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嘉峪檢測網(wǎng) 2022-06-07 21:20
摘要：生物制品穩(wěn)定性試驗相較于傳統(tǒng)的化學(xué)藥品具有一定的特殊性?！吨袊幍洹?020年版針對生物制品增訂了“生物制品穩(wěn)定性試驗指導(dǎo)原則”。本文介紹了該指導(dǎo)原則起草時國內(nèi)外法規(guī)的背景，并對指導(dǎo)原則中的內(nèi)容進(jìn)行了說明，為新版藥典的實施提供參考。
關(guān)鍵詞：生物制品；穩(wěn)定性試驗；指導(dǎo)原則
生物制品系指以微生物、細(xì)胞、動物或人源組織和體液等為起始原材料，用生物學(xué)技術(shù)制成，用于預(yù)防、治療和診斷人類疾病的制劑[1]，其活性成分多為多糖、多肽或蛋白質(zhì)，相較于普通的化學(xué)藥品其結(jié)構(gòu)較為復(fù)雜。生物制品的穩(wěn)定性不僅取決于分子內(nèi)的共價鍵，更多情況下依賴于分子內(nèi)外的氫鍵、范德華力等非共價鍵。例如蛋白質(zhì)容易發(fā)生聚集、沉淀、表面吸附與變性。生物制品的這些特點導(dǎo)致其對溫度、凍融、振動、光照、離子強(qiáng)度等環(huán)境因素更為敏感。因此生物制品穩(wěn)定性試驗的方案設(shè)計和研究方法與傳統(tǒng)的化學(xué)藥品存在明顯差異。同時不同類別的生物制品的穩(wěn)定性特點也存在較大差異。例如，疫苗根據(jù)其溫度穩(wěn)定性可分為熱敏感型疫苗和冷凍敏感型疫苗，前者主要有減毒活疫苗，過熱會影響減毒活疫苗的病毒活力；后者主要為含鋁佐劑類疫苗，凍結(jié)將嚴(yán)重影響蛋白與鋁佐劑的結(jié)合及氫氧化鋁在膠體中的狀態(tài)[2]。因此不同種類的生物制品穩(wěn)定性試驗方案設(shè)計和研究方法也存在較大差異。
隨著生物技術(shù)的不斷發(fā)展，生物制品類別不斷增加。近年來細(xì)胞治療產(chǎn)品、基因治療產(chǎn)品等新型生物制品不斷面世；新冠疫情的暴發(fā)導(dǎo)致多種新型疫苗迅速應(yīng)用于臨床[3]。生物制品的概念不斷擴(kuò)充，種類和性質(zhì)也愈加復(fù)雜。在此背景下《中華人民共和國藥典》(簡稱《中國藥典》)2020年版新增了生物制品穩(wěn)定性試驗指導(dǎo)原則。本文重點介紹了該指導(dǎo)原則編制時參考的國內(nèi)外法規(guī)背景情況及編制內(nèi)容的相關(guān)說明，為對該原則的正確理解和應(yīng)用提供進(jìn)一步的指導(dǎo)。
1 國內(nèi)外法規(guī)概況
歷版《中國藥典》僅收載“原料藥物與制劑穩(wěn)定性試驗指導(dǎo)原則”[4]，該指導(dǎo)原則內(nèi)容與ICH Q1A(R2)“新原料藥和制劑的穩(wěn)定性試驗”[5]類似(框架結(jié)構(gòu)見表1)，主要針對化學(xué)原料藥及制劑的穩(wěn)定性試驗。生物制品與普通化學(xué)藥品相比存在一定的特殊性，該穩(wěn)定性試驗指導(dǎo)原則并不完全適用于生物制品。
針對生物制品的穩(wěn)定性試驗，現(xiàn)有的指導(dǎo)原則有ICH Q5C“生物制品生物技術(shù)產(chǎn)品的穩(wěn)定性試驗”[6]、USP 351049“生物制品生物技術(shù)產(chǎn)品的穩(wěn)定性試驗”和國家食品藥品監(jiān)督管理總局通告2015年第10號文“生物制品穩(wěn)定性研究技術(shù)指導(dǎo)原則(試行)”[7]。其中ICH與USP的相關(guān)內(nèi)容完全一致，內(nèi)容是結(jié)合生物制品的特點對ICH Q1A(R2)“新藥原料及制劑穩(wěn)定性試驗”的補(bǔ)充，主要包含該指導(dǎo)原則的適用范圍、試驗批次選擇、穩(wěn)定性指標(biāo)、貯藏條件和測試頻率等內(nèi)容。國家食品藥品監(jiān)督管理總局通告2015年第10號文包含樣品選擇、試驗條件、試驗項目、試驗時間、運(yùn)輸穩(wěn)定性、結(jié)果分析等內(nèi)容，與前者的內(nèi)容大部分相同(框架結(jié)構(gòu)見表2)。
由于歷版《中國藥典》中的穩(wěn)定性試驗指導(dǎo)原則并不完全適用于生物制品，并且我國已經(jīng)加入“國際藥品技術(shù)要求協(xié)調(diào)組織(ICH)”。為此，新版藥典有必要結(jié)合ICH以及國內(nèi)現(xiàn)行文件編制新增針對生物制品穩(wěn)定性試驗的指導(dǎo)原則。
2 “生物制品穩(wěn)定性試驗指導(dǎo)原則”內(nèi)容簡介
