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植物酶可以提高動物的消化功能，催化機(jī)體內(nèi)的生化反應(yīng)，促進(jìn)機(jī)體的新陳代謝，從而彌補(bǔ)因應(yīng)激等原因消化酶分泌的減少。所以很多時候，類似植酸酶、蛋白酶、纖維素酶、脂肪酶、果膠酶、淀粉酶等植物酶制劑會被作為很好的飼料添加劑，應(yīng)用在飼料產(chǎn)品的生產(chǎn)加工里面。這時候，如果企業(yè)能夠準(zhǔn)確的把握酶活性、酶反應(yīng)的相關(guān)數(shù)據(jù)就能夠更好的設(shè)計一款符合市場需求的畜禽飼料。 

重慶某生物制品公司準(zhǔn)備以植酸酶為研究對象，希望了解該植物酶活性來設(shè)計一款飼料產(chǎn)品。植物酶活性的檢測可以使用分光光度法進(jìn)行測定，這一點(diǎn)，可以依據(jù)我國國家標(biāo)準(zhǔn)GB/T 18634-2009《飼用植酸酶活性的測定 分光光度法》來進(jìn)行測定。通過實(shí)驗室分析手段來進(jìn)行評價， 我們可以用來篩選酶制劑的優(yōu)劣，了解植物酶的最適反應(yīng)溫度、最適反應(yīng)pH,pH的穩(wěn)定性、底物的濃度對酶活性檢測的影響等數(shù)據(jù)，從而完全反映添加植物酶后飼料的真實(shí)使用效果。所以，本次檢測方案基本參考GB/T 18634-2009給出的方法。

一、方法原理分析

使用分光光度法檢測植酸酶活性，原理主要是利用植酸酶在一定溫度和 pH 條件下，可以水解底物植酸鈉，從而生成正磷酸和肌醇衍生物，只要在酸性溶液中，用釩鉬酸氨處理，就會生成黃色的【（ NH4） 3PO 4 NH 4 VO 3 · 16M O O 3 】復(fù)合物，然后我們用分光光度計，在波長 415nm 下進(jìn)行比色測定就可以了解其酶活性。

二、檢測方法步驟

1.取有代表性樣品， 用四分法將試樣縮分至200g， 植酸酶產(chǎn)品不需粉碎， 配合飼料和添加劑預(yù)混合飼料需粉碎通過0.45mm標(biāo)準(zhǔn)篩,裝入密封容器,防止試樣成分變化。

2.稱取樣品5000U/g的0.4~0.6g，精確至0.0001g，置于250mL三角瓶中，準(zhǔn)確加入100mL乙酸緩沖液（2），放到空氣浴搖床上振蕩30min或磁力攪拌器上高速攪拌30min，在離心機(jī)上以4000r/min離心10min。分取不同體積的上清液用乙酸緩沖液（2）稀釋，使樣液濃度保持在0.4U/mL左右，待反應(yīng)。建議精確移取上清液1mL至25mL容量瓶中，用乙酸緩沖液（2）定容，搖勻。再繼續(xù)精確移取1mL試液至25mL容量瓶中，定容，搖勻，稀釋至31250倍。

3.取10mL試管，精確移取2mL稀釋液至試管中，同時做試樣空白。將樣品放入37℃水浴鍋預(yù)熱5min，先將空白加4mL終止液（1.3.7），再將樣與空白依次加入4mL底物植酸鈉（1.3.3），從加底物開始，向每支試管中加入試劑的時間間隔要絕對一致，加液后立即混勻，將其放入37℃水浴水解30min；取出后將樣品各加入4mL終止液。

4.反應(yīng)后的試樣在室溫下靜置10min，如出現(xiàn)混濁需在離心機(jī)（1.4.7）上以4000轉(zhuǎn)/min離心10min，上清液以標(biāo)準(zhǔn)曲線的空白調(diào)零在分光光度計415nm波長處測定樣品空白（A0）和樣品溶液（A）的吸光值，A-A0為實(shí)測吸光值，用直線回歸方程計算植酸酶的活性。

三、酶反應(yīng)分析

1.酶反應(yīng)的最適溫度

酶反應(yīng)的最適溫度調(diào)節(jié)恒溫水浴鍋，在不同溫度下(15~70℃)進(jìn)行酶促反應(yīng)。以最高酶活為100%，其他條件下的酶活占最高酶活的百分?jǐn)?shù)即為該酶在此溫度條件的相對酶活。植酸酶作為一種酶制劑，對溫度非常敏感，溫度低會降低它的生物活性；溫度高也會降低其生物活性，甚至完全失活。植酸酶隨著溫度的增加，酶活呈上升趨勢，到55℃左右酶活達(dá)到最高，溫度超過55℃后酶活開始下降，通過檢測，該酶的最適反應(yīng)溫度為55℃。

2.酶反應(yīng)的最適pH值

配制0.1mol的乙酸-乙酸鈉緩沖溶液，在不同的pH值((1.0~7.0)下進(jìn)行酶促反應(yīng)。以最高酶活為100%，其他條件下的酶活占最高酶活的百分?jǐn)?shù)即為該酶在此pH條件的相對酶活。通過檢測可知，植酸酶的最適pH值在4.0左右。pH值在2.5~5.5，能保持70%以上的酶活，該酶有較寬的pH適宜范圍，可以在消化道內(nèi)充分發(fā)揮作用。

3.底物濃度對酶活的影響

配制不同反應(yīng)濃度(0.1~5.0mmol/L)的底物，在常規(guī)條件下測定酶活，以最高酶活為100%，在其他條件下的酶活，占最高酶活的百分?jǐn)?shù)即為該酶在此底物濃度下的相對酶活。隨著底物濃度的增加酶活逐漸上升，當(dāng)?shù)孜餄舛茸銐虼髸r，酶全部被底物所飽和，此時反應(yīng)速度達(dá)到最大值。隨著底物濃度的增加，樣品空白的本底值逐漸增大，會影響酶活的測定。

四、總結(jié)

通過分光光度計法檢測，我們可以了解到該酶制劑樣品的最適反應(yīng)溫度為 55℃；最適反應(yīng)pH值為4.0。酶活的測定在飼料用酶制劑產(chǎn)品的質(zhì)量檢驗、產(chǎn)品標(biāo)簽和酶活保證方面是必不可少的項目， 而酶活的測定是一種非常細(xì)致的工作，所以，我們一定要找準(zhǔn)依據(jù)標(biāo)準(zhǔn)，深刻理解影響酶制劑酶活測定的主要因素，正確把握各影響因素的關(guān)鍵點(diǎn)，從而才能為企業(yè)篩選優(yōu)質(zhì)酶制劑、確定復(fù)合酶制劑的最佳組方及確定產(chǎn)品的最佳添加量等提供更好的數(shù)據(jù)支撐。

除了GB/T 18634-2009外，如果想檢測其他植物酶活性，參考的標(biāo)準(zhǔn)還有 GB/T 23874-2009  《飼料添加劑木聚糖酶活力的測定 分光光度法 》、 GB/T 28715-2012《飼料添加劑酸性、中性蛋白酶活力的測定 分光光度法》、 GB/T 33409-2016  《β-半乳糖苷酶活性檢測方法 分光光度法》、 GB/T 23881-2009 《 飼用纖維素酶活性的測定 濾紙法》 等等，大家可酌情參考。當(dāng)然，該重慶某生物制品公司也十分認(rèn)可我們的檢測方案。