中文字幕一级黄色A级片|免费特级毛片。性欧美日本|偷拍亚洲欧美1级片|成人黄色中文小说网|A级片视频在线观看|老司机网址在线观看|免费一级无码激情黄所|欧美三级片区精品网站999|日韩av超碰日本青青草成人|一区二区亚洲AV婷婷

      干法快速柱層析技術(shù)綜合了快速柱層析的速度和分離效果，使用更便宜的TLC 級(jí)的硅膠，操作簡(jiǎn)單，不需要特殊的儀器。干法快速柱層析，使用減壓洗脫，避免了加壓洗脫時(shí)玻璃柱爆炸的危險(xiǎn)。另外，柱子是用預(yù)定量的溶劑洗脫，把溶劑流干直至再加洗脫劑。這些特性，使得干法快速柱層析技術(shù)特別適合梯度洗脫。事實(shí)上，這也是開發(fā)此類層析柱的首選方式。顧名思義，梯度洗脫使用的使極性逐漸增大的溶劑洗脫。開始時(shí)用非極性洗脫體系洗去弱極性成份，然后增大極性洗脫分離極性化合物，這可以節(jié)省大量時(shí)間，又不失好的分離效果。

        不要忘記，如果你允許空氣進(jìn)入色譜柱，這是唯一的實(shí)例。實(shí)際上，和所有的經(jīng)典色譜原則相比，這整個(gè)過程就像飛一樣，而且效果至少和標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)一樣好，同時(shí)成本也大大降低。它對(duì)分離最高至50 克的量大的樣品尤其有用。缺乏經(jīng)驗(yàn)的人不要嘗試這種柱子。這項(xiàng)技術(shù)，曾被本文作者使用，但其實(shí)已經(jīng)在很多實(shí)驗(yàn)室普遍使用很長(zhǎng)時(shí)間了。

1. 裝置

    需要的設(shè)備很簡(jiǎn)單，就是把減壓抽濾所用的圓柱形多孔漏斗，通過一個(gè)錐形插口轉(zhuǎn)換頭連接到一個(gè)圓底燒瓶上，另外側(cè)邊的一個(gè)插口連接到水泵（圖1）。要純化的樣品量決定了使用的漏斗的大小和洗脫液的接收體積。具體建議參見表1。

        如果你熟練掌握此法，一個(gè)砂芯玻璃漏斗和幾個(gè)50ml或100 ml的玻璃瓶也是一樣的，筆者長(zhǎng)期用此法過柱子，比combi flash來的都快，但是此法對(duì)溶劑極性敏感性要求較高，你要對(duì)自己的樣品的極性非常熟悉，對(duì)溶劑的洗脫效果也要非常熟悉，才能很好地使用此法。

2. 洗脫體系的選擇

    一般不管什么，先用最小的極性溶劑沖洗一二瓶溶劑，選擇的洗脫體系應(yīng)該是TLC 時(shí)目標(biāo)產(chǎn)物的Rf 值為0.5 左右的溶劑。雖然沒有特別不適合這種技術(shù)的溶劑，但己烷、乙醚、乙酸乙酯和甲醇的各種組合對(duì)于大多數(shù)的分離來說已經(jīng)足夠了。因?yàn)槭菧p壓條件，一些收集的溶劑會(huì)蒸發(fā)，可能會(huì)冷卻接液裝置，以至于大氣中的水份會(huì)在裝置上凝結(jié)。這不會(huì)影響分離效果，但如果柱分時(shí)間過長(zhǎng)，一些水分還是會(huì)進(jìn)到收集的洗脫液當(dāng)中。使用弱揮發(fā)性的庚烷代替石油醚可能會(huì)有所幫助。

