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前記

 

最近筆者在復(fù)習(xí)FDA關(guān)于亞硝胺雜質(zhì)的有關(guān)法規(guī)，發(fā)現(xiàn)在2021年3月29日至30日FDA有過一個(gè)關(guān)于亞硝胺雜質(zhì)的研討會(huì)，由FDA的藥品審評(píng)和研究中心（CDER）組織全球的研究專家參與。相關(guān)內(nèi)容在FDA官網(wǎng)可以找到。在微信上搜索了一下，沒有找到相應(yīng)的中文文章或者內(nèi)容解讀，于是筆者對(duì)這兩天研討論會(huì)內(nèi)容仔細(xì)閱讀之后，轉(zhuǎn)譯中心內(nèi)容，以饗讀者。限于筆者水平有限，如有不足，請(qǐng)多指正。 

亞硝胺雜質(zhì)污染事件已經(jīng)過去近3年，但FDA和其他國際監(jiān)管機(jī)構(gòu)仍面臨許多挑戰(zhàn)。一是亞硝胺的形成來源廣泛分布于新鮮蔬菜、水果、煙熏和烤肉和魚中的環(huán)境中，在水中、空氣中，并且人體內(nèi)也有內(nèi)源性生成。因此，消除或減少藥物中的亞硝胺物質(zhì)面臨很大挑戰(zhàn)。消除藥物中的亞硝胺雜質(zhì)始于質(zhì)量控制。到目前為止，并不是所有藥物中亞硝胺雜質(zhì)產(chǎn)生的根本原因都已查明；新的根源不斷出現(xiàn)。穩(wěn)定性、輔料賦形劑和藥品儲(chǔ)存條件等因素也會(huì)影響亞硝胺的形成，從而阻礙亞硝胺雜質(zhì)的減少和控制措施。

另一關(guān)鍵問題是制藥從業(yè)人員需要開發(fā)和驗(yàn)證高靈度分析方法，以檢測(cè)藥物中低水平的亞硝胺。此外，在確定藥物中亞硝胺的安全性和致癌風(fēng)險(xiǎn)時(shí)，還要考慮到藥物短缺、疾病狀況和患者的人群數(shù)，以及消除亞硝胺雜質(zhì)污染所需要資源。癌癥風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估和亞硝胺可接受攝入量（AI）的確定非常復(fù)雜。亞硝胺屬于ICH M7關(guān)注隊(duì)列（CoC）中的化合物，這是一類高度致突變致癌物，需要嚴(yán)格控制其含量。癌癥風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估是基于整個(gè)壽命期限的暴露量，每10萬人中有1例癌癥病例的外推計(jì)算，這被認(rèn)為是可接受的保守風(fēng)險(xiǎn)控制水平。

由于它們的高度致突變致癌性質(zhì)，亞硝胺化合物在20世紀(jì)60年代已被廣泛研究。在嚙齒類動(dòng)物生物測(cè)試中測(cè)試了300種亞硝胺，發(fā)現(xiàn)90%以上的亞硝胺具有致癌作用。這類化合物誘導(dǎo)癌癥的作用機(jī)制目前尚不完全清楚，化合物結(jié)構(gòu)—活性關(guān)系有助于確定致癌性的結(jié)構(gòu)特性，亞硝胺在各種器官和組織中可引起腫瘤：例如，肝臟、肺、鼻腔、食道、胰腺、胃、膀胱、結(jié)腸、腎臟和中樞神經(jīng)系統(tǒng)。

通常，亞硝胺被生物活化成為活性中間體，這些活性中間體與生物細(xì)胞靶點(diǎn)相結(jié)合，并導(dǎo)致DNA損傷；這一作用過程在動(dòng)物和人類中基本相似。與需要代謝活化的亞硝胺不同，一些N-亞硝基化合物不需要生物活化，可直接與DNA結(jié)合并烷基化，從而導(dǎo)致突變，最終導(dǎo)致癌癥。作用機(jī)制不明確、化學(xué)成分復(fù)雜，缺乏可靠的致癌性數(shù)據(jù)，使得亞硝基類化合物的風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估和確定復(fù)雜化。

FDA提出七個(gè)問題，并由研討小組的專家成員討論。它們涵蓋藥品質(zhì)量制造和控制、亞硝胺的環(huán)境暴露、內(nèi)源性形成、藥代動(dòng)力學(xué)、反應(yīng)性、暴露的生物標(biāo)志物、定量結(jié)構(gòu)-活性關(guān)系、原料藥和制劑中的單亞硝胺和多亞硝胺、低于壽命（LTL）的方法和暴露持續(xù)時(shí)間、癌癥風(fēng)險(xiǎn)和風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估，以及表征藥物中亞硝胺雜質(zhì)存在風(fēng)險(xiǎn)的確證性研究差距分析。

 

圖1: 亞硝胺相關(guān)的事件和產(chǎn)品

 

Q1. Whatare the endogenous levels of nitrosamine formation in human and rodents? Onceformed, what is the rate/kinetics of elimination? What are the conversion ratesin the liver, circulation levels in blood, and normal variations? If this informationis not available, can it be determined experimentally?

問題1：人類和嚙齒類動(dòng)物體內(nèi)中內(nèi)源性生成的亞硝胺物質(zhì)形成的水平是多少？形成后，消除的速率/動(dòng)力學(xué)是什么？肝臟的轉(zhuǎn)化率、血液循環(huán)水平和正常變化水平是多少？如果這些信息不可獲取，可以通過實(shí)驗(yàn)確定嗎？

 

專家討論：

除了環(huán)境中有豐富的亞硝胺物質(zhì)外，亞硝胺也會(huì)在動(dòng)物體內(nèi)源性生成。為了計(jì)算這類化合物的風(fēng)險(xiǎn)，需確定亞硝胺內(nèi)源性生成和了解其在體內(nèi)分布的藥代動(dòng)力學(xué)。目前對(duì)亞硝胺的內(nèi)源性生成，尤其是NDMA的內(nèi)源性形成的認(rèn)識(shí)存在相當(dāng)大的差距。尚不清楚亞硝胺的內(nèi)源性生成是否超過、等于或小于藥物中檢測(cè)到的水平。專家小組成員強(qiáng)調(diào)確定內(nèi)源性生成對(duì)評(píng)估風(fēng)險(xiǎn)的重要性，并建議盡快開始實(shí)驗(yàn)工作。一些專家小組成員表示，無論內(nèi)源性接觸的風(fēng)險(xiǎn)如何，外源性亞硝胺都會(huì)帶來額外的風(fēng)險(xiǎn)。

