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 雷公藤，別名黃藤根、斷腸草、旱禾花、黃藤木、黃藤草等，是傳統(tǒng)的中藥材，可用于治療類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、原發(fā)性腎小球腎病等免疫系統(tǒng)疾病。但是由于雷公藤中的主要有效成分亦為毒性成分，目前國內(nèi)外針對(duì)雷公藤中毒與毒性成分的研究主要集中在雷公藤藥材中各成分的檢測(cè)。常用的分析方法主要有比色法、高效液相色譜法。但上述方法用于雷公藤中毒者嘔吐物、血液、尿液等中毒樣品的測(cè)定則存在檢測(cè)時(shí)間長(zhǎng)、檢測(cè)靈敏度低等缺點(diǎn)。遼寧省疾病預(yù)防控制中心華正罡等針對(duì)雷公藤急性中毒者的嘔吐物，建立一種快速、準(zhǔn)確的超高效液相色譜– 串聯(lián)質(zhì)譜檢測(cè)方法。

主要儀器與試劑

     超高效液相色譜– 串聯(lián)質(zhì)譜儀：Acquity Xevo TQ 型，美國沃特世公司。

    高速冷凍離心機(jī)：Thermo ST16R 型，美國賽默飛世爾科技公司。

    漩渦混合器：Vortex-genie2 型，美國Scientificindustries 公司。

    分析天平：BS 110S 型，感量為0.1 mg，德國賽多利斯公司。

    雷公藤次堿、雷公藤晉堿、雷公藤甲素、雷公藤內(nèi)酯甲標(biāo)準(zhǔn)品：純度（質(zhì)量分?jǐn)?shù)）均不小于98%，批號(hào)分別為20113、20625、20209、20907，南通飛宇生物科技有限公司。

    雷公藤中毒者胃內(nèi)容物凍干粉樣品：簡(jiǎn)稱凍干粉樣品，編號(hào)為ZW 054，由中國疾病預(yù)防控制中心職業(yè)衛(wèi)生與中毒控制所提供。

    胃內(nèi)容物凍干粉陰性樣品：編號(hào)為ZW051，簡(jiǎn)稱凍干粉陰性樣品，由中國疾病預(yù)防控制中心職業(yè)衛(wèi)生與中毒控制所提供。

    乙腈、甲醇：均為色譜純，美國賽默飛世爾科技公司。

    甲酸銨、甲酸：均為優(yōu)級(jí)純，北京化工廠。

    實(shí)驗(yàn)用水為超純水。

儀器工作條件

1　色譜

    色譜柱：Waters ACQUITY UPLC BEH C18 柱（100 mm×2.1 mm，粒徑為1.7 μm，美國沃特世公司）；柱溫：40 ℃；樣品室溫度：4 ℃；流動(dòng)相：A 相

為乙腈；B 相為10 mmol／L 甲酸銨–0.1%甲酸溶液；洗脫方式：梯度洗脫；洗脫程序：初始A 相體積分?jǐn)?shù)為5%，0~3 min，A 相體積分?jǐn)?shù)由5% 逐漸上升至95% 并保持至第7 min，7.01 min 開始A 相體積分?jǐn)?shù)降回5% 并保持至第8 min ；流量：0.3 mL／min ；進(jìn)樣體積：10 μL。

2　串聯(lián)質(zhì)譜

    離子源：電噴霧離子源，正離子掃描模式；毛

細(xì)管電壓：2.64 kV ；離子源溫度：150 ℃；錐孔反吹

氣：氮?dú)?，純度（體積分?jǐn)?shù)）大于99.999%，流量為50

L／h ；脫溶劑氣：氮?dú)?，溫度?50 ℃，流量為650

L／h ；采集方式：多反應(yīng)監(jiān)測(cè)（MRM）模式。4 種毒

性化合物質(zhì)譜參數(shù)及保留時(shí)間見表2。

樣品處理

    準(zhǔn)確稱取0.1 g（精確至0.001 g）凍干粉樣品，置于15 mL 離心管中，加入10 mL 甲醇，超聲提取60 min，以10 000 r／min 轉(zhuǎn)速離心10 min，取上清液與水按體積比為1∶1 稀釋，過0.22 μm 濾膜后進(jìn)樣測(cè)定。

測(cè)定結(jié)果

    雷公藤次堿、雷公藤晉堿、雷公藤甲素、雷公藤內(nèi)酯甲在各自的質(zhì)量濃度范圍內(nèi)與色譜峰面積線性關(guān)系良好，線性相關(guān)系數(shù)均不小于0.998 0，檢出限分別為0.24、0.26、0.28、1.25 mg／kg。陰性樣品加標(biāo)平均回收率為83.7%～95.3%，測(cè)定結(jié)果的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為2.66%～5.71%（n=6）