3. 裝柱

    這種色譜柱用的是TLC 級(jí)的硅膠，不加石膏粘合劑。這比快速柱層析所用的硅膠要便宜，而且對(duì)各種干法柱來說，活性已足夠。對(duì)每種大小的漏斗所推薦使用的硅膠數(shù)量，足夠在頂部留下充分空間，用來在裝柱并抽實(shí)后加洗脫液。硅膠可以按表中推薦的量稱取，但更為簡(jiǎn)單的是，直接在漏斗中加滿硅膠，當(dāng)硅膠抽實(shí)后頂部留出的空間就可以用來添加溶劑。在抽實(shí)的過程中有這樣一種傾向，對(duì)大柱來說尤其如此，硅膠脫離漏斗邊緣或形成裂縫，這些在柱上可能看不見。為了有好的裝柱效果，用玻璃塞在表層尤其是邊緣用力研磨壓實(shí)。不用擔(dān)心柱表層的狀態(tài)，用刮勺在漏斗周圍反復(fù)的輕敲就很容易弄平。當(dāng)柱徹底壓實(shí)裝好后，用洗脫體系里小極性的溶劑對(duì)柱子預(yù)洗脫。如果柱子裝的好，溶劑前沿看起來會(huì)是不斷下行的直的水平線。保持硅膠表面覆有溶劑，直到溶劑進(jìn)入接收瓶中，然后可以讓硅膠抽干。記得檢查柱前柱后的任何異常。如果溶劑前沿不是水平的，把溶劑抽干，重新壓實(shí)，再次預(yù)洗脫。絕對(duì)不能用裝的不好的柱子進(jìn)行分離。壓實(shí)的硅膠表面足夠結(jié)實(shí)以加溶劑，所以不需要加保護(hù)的沙層。

4. 上樣和洗脫

     用最小量的預(yù)洗脫溶劑把樣品溶解，在柱底抽吸的情況下，均勻地將其加到硅膠表面。沖洗樣品溶解瓶，把洗液加到柱上，直到所有樣品全被轉(zhuǎn)移。如果樣品在預(yù)洗脫溶劑里溶解不好，將其溶于組合極性最小的洗脫劑里，可以迅速溶解。用上樣的溶劑，按照表里所推薦的溶液體積（對(duì)難分離的用更小量），開始梯度洗脫。讓柱子抽干，將第一部分接液轉(zhuǎn)移到試管或其它方便的容器中，清洗燒瓶和漏斗柄。當(dāng)柱子抽干時(shí)，準(zhǔn)備下一份洗脫液，遞加5%的極性。重復(fù)這樣的洗脫程序。持續(xù)這樣的梯度洗脫，直到用純的大極性的溶劑洗脫。如有需要，繼續(xù)這樣洗脫。當(dāng)目標(biāo)產(chǎn)物從柱中洗脫出來時(shí)，停止梯度洗脫，用同樣比例的溶劑再洗脫幾份，是很有利的。分離過程中，應(yīng)該用TLC 分析接收液。作為一個(gè)大致的指導(dǎo)原則，目標(biāo)產(chǎn)物從柱中洗脫出來的時(shí)間是，目標(biāo)產(chǎn)物在該洗脫溶劑里的TLC 的Rf 值為0.5。當(dāng)超過100 mg的樣品純化，目標(biāo)產(chǎn)物從柱中洗脫出來時(shí)，漏斗柄的下部會(huì)起泡沫。如果產(chǎn)物是固體，它可能會(huì)在漏斗柄或接收瓶上結(jié)晶，尤其是分離量大樣品時(shí)。要確保在兩份收液之間，徹底清洗接受瓶和漏斗柄，并檢查確保固體不會(huì)阻塞洗脫。典型的低程度的產(chǎn)物橫向擴(kuò)散帶，常常意味著純化合物的洗脫組分相對(duì)較少，減少了交叉污染的份數(shù)。如果粗樣中不含聚合物，樣品會(huì)很好回收。

5. 硅膠處理

    洗脫完成后，抽干硅膠，轉(zhuǎn)移到硅膠殘留柜中。通常翻轉(zhuǎn)柱子并敲打，所有的硅膠都會(huì)出來。要留心，不要把硅膠塵弄到實(shí)驗(yàn)室的空氣中。