亞硝異丙氨酸是一種未經(jīng)代謝且不致突變或致癌的亞硝胺。服用脯氨酸加亞硝酸鹽或硝酸鹽的受試者的尿中亞硝酸鹽的排泄量增加。同時(shí)服用不同濃度的前體、L-脯氨酸和亞硝酸鈉后，大鼠體內(nèi)形成亞硝異丙氨酸的劑量-反應(yīng)關(guān)系，結(jié)果表明，亞硝異丙氨酸形成量的對(duì)數(shù)與脯氨酸劑量乘積和亞硝酸鹽劑量平方的對(duì)數(shù)成正比。然而，關(guān)于許多反應(yīng)性致癌亞硝胺（例如NDMA和NDEA）的可靠數(shù)據(jù)很少，因?yàn)樗鼈兇x迅速，其代謝產(chǎn)物的分布和排泄尚不清楚。假設(shè)NDMA和NDEA是作為其前體（分別為二甲胺和二乙胺）內(nèi)源性生成的，它們與亞硝酸鹽和硝酸鹽一起存在于食品中。然而NDMA或NDEA代謝迅速，難以對(duì)其進(jìn)行定量評(píng)估。NDMA和許多其它亞硝胺主要由細(xì)胞色素P450 2E1代謝，由于存在其它的底物，該酶受到競(jìng)爭(zhēng)性抑制。因此，如改變組織器官對(duì)亞硝胺物質(zhì)的代謝、分布和排泄，要考慮多種因素和風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估。根據(jù)血液和尿液中NDMA的檢測(cè)，只能粗略估計(jì)NDMA的內(nèi)源性形成。

來自暴露于大量甲基化化合物的嚙齒類動(dòng)物的數(shù)據(jù)顯示，低劑量的NDMA是血液白細(xì)胞中O6-甲基鳥嘌呤的有效產(chǎn)生物質(zhì)?？紤]到人類接觸的甲基化劑，可以合理地得出結(jié)論，人體組織中的這些O6-甲基鳥嘌呤加合物主要是由NDMA引起的。在嚙齒類動(dòng)物和猴子中使用O6-甲基鳥嘌呤DNA甲基轉(zhuǎn)移酶消耗劑量的NDMA進(jìn)行的研究顯示，不同物種血液中加合物積累的劑量反應(yīng)曲線具有可比性（斜率在5倍以內(nèi)），而在大鼠、猴子和人類中，血液中O6-甲基鳥嘌呤的修復(fù)率相似。在大鼠慢性NDMA暴露期間，O6-甲基鳥嘌呤穩(wěn)態(tài)水平的劑量反應(yīng)是線性的，與人類血液DNA中發(fā)現(xiàn)的加合物水平相對(duì)應(yīng)的慢性暴露量為982μg/天（最大）或144μg/天（O6-甲基鳥嘌呤的平均背景水平）。

現(xiàn)實(shí)生活中“正常”食用食品和藥品或環(huán)境的外源性的亞硝胺物質(zhì)的暴露量也應(yīng)確定，以提供從內(nèi)源性生成的暴露量的評(píng)估角度。專家小組成員認(rèn)為，內(nèi)源性亞硝胺形成的暴露可能高于食物等外源性來源的暴露量。一般來說，在不同國家和文化背景下，每天從食物中接觸的劑量估計(jì)小于1μg。鑒于目前評(píng)估受亞硝胺污染藥物風(fēng)險(xiǎn)的緊迫性，確定亞硝胺內(nèi)源性形成是一個(gè)長(zhǎng)期目標(biāo)，應(yīng)考慮其他方法。例如，基于生理學(xué)的藥代動(dòng)力學(xué)建模、測(cè)量作為暴露生物標(biāo)志物的O6-甲基鳥嘌呤加合物，以及結(jié)合（Q）SAR進(jìn)行定量。

 

圖2：N-亞硝基化合物的代謝活化

 

Q2. Can nitrosamines be classified? If yes, what isthe basis of their classification? For example, could they be classified basedon:

• Carcinogenic potency?

• Chemical structure, e.g., aliphatic vs.cyclic?

• Chemical reactivity? Direct alkylating agentsvs. indirect (require metabolism)? Adduct formed, e.g., O6-, N7-methylation?

• Other?

• Why would you choose this basis ofclassification?

Ifclassification is not possible, is it feasible to calculate a single acceptableintake (AI) value for nitrosamines; i.e., a class-specific limit, using theexisting carcinogenicity study results of ≥110 nitrosamines (irrespective ofstudy quality)?

問題2：亞硝胺可以分類嗎？如可以，它們的分類依據(jù)是什么？例如，它們是否可以根據(jù)以下內(nèi)容進(jìn)行分類：

•致癌活性？

•化學(xué)結(jié)構(gòu)，例如脂肪族與環(huán)狀？

•化學(xué)反應(yīng)性？直接烷基化劑與間接烷基化劑（需要代謝）？形成加合物，例如O6-，N7甲基化？

•其他？

•為什么選擇這種分類基礎(chǔ)？

如果無法進(jìn)行分類，是否可以計(jì)算亞硝胺的單一可接受攝入量（AI）值；比如特定類別的限度，使用現(xiàn)有110多個(gè)亞硝胺化合物的致癌研究結(jié)果（不考慮研究質(zhì)量）？

 

專家討論：

超過90%的已知亞硝胺化合物是致癌物質(zhì)，其活性跨越幾個(gè)數(shù)量級(jí)。它們通過不同的給藥途徑（在某些情況下，相同的腫瘤通過不同的途徑）在40種動(dòng)物的多個(gè)器官中導(dǎo)致癌癥。同樣的亞硝胺在不同的動(dòng)物物種中也會(huì)引起不同的腫瘤，并且在短時(shí)間（包括單次劑量）和長(zhǎng)時(shí)間的暴露后，亞硝胺的潛伏期也不同，這種多樣性阻礙了亞硝胺化合物的分類。

專家小組成員表示，亞硝胺可以分類，但首先需要解決幾個(gè)研究上的空白。基于現(xiàn)有的數(shù)據(jù)，一個(gè)簡(jiǎn)單的分類方式是可將亞硝胺分為致癌物和非致癌物?；谥掳┗钚缘姆诸惛鼮閺?fù)雜，一般使用半數(shù)致腫瘤劑量（TD50）進(jìn)行分類，它來自于黃金致癌性活性數(shù)據(jù)庫（CPDB）的數(shù)值，專家認(rèn)為，在缺乏其它替代方式的情況下，這種方法最為合適。

