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嘉峪檢測(cè)網(wǎng) 2022-03-11 07:40
摘要 目的： 建立高效液相色譜法測(cè)定氨酚偽麻那敏分散片中對(duì)氨基酚的含量。方法：采用ZORBAX Eclipse XDB-C8 (4.6 mm×250 mm，5 μm)；流動(dòng)相為磷酸鹽緩沖液-甲醇(95:5)；流速1.0 mL·min-1；檢測(cè)波長(zhǎng)230 nm；柱溫30 ℃；進(jìn)樣量10 μL。結(jié)果：對(duì)氨基酚和相鄰色譜峰分離度良好，對(duì)氨基酚定量限為0.911 4 ng，檢測(cè)限為0.375 9 ng，在0.102 9～30.87 μg·mL-1濃度范圍內(nèi)線性良好(r=1.000)，回收率為96.8%，RSD為0.4%(n=9)。結(jié)論：該方法準(zhǔn)確、靈敏，可用于氨酚偽麻那敏分散片中對(duì)氨基酚的含量測(cè)定。
關(guān)鍵詞：氨酚偽麻那敏分散片；對(duì)氨基酚；高效液相色譜法
Determination of p-aminophenol in paracetamol, pseudoephedrine hydrochloride and chlorphenamine maleate dispersible tablets by HPLC
JIANG Kun, CHEN Yanqing, CAI Jinxiong, PANG Fagen, LI Yulan, WANG Tiejie
(Shenzhen Institute for Drug Control, Shenzhen 518057, China)
Abstract Objective: To establish an HPLC method for the determination of p-aminophenol in pseudoephedrine hydrochloride and chlorphenamine maleate dispersible tablets. Methods: The analysis was performed on a ZORBAX Eclipse XDB-C8 column (4.6 mm×250 mm, 5 μm) using a mobile phase of phosphate buffer solution-methanol (95：5) delivered at a flow rate of 1.0 mL·min-1. The detection wavelength was set at 230 nm, the column temperature was 30 ℃, and the injection volume was 10 μL. Results: The resolution between p-aminophenol and adjacent chromatographic peak was good. The qualification limit and detection limit of p-aminophenol was 0.9114 ng and 0.375 9 ng, respectively. p-aminophenol showed good linearity in the range of 0.102 9-30.87 μg·mL-1(r=1.000). The average recovery was 96.8% (RSD=0.4%, n=9). Conclusion: The established method showed good accuracy and sensitivity,which could be used for the determination of p-aminophenol in pseudoephedrine hydrochloride and chlorphenamine maleate dispersible tablets.
Key words: pseudoephedrine hydrochloride and chlorphenamine maleate dispersible tablets; p-aminophenol; HPLC
