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嘉峪檢測(cè)網(wǎng) 2022-05-05 23:00
01生物制品檢測(cè)方法開發(fā)與驗(yàn)證
Q1.仇博士，請(qǐng)教，無雜質(zhì)標(biāo)的情況下，有關(guān)物質(zhì)分析方法確認(rèn)的檢測(cè)限定量限怎么做
答：在無雜質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)品的情況下，這個(gè)雜質(zhì)應(yīng)該是存在藥物中。你可以稀釋藥物，并檢測(cè)雜質(zhì)的信噪比。當(dāng)雜質(zhì)的信噪比為10時(shí)，就是該雜質(zhì)的定量限；當(dāng)信噪比為3時(shí)，就是該雜質(zhì)的檢測(cè)限。雜質(zhì)的濃度可用主峰的，或我們假定雜質(zhì)峰和主峰的反應(yīng)是一致的，這樣我們就可以算出雜質(zhì)的LOQ和LOD的濃度。
Q2.仇博士生物制品的分析方法的質(zhì)量控制要注意哪些地方？
答：一個(gè)方法的目的是fit for the purpose，即適用于特定的目的。為了達(dá)到對(duì)方法的質(zhì)量進(jìn)行有效地控制，我們應(yīng)該按照不同參數(shù)的要求來確認(rèn)方法，滿足特定的接受標(biāo)準(zhǔn)。專屬性，精確度，準(zhǔn)確度這三個(gè)是最關(guān)鍵的參數(shù)，我們必須要求它們達(dá)到我們預(yù)定的目標(biāo)或接受標(biāo)準(zhǔn)。但是我們也不能對(duì)方法過于嚴(yán)格要求，也就是說我們的接受標(biāo)準(zhǔn)不要設(shè)的太高。否則，我們很難達(dá)到，我們總是出偏差，這也不是我們想看到的。
Q3.仇博士，我之前做qc的，現(xiàn)在做研發(fā)工藝開發(fā)，有什么最需要克服的困難和需要增強(qiáng)能力
答：研發(fā)和QC有些不同。在QC部門，你的任務(wù)是按照SOP操作。但是在研發(fā)部門，你的任務(wù)是開發(fā)新的方法，如果碰到問題，你得想辦法解決問題。一方面你得好好做實(shí)驗(yàn)，觀察細(xì)節(jié)。從實(shí)驗(yàn)中，慢慢掌握技術(shù)和技巧。更重要的是，搜索參考文獻(xiàn)。針對(duì)問題，從文獻(xiàn)中尋找答案。
02生物制品全生命周期的相容性及密封性研究熱點(diǎn)及策略
Q1.請(qǐng)問輸血袋一般用什么方法進(jìn)行檢漏
答：輸血袋規(guī)格小于500ml的可以采用高壓放電、真空衰減等方法。
Q2.老師，剛才講到了2828的aql制定，請(qǐng)問不同樣本項(xiàng)目的aql如何更合理設(shè)定？如根據(jù)過往檢驗(yàn)結(jié)果？還是風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估？還是和供應(yīng)商聯(lián)絡(luò)？
答：建議參考藥包材YYB標(biāo)準(zhǔn)附件里的AQL和檢驗(yàn)水平以及參考藥品抽樣規(guī)則，綜合設(shè)計(jì)。
Q3.還有就是其提取物和浸出物的標(biāo)準(zhǔn)（限度）應(yīng)如何界定？謝謝
答：建議依據(jù)特定物質(zhì)的毒理學(xué)數(shù)據(jù)PDE值或是AI值與最大用量進(jìn)行界定，如是未知物需要用到SCT或是TTC來界定。
Q4.老師,細(xì)胞產(chǎn)品的密封性在做風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估時(shí)是否需要考慮全制程？在做密封性檢測(cè)時(shí)如何針對(duì)細(xì)胞產(chǎn)品特殊性進(jìn)行抽樣方案？
答：細(xì)胞產(chǎn)品的密封性建議全過程進(jìn)行控制，因?yàn)闊o菌風(fēng)險(xiǎn)控制是全過程的。具體抽樣方案和規(guī)則有依據(jù)的都是認(rèn)可以，目前沒有統(tǒng)一規(guī)定。
Q5.請(qǐng)問老師，（蛋白類藥液）分裝設(shè)備料液傳輸有一小段硅膠管，對(duì)其相容性如何控制？謝謝
答：建議按生產(chǎn)組件的相容性進(jìn)行評(píng)估風(fēng)險(xiǎn)高中低，來定需要做什么試驗(yàn)，具體可以聯(lián)系國標(biāo)客服18102296885。
Q6.老師，包材相容性，是3批包材對(duì)一批樣品，還是3批樣品對(duì)一批包材，如何選擇