或者分類也可基于這類化合物的結(jié)構(gòu)。一些亞硝胺沒有致癌性，例如含有叔丁基、亞硝化氨基酸或支鏈的亞硝胺。此外，分類可以基于質(zhì)子化的程度（pKb值），質(zhì)子化會(huì)降低化合物的生物利用度，從而降低生物活性。此外，亞硝胺可根據(jù)其化學(xué)反應(yīng)性分為直接和間接烷基化亞硝基化合物。例如，亞硝基脲是直接烷基化劑，不需要代謝活化。

基于基準(zhǔn)劑量-下限（BMDL），例如1%或5%，以及安全邊際作為分類依據(jù)進(jìn)行了討論。BMDL使用劑量反應(yīng)信息，TD50使用單劑量估計(jì)來推斷給定的風(fēng)險(xiǎn)水平。專家成員認(rèn)為，BMDL通常是首選方法。然對(duì)于亞硝胺，TD50是最佳的致癌風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估方式。基于TD50值的SAR建模，結(jié)合專家知識(shí)，并根據(jù)需要補(bǔ)充經(jīng)驗(yàn)數(shù)據(jù)，顯示分類的前景。在專家知識(shí)評(píng)估中必須考慮幾個(gè)參數(shù)，例如，立體電子因素及其對(duì)α-羥基化速率、中間重氮離子半衰期和碳離子反應(yīng)性的影響。其中一些參數(shù)是基于預(yù)測(cè)，降低了對(duì)模型結(jié)果的信心。

例如，使用有效的亞硝胺AI或基于模型和1:100000癌癥風(fēng)險(xiǎn)的評(píng)估計(jì)算，根據(jù)Lhasa/Leadscope對(duì)TD50值的重新評(píng)估，歐洲藥品管理局（EMA）對(duì)NDEA采用了18ng/天的限度要求。18ng/天和26.5ng/天的差異很小。亞硝胺可根據(jù)TD50的范圍進(jìn)行分類（例如，<1、1-10和10-100 mg/kg）；超過100 mg/kg的化合物可能會(huì)被舍棄，因?yàn)槠洳辉谒幬镂廴镜奈ｋU(xiǎn)范圍內(nèi)。TD50的計(jì)算也存在缺陷，因?yàn)檠芯康脑O(shè)計(jì)和暴露量持續(xù)時(shí)間不一致，涉及的動(dòng)物數(shù)量少，或劑量少于最佳劑量。

目前對(duì)亞硝胺進(jìn)行分類是困難的，因?yàn)槿狈Ρ匾闹С中詳?shù)據(jù)。例如人類的N-亞硝化反應(yīng)性、DNA加合物的形成、與DNA的結(jié)合、ADME以及與其它動(dòng)物的比較。這些可以通過比較亞硝胺在嚙齒類動(dòng)物的癌癥靶器官和非靶器官中誘導(dǎo)的O6烷基化或其他致突變DNA損傷與相應(yīng)的人體組織/細(xì)胞中的損傷來測(cè)試。這種方法可以使用替代生物標(biāo)記物，報(bào)告相關(guān)的生物轉(zhuǎn)化步驟，如血紅蛋白的烷基化作為長(zhǎng)期生物標(biāo)記物（平均暴露3-4個(gè)月），或谷胱甘肽的烷基化，隨后在尿液中排泄巰基尿酸作為短期生物標(biāo)記物。

通過Ames試驗(yàn)進(jìn)行致突變性測(cè)試是確定化合物潛在致癌性的第一步。然而，亞硝胺化合物之間的誘變活性之間相差四到五個(gè)數(shù)量級(jí)，與類似的致癌活性不相關(guān)。例如，NDMA和NDEA的細(xì)菌致突變性相似，但后者是一種更強(qiáng)致癌物。一個(gè)可靠的風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估是需要了解其致癌機(jī)制，目前尚不能完全做到。并不是所有亞硝胺都能引起O6鳥嘌呤甲基化。如果一種化學(xué)物質(zhì)與DNA堿基的氧形成加合物，如O6-甲基鳥嘌呤，它很可能是一種有效的致癌物。DNA加合物的形成或DNA損傷的誘導(dǎo)可被用作致癌活性（或風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估）的標(biāo)記物。

因此，一些亞硝胺化合物可能無法歸類。在獲得實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)之前，根據(jù)化合物的TD50值以及專家對(duì)其代謝和與DNA反應(yīng)性的判斷來評(píng)估這些化合物。亞硝胺的另一個(gè)重要方面是它們的反應(yīng)性。關(guān)于反應(yīng)性和致癌活性之間的相關(guān)性，目前幾乎沒有數(shù)據(jù)。然而反應(yīng)性可以使用靈敏和定量的方法進(jìn)行測(cè)量，例如，高分辨率質(zhì)譜法。另一種分類方法是貝葉斯概率建模，其中當(dāng)前數(shù)據(jù)與SARs和生物標(biāo)志物或代謝數(shù)據(jù)相結(jié)合，以預(yù)測(cè)概率。另一種是類似于ICH M7中使用的毒理學(xué)關(guān)注閾值方式，但特定于亞硝胺，亞硝胺在基于TTC的關(guān)注隊(duì)列中，被排除在這類分類方式之外。有數(shù)據(jù)顯示，亞硝基化合物會(huì)導(dǎo)致胎盤癌變，這是接觸亞硝胺污染藥物的孕婦的一個(gè)擔(dān)憂。同樣未知的是CYP450和其他參與生物轉(zhuǎn)化的酶缺乏個(gè)體的風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估數(shù)據(jù)。

總之，如果不了解亞硝胺在人體內(nèi)的代謝、代謝酶的效率（速率、組織和血液中的含量）、人體DNA修復(fù)能力、致癌的作用機(jī)制、反應(yīng)性水平、穩(wěn)定性和DNA結(jié)合，就不可能對(duì)亞硝胺進(jìn)行可靠的分類。目前所有這些參數(shù)的數(shù)據(jù)都缺乏或者不足，在這種情況下，亞硝胺可以通過相對(duì)不精確的基于結(jié)構(gòu)的建模進(jìn)行分類。

 

圖3: 胃腸道中硝酸鹽循環(huán)圖

 

Q3. The carcinogenic potential of nitrosamines isdose and duration dependent:

• Is there an in vivo exposure level fornitrosamines to define low vs. high risk for carcinogenicity? Is it appropriateto calculate a no observed effect level (NOEL) dose for carcinogenicity? Whatare the criteria to do so (Ames negative, in vivo mutation assay negative,other)?

• Can LTL approach as described in ICH M7 beused to determine the AI of a nitrosamine if a drug is indicated for a shortduration of use?