氨酚偽麻那敏分散片主要用于緩解普通感冒及流行性感冒引起的發(fā)熱、頭痛、四肢酸痛、打噴嚏、流鼻涕、鼻塞、咽痛等癥狀。也可用于兒童流行性感冒的治療。其主要成分為對(duì)乙酰氨基酚、鹽酸偽麻黃堿和馬來酸氯苯那敏。對(duì)氨基酚是對(duì)乙酰氨基酚生產(chǎn)時(shí)帶入或儲(chǔ)存時(shí)產(chǎn)生的降解產(chǎn)物，對(duì)人體有一定的毒性[1]。《中華人民共和國藥典》(簡(jiǎn)稱《中國藥典》)2020年版二部對(duì)乙酰氨基酚原料藥及相關(guān)制劑品種嚴(yán)格控制對(duì)氨基酚含量，各制劑標(biāo)準(zhǔn)中規(guī)定不得過對(duì)乙酰氨基酚標(biāo)示量的0.1%[2]。同時(shí)，對(duì)含對(duì)乙酰氨基酚的各種復(fù)方制劑中的對(duì)氨基酚進(jìn)行控制，也成為了近期藥品生產(chǎn)和檢驗(yàn)領(lǐng)域關(guān)注的熱點(diǎn)[3-7]。氨酚偽麻那敏分散片現(xiàn)行標(biāo)準(zhǔn)未對(duì)對(duì)氨基酚進(jìn)行控制[8-9]，也未見有文獻(xiàn)對(duì)氨酚偽麻那敏分散片中對(duì)氨基酚進(jìn)行分析測(cè)定。鑒于本品中對(duì)乙酰氨基酚的用量較大，有必要將對(duì)氨基酚作為指標(biāo)雜質(zhì)進(jìn)行檢查。本文采用HPLC法對(duì)氨酚偽麻那敏分散片中對(duì)氨基酚的含量進(jìn)行了測(cè)定，方法專屬性強(qiáng)，靈敏、準(zhǔn)確，為提高該品種的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提供了合理的依據(jù)和參考。
1 儀器與試藥
1.1 儀器
高效液相色譜儀(Waters 2695)，二極管陣列檢測(cè)器(Waters 2998)，電子天平(Mettler Toledo XSE205DU)。
1.2 試藥
對(duì)氨基酚對(duì)照品(中國食品藥品檢定研究院，批號(hào)100802-201604，純度100%)，對(duì)乙酰氨基酚對(duì)照品(中國食品藥品檢定研究院，批號(hào)100018-201610，純度99.9%)；氨酚偽麻那敏分散片(每片含對(duì)乙酰氨基酚80 mg，鹽酸偽麻黃堿7.5 mg，馬來酸氯苯那敏0.5 mg。共一個(gè)廠家，共3個(gè)批次)；空白輔料(由生產(chǎn)廠家提供)；甲醇為色譜純；馬來酸、10%四丁基氫氧化銨溶液、磷酸氫二鈉、磷酸二氫鈉均為分析純；水為超純水。
2 方法與結(jié)果
2.1 色譜條件
色譜柱：ZORBAX Eclipse XDB-C8 (4.6 mm×250 mm，5 μm)；流動(dòng)相：磷酸鹽緩沖液(取磷酸氫二鈉8.95 g，磷酸二氫鈉3.9 g，加水溶解至1 000 mL，加10%四丁基氫氧化銨溶液16 mL)-甲醇(95:5)；流速：1.0 mL·min-1；檢測(cè)波長(zhǎng)：230 nm；柱溫30 ℃；進(jìn)樣器溫度：10 ℃；進(jìn)樣量：10 μL。
1.對(duì)氨基酚(p-aminophenol)
圖1 系統(tǒng)適用性圖譜
Fig.1 Chromatography of system suitability
2.2 溶液的制備
2.2.1 溶劑甲醇-水(5:95)。
2.2.2 供試品溶液 取本品細(xì)粉適量(約相當(dāng)于對(duì)乙酰氨基酚200 mg)，精密稱定，置10 mL量瓶中，加溶劑適量，振搖使溶解，加溶劑稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液。
2.2.3 對(duì)照品溶液 取對(duì)氨基酚對(duì)照品適量，精密稱定，加溶劑溶解并定量稀釋制成每1 mL中約含20 μg的溶液。
2.2.4 對(duì)照品濃溶液 取對(duì)氨基酚對(duì)照品適量，精密稱定，加溶劑溶解并定量稀釋制成每1 mL中約含200 μg的溶液。
2.2.5 系統(tǒng)適用性溶液 取對(duì)氨基酚對(duì)照品和本品細(xì)粉各適量，加溶劑溶解并稀釋制成每1 mL中約含對(duì)氨基酚20 μg和對(duì)乙酰氨基酚20 mg的混合溶液，濾過，取續(xù)濾液。
2.3 專屬性試驗(yàn)
2.3.1 空白輔料溶液 取空白輔料約0.156 g，置10 mL量瓶中，加溶劑適量，振搖使溶解，加溶劑稀釋至刻度，搖勻；濾過。
2.3.2 酸破壞溶液 取供試品適量(約相當(dāng)于對(duì)乙酰氨基酚200 mg)，精密稱定，置10 mL量瓶中，加入0.2 mol·L-1的鹽酸溶液1 mL，放置1 h，加入0.2 mol·L-1的氫氧化鈉溶液1 mL，加溶劑適量，振搖使溶解，加溶劑稀釋至刻度，搖勻；濾過。
