祛痛膏藥品的質(zhì)量與安全。

 

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《中國藥品標(biāo)準(zhǔn)》2021年第5期  第22巻

申二永1，金建聞2，李楊1

(1. 河南省食品藥品檢驗(yàn)所，國家藥品監(jiān)督管理局中藥材及飲片質(zhì)量控制重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，鄭州 450018；

2. 河南省食品藥品審評查驗(yàn)中心，鄭州 450018)

 

Investigation on the assay method of Shangshi Qutong Ointment

SHEN Eryong1，JIN Jianwen2， LI Yang1

(1. Henan Institute for Food and Drug Control， NMPA Key Laboratory for Quality Control of

Traditional Chinese Medicine and Decoction Pieces， Zhengzhou 450018，China；

 

2. Henan Food and Drug Evaluation and Inspection Center， Zhengzhou 450018，China)