問題3：亞硝胺的致癌性取決于劑量和持續(xù)時(shí)間：

•是否可用體內(nèi)暴露量水平來定義亞硝胺致癌性的低風(fēng)險(xiǎn)與高風(fēng)險(xiǎn)？計(jì)算無觀察效應(yīng)水平（NOEL）的致癌劑量是否合適？這樣計(jì)算的標(biāo)準(zhǔn)是什么（Ames陰性、體內(nèi)突變?cè)囼?yàn)陰性、其他）？

•如果一種藥物只可能短期被使用，ICH M7中描述的低于預(yù)期壽命（LTL）的方法能否用于確定亞硝胺的可接受劑量（AI）？

 

專家討論：

研究表明，劑量—響應(yīng)到轉(zhuǎn)變?yōu)闊o毒性，亞硝胺物質(zhì)表現(xiàn)出逐漸的變化。在低劑量下呈曲線劑量反應(yīng)和S形曲線，重要的是要確定藥物劑量率，即兩次劑量之間的間隔，以及它如何影響DNA修復(fù)。早期研究表明，癌癥發(fā)病率與年齡無關(guān)。但事實(shí)上，當(dāng)對(duì)不同預(yù)期壽命的動(dòng)物給予相同劑量的NDEA時(shí)，所有動(dòng)物都以相同的速度和時(shí)間發(fā)生腫瘤。LTL方法（ICH M7）對(duì)亞硝胺化合物適用性的問題包括模型從長(zhǎng)持續(xù)時(shí)間到短持續(xù)時(shí)間外推的可靠性、模型敏感性以及劑量-反應(yīng)曲線的形狀（非線性與閾值）。這些都是討論LTL時(shí)要考慮的重要問題。專家成員認(rèn)為使用NOEL計(jì)算亞硝胺的限度是不合適的，它不能用于計(jì)算致突變并致癌的雜質(zhì)限度水平。

參考Peto大鼠生物測(cè)定法（大于4000只大鼠），其中低劑量下的劑量-反應(yīng)曲線呈線性，沒有閾值。DNA加合物的水平支持了這種線性。因此，癌癥生物測(cè)定和加合物形成結(jié)果產(chǎn)生了線性劑量反應(yīng)，沒有得到閾值的證據(jù)，因此未確定NOEL。這些發(fā)現(xiàn)是在嚙齒類動(dòng)物身上獲得的，目前尚不清楚這種模式是否適用于人類。

化合物Ames試驗(yàn)陰性后應(yīng)進(jìn)行體內(nèi)致突變性試驗(yàn)，單一的體外突變?cè)囼?yàn)不足性評(píng)估亞硝胺化合物的致癌性。體內(nèi)突變?cè)囼?yàn)雖不能預(yù)測(cè)體內(nèi)癌癥的可能性，但更具生理上相關(guān)性。此外，暴露水平的持續(xù)時(shí)間和劑量也很重要。DNA加合物劑量反應(yīng)的線性可能會(huì)，也可能不會(huì)誘發(fā)突變。突變誘導(dǎo)需要幾個(gè)步驟，其中一些步驟是有毒的（例如細(xì)胞死亡），而另一些步驟則進(jìn)行突變。發(fā)生突變和發(fā)生癌癥之間也有幾個(gè)步驟，任何一個(gè)步驟的失敗都會(huì)阻止癌癥的發(fā)生。因此，僅DNA加合物的形成不足以證實(shí)致突變或致癌癥。大多數(shù)亞硝胺經(jīng)標(biāo)準(zhǔn)Ames試驗(yàn)呈陽性，但在某些情況下，陽性率取決于方案，NDMA在大鼠S9中呈陰性，但在倉鼠S9中呈陽性。此外，大鼠、小鼠和倉鼠S9的化學(xué)反應(yīng)也不同，也沒有使用人類肝臟S9的此類數(shù)據(jù)。

如果亞硝胺通過標(biāo)準(zhǔn)或優(yōu)化（倉鼠S9，30%S9）的Ames試驗(yàn)呈陰性，則必須進(jìn)行體內(nèi)基因突變?cè)囼?yàn)和基于專家知識(shí)的評(píng)估，以確定亞硝胺化合物的中間亞硝化、反應(yīng)性和穩(wěn)定性。加上支持性證據(jù)，如預(yù)期（來自SAR）的吸收、分布、代謝和排泄（ADME）的行為（在尿液中排泄的亞硝化氨基酸），才能用來支持非致突變亞硝胺不太可能致癌的前提。

另一個(gè)問題是什么程度的亞硝胺暴露水平可以降低癌癥風(fēng)險(xiǎn)？這取決于具體的亞硝胺物質(zhì)。當(dāng)然，對(duì)于NDMA或NDEA，毫克水平的暴露是不可接受的，但對(duì)于非代謝性、非致突變性和非致癌性的硝基異丙氨酸，毫克量是可以接受的。因此，必須具體案例具體分析。

普遍認(rèn)為L(zhǎng)TL方法可適用于計(jì)算亞硝胺作為短期使用藥物中的限度水平。致癌是累積劑量和DNA損傷的函數(shù)；然而其他因素（如細(xì)胞增殖、凋亡、代謝和修復(fù)）也與此有關(guān)。對(duì)于DNA加合物的形成，劑量反應(yīng)在很大范圍內(nèi)是線性的，因此，短時(shí)間的高暴露與長(zhǎng)時(shí)間的低暴露具有相當(dāng)?shù)娘L(fēng)險(xiǎn)，因?yàn)檫@兩者與DNA損傷相關(guān)的整體壽命暴露水平是相同的。1:100000的癌癥風(fēng)險(xiǎn)是保守的，短期內(nèi)風(fēng)險(xiǎn)的輕微增加是可以接受的。

然而，對(duì)于短時(shí)間內(nèi)的高暴露量，與致癌有關(guān)的其他因素（增殖、代謝輔助因子、DNA加合物）的劑量反應(yīng)尚不清楚。因此，對(duì)于亞硝胺而言，LTL適用性的答案并不像短期高暴露的效果與長(zhǎng)期低暴露的效果相似那樣簡(jiǎn)單。在短時(shí)間內(nèi)暴露于高劑量亞硝胺時(shí)，必須考慮DNA修復(fù)能力。

如上所述，專家提醒兒童使用受亞硝胺污染的藥物，并建議納入安全因子（SFs）。ICH M7不包括SFs，F(xiàn)DA食品和應(yīng)用營養(yǎng)中心（CFSAN）也沒有調(diào)整更長(zhǎng)的壽命。后者使用模型從飲食習(xí)慣調(diào)查中估計(jì)特定食物的消費(fèi)量。美國環(huán)境保護(hù)署（EPA）不評(píng)估水果中的致癌雜質(zhì)，但使用SFs來確定食品中農(nóng)藥的限量。在短期癌癥研究中，當(dāng)短時(shí)間給藥時(shí)，新生小鼠的反應(yīng)與大鼠不同。這是在兒童藥物中使用LTL評(píng)估亞硝胺雜質(zhì)應(yīng)注意的事項(xiàng)。

 

Q4. Howwould the risk assessment change when multiple nitrosamines are present in adrug product? What are the key variables to consider when conducting such riskassessments? (nonmutagenic carcinogen + mutagenic carcinogen; nonmutageniccarcinogen + weakly mutagenic carcinogen; multiple mutagenic carcinogens).