2.3.3 堿破壞溶液 取供試品適量(約相當(dāng)于對(duì)乙酰氨基酚200 mg)，精密稱定，置10 mL量瓶中，加入0.2 mol·L-1的氫氧化鈉溶液1 mL，放置1 h，加入0.2 mol·L-1的鹽酸溶液1 mL，加溶劑適量，振搖使溶解，加溶劑稀釋至刻度，搖勻；濾過。
2.3.4 氧化破壞溶液 取供試品適量(約相當(dāng)于對(duì)乙酰氨基酚200 mg)，精密稱定，置10 mL量瓶中，加入過氧化氫溶液(15%)0.5 mL，放置15 min，加溶劑適量，振搖使溶解，加溶劑稀釋至刻度，搖勻；濾過。
2.3.5 光照破壞溶液 取供試品適量(約相當(dāng)于對(duì)乙酰氨基酚200 mg)，精密稱定，置10 mL量瓶中，加溶劑適量，振搖使溶解，加溶劑稀釋至刻度，搖勻；濾過。取續(xù)濾液3 mL，在4500 lx±500 lx光照強(qiáng)度下照射2 h。
取空白溶劑及上述各溶液依法進(jìn)樣，色譜圖見圖2。結(jié)果表明，空白溶劑、輔料對(duì)對(duì)氨基酚的測(cè)定無干擾。在酸、堿、氧化、光照條下破壞樣品所產(chǎn)生的雜質(zhì)峰與對(duì)氨基酚峰有良好分離，在該系統(tǒng)下對(duì)對(duì)氨基酚的測(cè)定無干擾。
2.4 溶液穩(wěn)定性試驗(yàn)
取對(duì)照品溶液，在10 ℃進(jìn)樣器內(nèi)放置0、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10 h后，按上述色譜條件測(cè)定。結(jié)果表明，在10 ℃條件下，5 h以內(nèi)對(duì)氨基酚可保持穩(wěn)定，RSD為0.3%(n=6)。隨時(shí)間的推移對(duì)照品溶液主峰面積減小，對(duì)氨基酚有降解。故供試品溶液應(yīng)在配置好5 h內(nèi)完成進(jìn)樣分析。
2.5 線性和范圍
稱取對(duì)氨基酚對(duì)照品20.58 mg，置20 mL量瓶中，用溶劑溶解稀釋至刻度配制成對(duì)氨基酚儲(chǔ)備液，逐級(jí)稀釋成濃度為0.1029、1.029、10.29、20.58、30.87 μg·mL-1的系列溶液，按上述色譜條件進(jìn)行測(cè)定，記錄色譜圖，以濃度C(μg·mL-1)對(duì)峰面積A進(jìn)行線性擬合。線性方程為：
Y=3.808×104X-3 719.9 r=1.000
結(jié)果表明，對(duì)氨基酚在0.102 9~30.87 μg·mL-1濃度范圍內(nèi)線性良好。
2.6 檢測(cè)限和定量限
取對(duì)照品溶液，用溶劑逐級(jí)稀釋，按上述色譜條件進(jìn)行測(cè)定，以信噪比為3:1時(shí)計(jì)算檢測(cè)限，以信噪比為10:1時(shí)計(jì)算定量限。結(jié)果表明，定量限為0.911 4 ng，檢測(cè)限為0.375 9 ng。
2.7 回收率試驗(yàn)
取供試品6份，置10 mL量瓶中，分別精密加入適量的對(duì)氨基酚對(duì)照品濃溶液適量，配制成相當(dāng)于100%限度水平的回收率溶液。按上述色譜條件進(jìn)行測(cè)定，計(jì)算回收率。平均回收率結(jié)果為96.8%，RSD為0.4%(n=6)。見表1。
1.對(duì)氨基酚(p-aminophenol) A.空白溶劑(blank solvent) B. 空白輔料(blank excipients) C. 酸破壞溶液(decomposed by 0.2 mol·L-1 hydrochloric acid solution) D. 堿破壞溶液(decomposed by 0.2 mol·L-1 sodium hydroxide solution) E. 氧化破壞溶液(decomposed by 15% hydrogen peroxide solution) F. 光照破壞溶液(decomposed by 4500 lx±500 lx)
圖2 專屬性試驗(yàn)色譜圖
Fig.2 The chromatograms of specificity
2.8 重復(fù)性試驗(yàn)
因三批供試品中對(duì)氨基酚含量均低于定量限，故取回收率試驗(yàn)項(xiàng)下溶液測(cè)定結(jié)果計(jì)算重復(fù)性，RSD為0.4%。
表1 回收率試驗(yàn)結(jié)果(n=6)
Tab.1 Results of recovery
2.9 耐用性試驗(yàn)
