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微生物的檢測(cè)、培養(yǎng)，我們?cè)偈煜げ贿^了。在針對(duì)某些細(xì)菌的檢測(cè)項(xiàng)目里，因?yàn)樵跇?biāo)樣中常常混有多種菌，我們通常需要針對(duì)某一目的菌進(jìn)行分離純化。通過分離純化，我們能夠良好地評(píng)估該標(biāo)樣的微生物指標(biāo)數(shù)據(jù)，常常用于污染情況鑒定、活性物質(zhì)檢測(cè)、產(chǎn)品質(zhì)量參數(shù)評(píng)估等。所以，了解微生物的分離純化是十分必要的！

含有一種以上的微生物培養(yǎng)物稱為混和培養(yǎng)物。如果在一個(gè)菌落中所有細(xì)胞均來(lái)自于一個(gè)親代細(xì)胞，那么這個(gè)菌落稱為純培養(yǎng)。

分離純化是指，從混雜微生物群體中獲得只含有某一種或某一株微生物的過程。純種分離的目的是將目的菌從混雜的微生物中分離出來(lái)，獲得純培養(yǎng)。

分離純化的方法主要有以下幾種：

01傾注平板法

首先把微生物懸液通過一系列稀釋，將稀釋后的樣品加入無(wú)菌培養(yǎng)基混合均勻。待凝固后倒置培養(yǎng)，單一細(xì)胞經(jīng)過多次增殖后形成一個(gè)菌落，取單個(gè)菌落制成懸液，重復(fù)上述步驟數(shù)次，便可得到純培養(yǎng)物。

02涂布平板法

涂布法接種是一種常用的接種方法，不僅可以用于計(jì)算活菌數(shù)，還可以利用其在平板表面生長(zhǎng)形成菌苔的特點(diǎn)用于檢測(cè)化學(xué)因素對(duì)微生物的抑殺效應(yīng)。

原理：將一定濃度，一定量的待分離菌液移到已凝固的培養(yǎng)基平板上，再用涂布棒快速地將其均勻涂布，使長(zhǎng)出單菌落而達(dá)到分離的目的。

03平板劃線法

最簡(jiǎn)單的分離微生物的方法是平板劃線法。用無(wú)菌的接種環(huán)取培養(yǎng)物少許在平板上進(jìn)行劃線。劃線的方法很多，常見的比較容易出現(xiàn)單個(gè)菌落的劃線方法有斜線法、曲線法、方格法、放射法、四格法等。

例如劃線法，將一個(gè)平板分成四個(gè)不同面積的小區(qū)進(jìn)行劃線，第一區(qū)（A區(qū)）面積最小，作為待分離菌的菌源區(qū)，第二和第三區(qū)（B、C區(qū)）是逐級(jí)稀釋的過渡區(qū)，第四區(qū)（D區(qū)）則是關(guān)鍵區(qū)，使該區(qū)出現(xiàn)大量的單菌落以供挑選純種用。為了得到較多的典型單菌落，平板上四區(qū)面積的分配應(yīng)是D＞C＞B＞A。當(dāng)接種環(huán)在培養(yǎng)基表面上往后移動(dòng)時(shí)，接種環(huán)上的菌液逐漸稀釋，最后在所劃的線上分散著單個(gè)細(xì)胞，經(jīng)培養(yǎng)，每一個(gè)細(xì)胞長(zhǎng)成一個(gè)菌落。

04富集培養(yǎng)法

指從微生物混合群開始，對(duì)特定種的數(shù)量比例不斷增高而引向純培養(yǎng)的一種培養(yǎng)方法。富集培養(yǎng)法的方法和原理非常簡(jiǎn)單。我們可以創(chuàng)造一些條件只讓所需的微生物生長(zhǎng)，在這些條件下，所需要的微生物能有效地與其他微生物進(jìn)行競(jìng)爭(zhēng)，在生長(zhǎng)能力方面遠(yuǎn)遠(yuǎn)超過其他微生物。如果要分離一些專性寄生菌，就必須把樣品接種到相應(yīng)敏感宿主細(xì)胞群體中，使其大量生長(zhǎng)。通過多次重復(fù)移種便可以得到純的寄生菌。

05厭氧法

在實(shí)驗(yàn)室中，為了分離某些厭氧菌，可以利用裝有原培養(yǎng)基的試管作為培養(yǎng)容器，把這支試管放在沸水浴中加熱數(shù)分鐘，以便逐出培養(yǎng)基中的溶解氧。然后快速冷卻，并進(jìn)行接種。接種后，加入無(wú)菌的石蠟于培養(yǎng)基表面，使培養(yǎng)基與空氣隔絕。

另一種方法是，在接種后，利用N2或CO2取代培養(yǎng)基中的氣體，然后在火焰上把試管口密封。有時(shí)為了更有效地分離某些厭氧菌，可以把所分離的樣品接種于培養(yǎng)基上，然后再把培養(yǎng)皿放在完全密封的厭氧培養(yǎng)裝置中。

06單細(xì)胞分離法

單細(xì)胞分離法是一種從待分離的材料中直接分離單個(gè)細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)獲得純培養(yǎng)的方法。該法在顯微鏡下操作，對(duì)于體積較大的微生物，可以用毛細(xì)管提取微生物個(gè)體；對(duì)較小的細(xì)胞或孢子，可以用顯微針、鉤、環(huán)等挑取以獲得單細(xì)胞；也可將適當(dāng)稀釋后的樣品制成小液滴，在顯微鏡下選取只含有一個(gè)細(xì)胞的液滴培養(yǎng)。

怎么樣？各種微生物的培養(yǎng)與分離的方法，你學(xué)會(huì)了嗎？在選擇純化培養(yǎng)時(shí)，我們需要根據(jù)微生物的特性從而選擇適宜培養(yǎng)的條件和環(huán)境，同時(shí)也要結(jié)合實(shí)驗(yàn)的成本及條件。