 

圖4: 藥物中常見7種亞硝胺雜質(zhì)的可按受限度水平

 

問題4：當(dāng)一種藥品中含有多種亞硝胺時(shí)，風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估會(huì)發(fā)生怎樣的變化？在進(jìn)行這種風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估時(shí)，需要考慮哪些關(guān)鍵變量？（非致突變致癌物+致突變致癌物；非致突變致癌物+弱致突變致癌物；多重致突變致癌物）。

 

專家討論：

自污染事件報(bào)告以來的兩年半時(shí)間里，多個(gè)亞硝胺已被確定為單一原料藥和制劑中的雜質(zhì)。目前尚不清楚藥代和DNA加合物修復(fù)是否受到影響，考慮到其它亞硝胺來源的暴露水平，以及它們的影響是加和還是協(xié)同的，多種亞硝胺在一起具有類似的代謝活化和作用機(jī)制、效力和反應(yīng)性，目前這些機(jī)制都不為人所知。如有足夠的數(shù)據(jù)（結(jié)構(gòu)相似性和差異性）支持（Q）SAR預(yù)測(cè)，則可以比較這些參數(shù)，并對(duì)類似亞硝胺的數(shù)據(jù)進(jìn)行分組。

具有相同作用機(jī)制的亞硝胺可能具有不同的活性效力；在這種情況下，向高活性亞硝胺中添加低活性亞硝胺的影響尚不清楚。專家成員討論了累積風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估在亞硝胺中的應(yīng)用。歐洲食品和安全管理局（EFSA）對(duì)農(nóng)藥殘留進(jìn)行了大量研究。例如，在混合物中，是否存在致突變或非致突變化學(xué)物質(zhì)無關(guān)緊要。如果其中一種化學(xué)物質(zhì)是致癌物質(zhì)，則該信息將可用于計(jì)算可接受水平（AI）的信息，即風(fēng)險(xiǎn)將是相加的，或者使用最有效的亞硝胺數(shù)據(jù)來計(jì)算AI。亞硝胺的混合物會(huì)導(dǎo)致酶激活和修復(fù)的競(jìng)爭(zhēng)，這不是低分子量亞硝胺的問題，因此在這種情況下，加和性效應(yīng)假設(shè)可能不合適。

專家小組重申需要關(guān)注亞硝胺的外源性和內(nèi)源性形成的最新信息。這些信息對(duì)于風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估和可接受水平的準(zhǔn)確計(jì)算至關(guān)重要。然而，大多數(shù)可用數(shù)據(jù)都是20-50年前的數(shù)據(jù)，此后發(fā)生了很大變化，包括飲食習(xí)慣、暴露和分析方法。與食物中的外源性接觸相比，藥物中作為雜質(zhì)的亞硝胺水平可能微乎其微，與內(nèi)源性水平相比更是如此。然而，這一估計(jì)是基于舊數(shù)據(jù)，因此可能不準(zhǔn)確。相比之下，有關(guān)食品中亞硝胺的數(shù)據(jù)更為及時(shí)，食品行業(yè)在過去幾十年中取得了很大進(jìn)步。

最近關(guān)于食品中硝酸鹽、亞硝酸鹽和亞硝胺含量的研究報(bào)告了極少量的硝酸鹽、亞硝酸鹽和亞硝胺；亞硝胺為0.2-0.4μg/天，全球范圍內(nèi)小于1μg/天。專家成員強(qiáng)調(diào)通過良好生產(chǎn)規(guī)范（GMP）進(jìn)行質(zhì)量控制，并了解原料藥和制劑中每種化學(xué)物質(zhì)的化學(xué)成分，以消除或減少藥物中的亞硝胺。

專家討論了幾種用于暴露水平測(cè)試的生物標(biāo)志物，可用于風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估，包括DNA加合物、MGMT和代謝建模。專家成員認(rèn)為DNA加合物是最佳的評(píng)估模型，因?yàn)槟壳暗姆治黾夹g(shù)（例如，高分辨率質(zhì)譜）的高度敏感和可靠，許多以前的問題現(xiàn)在都可以解決了。然而，僅使用DNA加合物作為亞硝胺暴露量水平測(cè)試的生物標(biāo)記物是不合適的，還需要了解亞硝胺的作用機(jī)制。DNA損傷對(duì)亞硝胺致癌性至關(guān)重要，而O6甲基化是NDMA的相關(guān)加合物。DNA甲基化作為一種致癌機(jī)制已被廣泛研究。然而并不是所有的亞硝胺都會(huì)發(fā)生甲基化；因此，O6甲基化不是唯一的作用機(jī)制位點(diǎn)，其他位點(diǎn)（如O4、N7）和其他機(jī)制也應(yīng)研究。

因?yàn)槭澄锖蛢?nèi)源性亞硝胺的暴露水平，以及加合物的形成，人們對(duì)亞硝胺的DNA加合物的定量研究表示擔(dān)憂。加合物的分離很重要，已完成和正在進(jìn)行的人體研究測(cè)量了服用受亞硝胺或其他來源污染的藥物后尿液中的總亞硝胺，結(jié)果顯示NDMA水平非常高，進(jìn)一步調(diào)查表明，分析方法存在缺陷，說明一種方法并不適用于所有物質(zhì)的測(cè)試。

 

Q5. Shouldthe regulatory limits for nitrosamines listed for food and water or, amountformed endogenously, be considered in determining AI of nitrosamines in drugs?