取供試品溶液和對(duì)照品溶液，改變擬定色譜條件，包括有機(jī)相比例(97:3、95:5、93:7)，柱溫(25 ℃、30 ℃、35 ℃)，更換色譜柱(Kromasil 100 100-5-C8和Symmetry C8)及液相色譜儀(Agilent 1200，Ultimate 3000)，對(duì)氨基酚峰與相鄰雜質(zhì)峰均能達(dá)到良好的分離，方法的耐用性良好。
2.10 含量測(cè)定
按上述色譜條件進(jìn)行測(cè)定，以外標(biāo)法按峰面積計(jì)算對(duì)氨基酚的含量。三批供試品中有兩批檢出對(duì)氨基酚，相當(dāng)于對(duì)乙酰氨基酚標(biāo)示量0.000 2%和0.000 3%，但含量均低于定量限。
3 討論
3.1 流動(dòng)相和色譜柱的選擇
當(dāng)使用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，以甲醇-0.05 mol·L-1磷酸二氫鉀溶液-三乙胺(20:80:0.02)為流動(dòng)相時(shí)，對(duì)氨基酚峰與溶劑峰基線分離，但在進(jìn)行專屬性試驗(yàn)時(shí)，經(jīng)過0.1 mol·L-1 HCl破壞后，對(duì)氨基酚和相鄰雜質(zhì)峰分離度不能滿足要求。在通過調(diào)節(jié)有機(jī)相和水相比例后，分離度依然不能滿足要求。實(shí)驗(yàn)又考查了以辛烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，以磷酸鹽緩沖液(取磷酸氫二鈉8.95 g，磷酸二氫鈉3.9 g，加水溶解至1 000 mL，加10%四丁基氫氧化銨溶液16 mL)-甲醇(95:5)為流動(dòng)相時(shí)，對(duì)氨基酚出峰時(shí)間約4 min，峰型較好，與相鄰色譜峰分離度符合要求。
3.2 檢測(cè)波長(zhǎng)的選擇
《中國藥典》2020年版二部對(duì)乙酰氨基酚滴劑、咀嚼片和顆粒劑對(duì)氨基酚檢查項(xiàng)下的檢測(cè)波長(zhǎng)均為257 nm，也有文獻(xiàn)采用254、262、245 nm進(jìn)行檢測(cè)[3-7]。為提高本實(shí)驗(yàn)的靈敏度，取對(duì)氨基酚對(duì)照品溶液，在200~400 nm波長(zhǎng)范圍內(nèi)進(jìn)行紫外光譜掃描，對(duì)氨基酚的最大吸收波長(zhǎng)為230 nm。對(duì)氨基酚在254 nm、257 nm下吸收值均遠(yuǎn)低于在230 nm處的吸收值。因本實(shí)驗(yàn)僅針對(duì)對(duì)氨基酚進(jìn)行檢測(cè)，故以230 nm作為本方法的檢測(cè)波長(zhǎng)。在此波長(zhǎng)下，方法的靈敏度高、專屬性好，其他成分不影響對(duì)氨基酚的檢測(cè)。
3.3 系統(tǒng)適用性的考察
《中國藥典》2020年版二部對(duì)乙酰氨基酚及其制劑標(biāo)準(zhǔn)中，對(duì)氨基酚檢查項(xiàng)下系統(tǒng)適用性要求均為理論板數(shù)按對(duì)乙酰氨基酚計(jì)算。在本實(shí)驗(yàn)中，對(duì)氨基酚與相鄰雜質(zhì)的分離度以及對(duì)氨基酚的理論板數(shù)對(duì)測(cè)定的準(zhǔn)確性影響較大。取加標(biāo)供試品溶液在三臺(tái)儀器上使用三根色譜柱進(jìn)行分析，對(duì)理論板數(shù)按對(duì)氨基酚計(jì)算均大于2 000，對(duì)氨基酚與相鄰峰之間的分離度均大于1.5。綜上，方法的系統(tǒng)適用性要求定為“理論板數(shù)以對(duì)氨基酚峰計(jì)算不低于2 000。對(duì)氨基酚與相鄰色譜峰之間的分離度應(yīng)符合要求。”
3.4 對(duì)氨基酚的限量
《中國藥典》2020年版二部對(duì)乙酰氨基酚各制劑品種項(xiàng)下對(duì)氨基酚檢查項(xiàng)的限度均為“不得過對(duì)乙酰氨基酚標(biāo)示量的0.1%”，參考該限度，擬定標(biāo)準(zhǔn)中對(duì)氨基酚的限度設(shè)定為“不得過對(duì)乙酰氨基酚標(biāo)示量的0.1%”。
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《中國藥品標(biāo)準(zhǔn)雜志》第23卷第1期 2022.1
江坤， 陳顏清， 蔡錦雄， 龐發(fā)根， 李玉蘭， 王鐵杰
(深圳市藥品檢驗(yàn)研究院， 廣東 深圳 518057)
來源：Internet
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