答：一般符合申報(bào)資料的最低要求是3批制劑對(duì)1批包材就可以，3批包材對(duì)一批樣品重點(diǎn)是考察包材批間的差異
Q7.請(qǐng)問老師，標(biāo)簽油墨的遷移研究如何做，謝謝
答：主要在提取階段進(jìn)行設(shè)計(jì)，將標(biāo)簽油墨中成分進(jìn)行充分考慮，如有檢出相關(guān)成分且超過一定的閾值，建議在含有標(biāo)簽油墨的成品中增加相應(yīng)成分的檢測(cè)。
Q8.生物藥的包材相容性怎么做呀？
答：生物藥的包材相容性一般參照化藥進(jìn)行及特定指導(dǎo)原則進(jìn)行，依據(jù)生物藥配方、包裝容器性質(zhì)，按照已發(fā)布的相容性指導(dǎo)原則開展六個(gè)部分的研究就可以了。
03風(fēng)口浪尖上的細(xì)胞治療產(chǎn)品CAR-NK
Q1.CAR-T 產(chǎn)品治療效果咋樣？
答：2021年6月以來，復(fù)星凱特、藥明巨諾的兩款CAR-T產(chǎn)品，獲批適應(yīng)癥都是用于治療既往接受二線或以上系統(tǒng)性治療后復(fù)發(fā)或難治性大B細(xì)胞淋巴瘤患者。
復(fù)星凱特CAR-T產(chǎn)品：最佳總緩解率（ORR）達(dá)到79.2%，客觀緩解率83%、完全緩解率58%，4年總生存率達(dá)44%；藥明巨諾的CAR-T產(chǎn)品：客觀緩解率為75.9%，最佳完全緩解率為51.7%?？傮w來說，CAR-T產(chǎn)品給予經(jīng)其它方法治療無效的復(fù)發(fā)或難治性大B細(xì)胞淋巴瘤患者于希望，延長患者生存時(shí)間，并有一半的可能性完全治愈。
Q2.想問下CAR-NK比CAR-T治療效果好嗎？
答：數(shù)據(jù)報(bào)道，在血液瘤方面CAR-NK 和 CAR-T均有較好的治療效果，而CAR-NK 在實(shí)體瘤的研究領(lǐng)域更為突出，有望突破實(shí)體瘤治療的瓶頸。
另CAR-NK相比于CAR-T的優(yōu)勢(shì)在于：
a 免疫原性低，可直接用于異體治療，制備成現(xiàn)貨產(chǎn)品；
b 更安全：異體輸注基本不會(huì)引發(fā)GVHD；降低細(xì)胞因子風(fēng)暴發(fā)生的風(fēng)險(xiǎn)；體內(nèi)存活周期短，不容易產(chǎn)生長期的毒副作用；
Q3.老師能講講實(shí)際開發(fā)關(guān)鍵點(diǎn)嗎？
答：細(xì)胞治療產(chǎn)品工藝開發(fā)主要從穩(wěn)定性 和 安全性考量，分別如下：
a 穩(wěn)定性：數(shù)量、活率、陽性率等關(guān)鍵質(zhì)量屬性、工藝穩(wěn)定性、批間一致性、產(chǎn)品穩(wěn)定性等
b 安全性：原材料的穩(wěn)定性，殘留、無菌、支原體、內(nèi)毒素、交叉污染、防混淆等
Q4.細(xì)胞產(chǎn)品生產(chǎn)過程中關(guān)鍵點(diǎn)有哪些？
答：需嚴(yán)格按照已有生產(chǎn)工藝制備CAR-T產(chǎn)品；
a 采血標(biāo)準(zhǔn)、數(shù)量、疾病篩查等；
b 嚴(yán)格把控生產(chǎn)用試劑耗材：培養(yǎng)基、磁珠等；
c 生產(chǎn)周期中的細(xì)胞數(shù)量、安全性指標(biāo)檢測(cè)；
d 根據(jù)法規(guī)和指導(dǎo)文件制定的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)：磁珠殘留、陽性率、殺傷檢測(cè)等；
e 從采血到回輸?shù)娜鞒坦芾砑拔募w系：制造、檢定規(guī)程和記錄、物料、設(shè)備使用、方案等。
04國內(nèi)外生物制品穩(wěn)定性研究
Q1. 老師生物藥中間產(chǎn)品的穩(wěn)定性研究可以舉例嗎？
答：比如產(chǎn)品單次收獲物，半成品都可以看做中間產(chǎn)品，應(yīng)該根據(jù)生產(chǎn)儲(chǔ)存時(shí)限進(jìn)行穩(wěn)定性研究。
Q2. 穩(wěn)定性樣品出樣后應(yīng)放在什么條件下待檢，如何評(píng)估？
答：應(yīng)該放在樣品要求的儲(chǔ)存條件下待檢，如果你的產(chǎn)品儲(chǔ)存條件是2-8℃，你的加速條件是25±2℃，取出后，應(yīng)該放在2-8℃。
Q3. 麻煩問下，樣品測(cè)定過程，如何保證樣品的穩(wěn)定性？有什么專業(yè)指導(dǎo)？謝謝
答：應(yīng)該依據(jù)方法驗(yàn)證中進(jìn)行的溶液穩(wěn)定性研究制定檢驗(yàn)時(shí)間，如果對(duì)溫度非常敏感的樣品，應(yīng)該在檢驗(yàn)過程中注意溫度存放，盡量縮短檢驗(yàn)時(shí)間。