問題5：在確定藥物中亞硝胺的可接受水平時(shí)，是否應(yīng)考慮食品和水中所列亞硝胺的監(jiān)管限度，或內(nèi)源性形成的亞硝胺水平量？

 

專家討論：

患者服用藥物治療疾病，產(chǎn)生預(yù)期受益。在多數(shù)情況下，這不是一個(gè)個(gè)人的選擇，而是一種治療方案。美國公眾希望他們的藥物是安全的。然而人們可以選擇吃什么和喝什么。據(jù)之前的討論，相比外源性攝入，亞硝胺及其前體的內(nèi)源性形成可能是其暴露水平的重要來源。除了亞硝胺，為了估算總飲食中的攝入量，硝酸鹽和亞硝酸鹽攝入量的計(jì)算至關(guān)重要。小組成員認(rèn)為，在亞硝胺風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估和可接受水平測(cè)定中，應(yīng)考慮所有來源的攝入量。專家再次強(qiáng)調(diào)了準(zhǔn)確評(píng)估亞硝胺內(nèi)源性形成的必要性。如果數(shù)據(jù)顯示內(nèi)源性水平含量高出幾個(gè)數(shù)量級(jí)，那么從數(shù)值風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估的角度計(jì)算可按受水平并不困難。與內(nèi)源性暴露水平不同，外源性暴露有很多新舊信息，亞硝胺的攝入量可能與0.2–0.5μg/天和<1μg/天相似。

此外，亞硝胺內(nèi)源性形成的測(cè)定非常重，許多因素如飲食習(xí)慣和整體健康（炎癥、感染）都起到了作用。如果來自除藥物污染以外的所有來源的接觸量都很大，那么藥物中存在的少量亞硝胺的健康風(fēng)險(xiǎn)就變得微不足道。如果這些來源被認(rèn)為是背景，尤其是內(nèi)源性形成，無論是大的還是小的，它們都應(yīng)該被認(rèn)為是對(duì)普通人群背景癌癥風(fēng)險(xiǎn)的貢獻(xiàn)。例如，根據(jù)Kyrtopoulos博士的數(shù)據(jù)，144μg/天的平均內(nèi)源性形成量將轉(zhuǎn)化為NDMA約1%的癌癥風(fēng)險(xiǎn)作為背景發(fā)病率（人類終生癌癥總發(fā)病率為30–40%）。傳統(tǒng)的和M7癌癥風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估是基于1:100000，這是普通人群癌癥風(fēng)險(xiǎn)的增量，即忽略背景發(fā)病率。如果內(nèi)源性暴露被高估（即不超過100μg/天），那么藥物污染的增量暴露就變得更加顯著，因此在藥物中亞硝胺的風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估或可接受水平，不應(yīng)考慮來自其他來源的接觸。

有人支持僅基于亞硝胺在藥物中的存在進(jìn)行亞硝胺增量風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估。這是因?yàn)閮?nèi)源性生成的亞硝胺可能致癌。30–40%的自發(fā)腫瘤負(fù)荷可能是由于內(nèi)源性形成的亞硝胺。如果這樣，就沒有準(zhǔn)確確定亞硝胺污染藥物帶來的額外癌癥風(fēng)險(xiǎn)的基線。然而，基于TD50的風(fēng)險(xiǎn)計(jì)算是評(píng)估內(nèi)源性和外源性暴露的最佳方法。

專家成員表示，亞硝胺的結(jié)構(gòu)應(yīng)包括在風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估中。多數(shù)可用數(shù)據(jù)都是關(guān)于NDMA和NDEA的，當(dāng)藥物中其它亞硝胺已被確定為污染物時(shí)，認(rèn)為所有亞硝胺的風(fēng)險(xiǎn)水平是相同的并不合適，因?yàn)樗鼈兊纳镄?yīng)可能不同，因此應(yīng)采用正確的化學(xué)方法避免接觸此類亞硝胺。

有人就舊數(shù)據(jù)是否可用于確定某些亞硝胺的內(nèi)源性形成，并根據(jù)當(dāng)前的飲食攝入信息進(jìn)行推斷發(fā)表了評(píng)論。例如，人們對(duì)亞硝基異丙氨酸的內(nèi)源性形成進(jìn)行了大量研究，亞硝基異丙氨酸未經(jīng)代謝，排泄時(shí)未發(fā)生變化。當(dāng)人們服用硝酸鹽（400毫克）和脯氨酸（500毫克）時(shí)，尿中亞硝基異丙氨酸的生成量為納摩爾。這一發(fā)現(xiàn)與已有20年歷史的幾項(xiàng)關(guān)于亞硝異丙氨酸的研究相似。

專家小組成員建議，未來的流行病學(xué)研究應(yīng)包括亞硝胺前體含量豐富和缺乏的飲食。然而，集體暴露水平很難被忽視，有報(bào)告稱，亞硝胺的單一最高來源是煙熏肉、煙熏魚和烤肉，它們還富含多環(huán)芳烴和其他致癌物。因此，在流行病學(xué)研究中應(yīng)考慮其他來源。然而亞硝胺水平的數(shù)值變化不到一個(gè)數(shù)量級(jí)，從而強(qiáng)調(diào)了使用外源性暴露量進(jìn)行風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估的可靠性。

 

圖5：啤酒中麥芽胺與亞硝基反應(yīng)形成亞硝胺的過程

 

Q6. In theabsence of data and based on identified differences in NA chemistries andreactivities, can read-across for structural similarity to related compounds beused for NAs? What are the key parameters to consider when conducting (Q)SARassessments for NAs?

問題6。在缺乏數(shù)據(jù)的情況下，根據(jù)已確定的亞硝胺化學(xué)性和反應(yīng)性的差異，相關(guān)化合物的結(jié)構(gòu)相似可讀性可用于亞硝胺嗎？當(dāng)對(duì)亞硝胺進(jìn)行構(gòu)效關(guān)系評(píng)估時(shí)，需要考慮哪些關(guān)鍵參數(shù)？

 

專家討論：

化學(xué)結(jié)構(gòu)相似性的計(jì)算機(jī)模擬和預(yù)測(cè)已經(jīng)取得了很大進(jìn)展。由于亞硝胺在體外和體內(nèi)行為的多樣性，對(duì)這類化合物致突變性和致癌性的構(gòu)效關(guān)系預(yù)測(cè)的可靠性提出了質(zhì)疑。一般來說，計(jì)算機(jī)方法的優(yōu)勢(shì)，尤其是構(gòu)效關(guān)系的建模，是快速和廉價(jià)并且不使用動(dòng)物。然而這是一種推理和預(yù)測(cè)，其確定性不如實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)，需要深入的專業(yè)知識(shí)來進(jìn)行解讀。

首先，與其他化合物相比，亞硝胺的致突變性和致癌性已有很多數(shù)據(jù)。在美國EPA 化合物毒理數(shù)據(jù)庫和其他資源（如ChEMBL和PubChem）中，可以找到超過140種亞硝胺的毒性數(shù)據(jù)。這些信息是否采用有用的格式，即是否可以輕松檢索和使用，需要進(jìn)一步考慮。

第二，分子相似性，這是一個(gè)非常主觀的概念。監(jiān)管機(jī)構(gòu)（EPA、歐洲食品安全局、歐洲化學(xué)品管理局和經(jīng)濟(jì)合作與發(fā)展組織）已經(jīng)發(fā)布了這方面的指南。對(duì)于亞硝胺，需要進(jìn)行亞分類以實(shí)現(xiàn)區(qū)分，這需要了解它們的反應(yīng)性和化學(xué)性質(zhì)。這些知識(shí)可以記錄為結(jié)構(gòu)和效力警示。此類警示基于鏈長(zhǎng)、亞硝胺官能團(tuán)周圍的α/β取代以及吸電子基團(tuán)的存在。

第三，通過可讀等方法來證明預(yù)測(cè)可接受性。在某些情況下，可能需要實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)來支持結(jié)果。需要更多的證據(jù)來解讀陰性無毒或低毒化合物，這與Ames試驗(yàn)的陰性結(jié)果相似，但人們更容易接受對(duì)陽性結(jié)果的解讀預(yù)測(cè)。

構(gòu)效關(guān)系預(yù)測(cè)模型是基于分子結(jié)構(gòu)描述的物理化學(xué)性質(zhì)的定量預(yù)測(cè)。對(duì)于亞硝胺，應(yīng)使用CPDB的致突變性數(shù)據(jù)，以亞硝胺為組建立構(gòu)效關(guān)系預(yù)測(cè)模型。這些預(yù)測(cè)需要對(duì)反應(yīng)性有很好的理解，最終模型應(yīng)該與作用機(jī)制相關(guān)。亞硝胺的情況并非如此，因?yàn)橛写罅筷P(guān)于高活性亞硝胺的數(shù)據(jù)，但關(guān)于低活性亞硝胺的數(shù)據(jù)很少；然而，有幾種方法可以解決這個(gè)問題。辛醇-水分配系數(shù)（logp）的對(duì)數(shù)與TD50之間沒有相關(guān)性，因此需要其他描述符，如反應(yīng)性活性。

一位與會(huì)者詢問，當(dāng)從一種亞硝胺推斷到另一種亞硝胺時(shí)，是否應(yīng)考慮分子量，因?yàn)镋MA的單一值18ng/天是基于一個(gè)小分子NDEA。專家成員不建議這樣做，因?yàn)樵S多被取代的側(cè)鏈大亞硝胺被代謝并分解為低分子量化合物；可以使用摩爾數(shù)。一個(gè)大的亞硝胺化合物不一定具有較少的致突變性或致癌性，在做出這樣的結(jié)論時(shí)必須謹(jǐn)慎；例如，二丁基亞硝胺在膀胱中比更小分子量的NDMA更有毒性，后者是一種有效的肝致癌物。有許多高分子量亞硝胺是高致癌物的例子。

Bucher博士和他在國家環(huán)境健康科學(xué)研究所的團(tuán)隊(duì)最近使用機(jī)器學(xué)習(xí)和Opera軟件對(duì)亞硝胺進(jìn)行了研究，根據(jù)物理化學(xué)性質(zhì)創(chuàng)建了模型。超過700種化合物的數(shù)據(jù)來自CPDB數(shù)據(jù)庫，但僅限于129種亞硝胺。結(jié)果經(jīng)過五次交叉驗(yàn)證，與上述討論類似，（Q）SAR模型需要更多信息來更好地區(qū)分高致癌活性和低致癌活性的亞硝胺。因此，對(duì)致癌活性的一般預(yù)測(cè)是可能的，但由于亞硝胺數(shù)據(jù)庫缺乏多樣性，其用途尚不清楚。

有人建議確定為什么非致癌亞硝胺沒有活性。可能的原因包括衰老和與DNA的相互作用，但也有代謝的原因。一個(gè)微不足道的結(jié)構(gòu)修改可以顯著影響活性。例如，如果連接叔丁基（取決于其相對(duì)于亞硝胺部分的位置），則該化合物呈現(xiàn)為非活性。另一個(gè)例子是等距取代亞硝基化合物：N-甲基亞硝基吡啶在吡啶環(huán)的2?、3?和4?位置上有三種異構(gòu)體被取代。吡啶2?位的取代被預(yù)測(cè)為致突變和致癌，而其他位置的取代則不是。這是異構(gòu)體不同活化和失活的結(jié)果。另一個(gè)例子是西咪替丁，它的亞硝化形式在體外是致突變的，但在嚙齒動(dòng)物體內(nèi)不是致癌的，因?yàn)樗鼉?yōu)先經(jīng)歷代謝失活，說明了代謝的重要性。

 

Q7.Nitrosamines can be formed during manufacturing of the active pharmaceuticalingredient (API) and/or DP. What are possible approaches to reduce nitrosamineformation during manufacturing? Can nitrosamines be eliminated completely fromAPI and/or DP?

問題7：亞硝胺可在活性藥物成分（API）和制劑的生產(chǎn)過程中形成，生產(chǎn)過程中減少亞硝胺生成的可能方法有哪些？亞硝胺能從原料藥和/或DP中完全消除嗎？

 

專家討論：

亞硝胺作為雜質(zhì)可在原料藥或制劑中生產(chǎn)的不同階段、儲(chǔ)存和包裝期間生成，以及隨著時(shí)間的推移作為降解物形成。因此，它們的檢測(cè)、存在和去除一直是監(jiān)管機(jī)構(gòu)和藥品制造商面臨的挑戰(zhàn)。自污染事件報(bào)道以來，我們學(xué)到了很多，我們對(duì)所有可能的形成途徑的理解仍在不斷發(fā)展。藥物結(jié)構(gòu)和化學(xué)成分都很復(fù)雜，對(duì)合成過程中的每一步進(jìn)行控制和深入了解至關(guān)重要，藥物制造商必須進(jìn)行全面思考。這一過程必須經(jīng)過深思熟慮，并考慮到每一種可能性。如果存在亞硝胺形成的風(fēng)險(xiǎn)，必須制定檢測(cè)策略。

亞硝胺污染可能與藥物合成途徑無關(guān)，就像纈沙坦。對(duì)于纈沙坦來說，問題在于溶劑二甲基甲酰胺，它被加熱到高溫，促進(jìn)二甲胺的形成。后者在亞硝酸鹽的存在下發(fā)生猝滅反應(yīng)，亞硝酸鹽的添加目的不同，導(dǎo)致NDMA的形成。因此，這是副反應(yīng)的副反應(yīng)，而不是直接污染。