Q4. 穩(wěn)定性的條件，設(shè)備影響有多大？
答：儀器設(shè)備應(yīng)該經(jīng)過確認(rèn)，設(shè)備精度應(yīng)該滿足實(shí)驗(yàn)條件的精度，在這種前提下，設(shè)備影響是很小的。另一方面就是檢驗(yàn)儀器，同樣應(yīng)該定期進(jìn)行校驗(yàn)和確認(rèn)，保證儀器的檢測(cè)精度，進(jìn)可能采用同一臺(tái)儀器檢測(cè)穩(wěn)定性樣品，消除不同品牌儀器的影響。
Q5. 凍融、振搖的影響因素一般怎么做？
答：（1）可以依據(jù)中國GMP指南中的建議進(jìn)行凍融試驗(yàn)（見下面圖片），也可以根據(jù)自己公司產(chǎn)品情況設(shè)計(jì)凍融試驗(yàn)，應(yīng)該保持每次凍融試驗(yàn)條件一致。
（2）也可以依據(jù)歐盟發(fā)布的生物制品方法研究中介紹的凍融穩(wěn)定性進(jìn)行：
A．穩(wěn)定性質(zhì)控樣品應(yīng)在解凍循環(huán)之間保持至少12小時(shí)的冷凍。
B. 用于凍融穩(wěn)定性考察的質(zhì)控樣品應(yīng)使用新鮮制備的校準(zhǔn)曲線和質(zhì)控樣品或已證明穩(wěn)定的質(zhì)控樣品進(jìn)行評(píng)估。
C. 經(jīng)驗(yàn)證的冷凍/解凍循環(huán)次數(shù)應(yīng)不少于試驗(yàn)樣品所經(jīng)歷的凍融循環(huán)次數(shù)，但至少應(yīng)進(jìn)行三次循環(huán)。
Q6. 原料藥紙板桶兩層PE袋包裝，穩(wěn)定性用小紙筒和2層封口袋包裝可以嗎？
答：樣品的封口方式應(yīng)該和產(chǎn)品的封口一致，這樣是可以的。
Q7. 原料藥儲(chǔ)存條件如果是陰涼條件放置，那么長期和加速穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)條件應(yīng)該怎么設(shè)置？
答：建議長期在25±2℃，相對(duì)濕度60%±5% ，加速在40±2℃，相對(duì)濕度75%±5%條件下進(jìn)行。
05LC-MS肽圖方法在抗體藥物表征與質(zhì)量控制中的應(yīng)用
Q1.蛋白N端和C端分析的原理是什么
答：蛋白N端測(cè)序，可以使用蛋白測(cè)序儀，從肽鏈的N端開始，依次測(cè)定蛋白質(zhì)分子的氨基酸排列順序。使用的是Edman降解的方式。也可以使用質(zhì)譜法（二級(jí)確證）對(duì)多肽序列進(jìn)行測(cè)定。如，在2020版藥典中提出，用氨基酸序列分析儀或質(zhì)譜法測(cè)定尼妥珠單抗的 N 端序列。
此外，C-末端氨基酸序列也可以使用LC-MS進(jìn)行測(cè)定。
Q2.怎么樣獲得高質(zhì)量肽圖并高效進(jìn)行肽圖分析？
答：蛋白/多肽樣品前處理時(shí)，選擇合適的酶進(jìn)行充分酶解（之前做好分子高級(jí)結(jié)構(gòu)的打開）。
液相分離時(shí)，選擇合適的色譜柱（如賽默飛Accucore C18 2.1×150 mm（貨號(hào)：17126-152130）色譜柱）和流動(dòng)相條件，覆蓋范圍更寬的液相梯度范圍和合理的分離時(shí)間。
選擇碎裂能力更好的質(zhì)譜儀，如Orbitrap的HCD碎裂模式，能夠獲得高質(zhì)量的二級(jí)譜圖；合適的質(zhì)譜采集參數(shù)。
數(shù)據(jù)分析時(shí)，進(jìn)行合理的參數(shù)設(shè)置與優(yōu)化。
06安捷倫mRNA疫苗質(zhì)控方案-高分辨液質(zhì)系統(tǒng)的加帽加尾分析
Q1.在進(jìn)行雜質(zhì)或含量分析時(shí)，一些物質(zhì)對(duì)儀器和色譜柱損傷比較大，有什么措施可以在日常分析中減少對(duì)儀器和色譜柱的？
答：如果是試劑 盡量使用高級(jí)別試劑 同時(shí)降低試劑濃度 如果是樣品中雜質(zhì) 盡可能對(duì)樣品進(jìn)行凈化后上樣
Q2.安捷倫是否嘗試過mRNA的加帽和加尾的LC.解決方案，而不是必須LC-MS？USP最近的mRNA草案給出的加帽和加尾分析方法都是基于LC的。
答：客戶更多采用LCMS方法檢測(cè)加帽率，原因是LCMS可以更好的給出對(duì)應(yīng)組分的鑒定信息并定量。Application Note 5994-3984EN
來源：Internet
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