另一個(gè)可能的來源是供應(yīng)鏈。如果藥品制造商使用回收或回收的含有亞硝胺的溶劑，然后再用于藥品制造。另一個(gè)方面是藥物的穩(wěn)定性。在某些情況下，由于不穩(wěn)定，亞硝胺的含量會(huì)隨著時(shí)間的推移而增加，例如雷尼替丁。一個(gè)意想不到的來源是包裝或印刷中的硝化纖維素。硝化纖維素是一種強(qiáng)硝化劑，在歐洲的化妝品行業(yè)中已被發(fā)現(xiàn)并被解決。

亞硝化反應(yīng)可以在適當(dāng)條件下，即在仲胺或叔胺、亞硝酸鹽或亞硝酸存在下，在化學(xué)反應(yīng)的任何步驟中發(fā)生。這種情況下，必須采取措施，通過適當(dāng)?shù)娜コ椒ǎㄟ^測(cè)試驗(yàn)證，消除該過程發(fā)生，或?qū)喯醢返纳山抵磷畹?。如果不可能消除形成亞硝胺的步驟，則應(yīng)嘗試在合成過程中提前移動(dòng)該步驟，并在生產(chǎn)原料藥之前進(jìn)行清除。

通過在同一生產(chǎn)步驟中不使用仲胺或叔胺加酸（例如亞硝酸）或消除其中一種來源，可以將亞硝胺的形成降至最低。即使這些來源不在同一步驟中，它們也可能在幾步之后形成，并導(dǎo)致意外的亞硝胺形成。另一個(gè)潛在來源是含有殘留胺的原料藥，這些胺通過流化床干燥排出。因此藥物生產(chǎn)過程中必須始終遵循GMP，如果難以消除這類雜質(zhì)，則需要進(jìn)行多學(xué)科（藥理學(xué)/毒理學(xué)、臨床、藥物短缺和依從性）效益風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估，以減少亞硝胺污染的可行性。

由于分析方法的靈敏度不斷提高，可以檢測(cè)到極低水平的亞硝胺，因此很難說完全從藥物中消除亞硝胺雜質(zhì)，風(fēng)險(xiǎn)效益比將使用迄今為止的所有可用數(shù)據(jù)以及確定的知識(shí)差距研究結(jié)果來確定。在大多數(shù)情況下，藥品中的亞硝胺可以通過GMP、良好的化學(xué)知識(shí)、合成路線的修改、亞硝胺形成來源的消除以及對(duì)整個(gè)生產(chǎn)過程的全面了解來消除。如果不能從藥物中消除亞硝胺，則需要進(jìn)行風(fēng)險(xiǎn)效益分析。在某些情況下，評(píng)估風(fēng)險(xiǎn)可能是比使用資源更合適的方法。在這種情況下，應(yīng)考慮患者群體、藥物短缺和臨床替代方案。制造業(yè)和技術(shù)的進(jìn)步使食品工業(yè)幾乎消除了亞硝胺。因此，藥物也可以實(shí)現(xiàn)這一點(diǎn)，但這需要時(shí)間，需要收集大量數(shù)據(jù)。

 

小結(jié)

 

亞硝胺的內(nèi)源性形成從20世紀(jì)60年代末的初步研究開始，到20世紀(jì)90年代結(jié)束。內(nèi)源性形成的亞硝胺、亞硝酸鹽和硝酸鹽在代謝上相關(guān)，通過還原、氧化和循環(huán)在血液和組織中轉(zhuǎn)化為活性亞硝胺，然后作為尿硝酸鹽排泄。為了確定風(fēng)險(xiǎn)，必須提供有關(guān)其內(nèi)源性形成的定量數(shù)據(jù)，了解亞硝胺的藥代動(dòng)力學(xué)。

對(duì)亞硝胺進(jìn)行分類將有助于根據(jù)活性和反應(yīng)性進(jìn)行風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估和分組。然而在涉及40余種動(dòng)物的研究中，大多數(shù)亞硝胺都是潛在的致癌物，很少是非致癌的。如此廣泛的活性限制了它們的分類。盡管如此，還是提出了一些分類方法。最簡(jiǎn)單的方法是根據(jù)現(xiàn)有信息將其分為致癌物和非致癌物。根據(jù)CPDB的TD50值進(jìn)行分類被認(rèn)為是目前的最佳方法。其他建議包括將亞硝胺按<1、1-10和10-100 mg/kg的TD50值進(jìn)行分類。

國際監(jiān)管機(jī)構(gòu)正在討論將ICH M7中的LTL應(yīng)用于受亞硝胺污染的短期藥物，以防止召回藥物，并允許患者在益處大于風(fēng)險(xiǎn)時(shí)繼續(xù)使用。然而亞硝胺的LTL方法在全球并不被接受。從FDA的角度來看，這是因?yàn)閬喯醢穼儆陉P(guān)注隊(duì)列化合物，為高致突變和致癌的化學(xué)物質(zhì)，這些化學(xué)物質(zhì)在藥物中受到嚴(yán)格控制。從高劑量到低劑量推斷時(shí)，此類化學(xué)品的劑量效應(yīng)曲線未知。為了替代LTL方法，F(xiàn)DA實(shí)施了一種靈活的方法，允許將高于AI的值作為臨時(shí)限值，同時(shí)使用1:100000的癌癥風(fēng)險(xiǎn)進(jìn)行評(píng)估。

大多數(shù)亞硝胺是致突變的，經(jīng)標(biāo)準(zhǔn)Ames試驗(yàn)呈陽性。在某些情況下，標(biāo)準(zhǔn)Ames測(cè)試呈陰性，但使用不同的測(cè)試條件又呈陽性。專家成員一致認(rèn)為，Ames陰性試驗(yàn)本身不足以證明亞硝胺的非致突變性。應(yīng)使用不同的條件進(jìn)行改良Ames試驗(yàn)；如果結(jié)果為陰性，則應(yīng)進(jìn)行體內(nèi)致突變性試驗(yàn)。如果后者也是陰性，則必須進(jìn)行專家知識(shí)和全面評(píng)估。在得出亞硝胺的非致突變性結(jié)論之前，應(yīng)徹底評(píng)估其致突變性，因此一些亞硝胺是非致突變但致癌的，工業(yè)界必須小心。

 

參考文獻(xiàn)：

 

1．Nitrosaminesas Impurities in Drugs; Health Risk Assessment and Mitigation Public Workshop，F(xiàn)DA網(wǎng)站

2. Control ofNitrosamine impurities in Human Drugs, FDA, February, 2021.