該指導(dǎo)原則的主要內(nèi)容分為七個部分：方案制訂、試驗類別、試驗樣品、試驗項目、試驗條件、試驗時間和結(jié)果分析。
2.1 方案制訂
由于不同種類的生物制品的穩(wěn)定性差異較大，無法給出普適性的實驗方案。(9001也沒有詳細(xì)的實驗方案)實驗者必須根據(jù)各自產(chǎn)品的特性制定合適的穩(wěn)定性實驗方案。因此，本指導(dǎo)原則的實施方案在明確了應(yīng)當(dāng)能支持產(chǎn)品建議的貯存條件和有效期的基本要求的前提下。規(guī)定了至少應(yīng)當(dāng)包含的內(nèi)容：證明產(chǎn)品穩(wěn)定性的試驗類別、試驗樣品、試驗項目、試驗條件、試驗時間和結(jié)果分析等內(nèi)容。
2.2 試驗類別
穩(wěn)定性試驗必須包括影響因素試驗、加速試驗和長期試驗，并明確了提出了三種試驗的設(shè)計要求與試驗?zāi)康?。其中影響因素實驗是考察各種極端因素，以了解產(chǎn)品對各個條件的穩(wěn)定性以及降解方式。加速試驗是通過提高溫濕度等條件為制劑設(shè)計、包裝、運(yùn)輸、貯存提供依據(jù)。長期試驗是在設(shè)定的貯存條件范圍內(nèi)進(jìn)行，其目的是為制定有效期提供依據(jù)。值得注意的是，對于生物制品目前還沒有可以通過加速試驗推算長期穩(wěn)定性的經(jīng)驗公式，合理的貯存條件和有效期必須通過長期試驗進(jìn)行驗證。
2.3 試驗樣品
穩(wěn)定性試驗的樣品需要涵蓋生物制品的原液、成品及產(chǎn)品自帶的稀釋液或重懸液，對需要保存一定時間的中間產(chǎn)品也應(yīng)進(jìn)行穩(wěn)定性研究。
指導(dǎo)原則規(guī)定了試驗樣品最少批數(shù)，要求樣品應(yīng)具有代表性，并且要求不同批次的成品應(yīng)取自不同批次的原液。原則上不同規(guī)模生產(chǎn)、不同規(guī)格、不同包裝容器或密閉系統(tǒng)的產(chǎn)品，均應(yīng)分別開展穩(wěn)定性試驗，對于僅有裝量不同的同一品種產(chǎn)品，可以根據(jù)相應(yīng)的原則減少穩(wěn)定性試驗。
2.4 試驗項目
對于生物制品，很難用單一的穩(wěn)定性試驗分析方法或參數(shù)來反映生物制品穩(wěn)定性特征的全貌。應(yīng)根據(jù)產(chǎn)品的實際情況，設(shè)計一系列合理的穩(wěn)定性試驗項目，對產(chǎn)品的各個階段進(jìn)行穩(wěn)定性試驗，以確保能反映產(chǎn)品的穩(wěn)定性特征。
指導(dǎo)原則強(qiáng)調(diào)了生物學(xué)活性/效價與純度的重要性。生物學(xué)活性/效價是生物制品穩(wěn)定性的關(guān)鍵評價指標(biāo)，活性/效價的測定結(jié)果大多為參比物質(zhì)的相對值，在試驗中應(yīng)注意參比物質(zhì)的標(biāo)化。純度的測定結(jié)果受限于分析方法的分析原理，例如按照分子量分離的蛋白電泳不能檢測等電點差異的雜蛋白，因此純度的測定應(yīng)采用多種原理的分析方法進(jìn)行綜合的評估，根據(jù)產(chǎn)品的降解/聚合情況選擇合適的分析方法。對于純度檢查出的降解產(chǎn)物，應(yīng)盡可能的進(jìn)行鑒定，并開展安全性和有效性的評估。
含量、外觀、可見異物、不溶性微粒、pH值、注射用無菌粉末(凍干疫苗)的水分、無菌等常規(guī)檢測項目也應(yīng)根據(jù)產(chǎn)品的特點進(jìn)行考察。
穩(wěn)定性試驗還應(yīng)涵蓋藥品生產(chǎn)過程中使用的穩(wěn)定劑、防腐劑或賦形劑，也應(yīng)考慮包裝容器和密閉系統(tǒng)對樣品的潛在影響。
2.5 試驗條件
生物制品應(yīng)根據(jù)自身的穩(wěn)定性特點，選擇合適的試驗條件，制定長期、加速和影響因素試驗三種穩(wěn)定性試驗方案，試驗條件應(yīng)該充分考慮到產(chǎn)品的貯存、運(yùn)輸以及使用過程中可能遇到的情況。
關(guān)于試驗溫度的設(shè)定，影響因素試驗應(yīng)達(dá)到可以觀察到樣品失活、變性或發(fā)生降解并超出質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)限度。加速穩(wěn)定性試驗一般介于長期與影響因素試驗之間，通常可以反映產(chǎn)品可能短期偏離于要求貯存條件的情況。長期穩(wěn)定性試驗應(yīng)與實際要求的貯存條件相一致。指導(dǎo)原則根據(jù)常溫、冷藏和冷凍貯存的三類產(chǎn)品給出了三種建議的試驗溫度范圍[8]，也明確指出可以根據(jù)產(chǎn)品對溫度的敏感程度制定其他合適的試驗溫度。
關(guān)于濕度，若能證明保證容器與密閉系統(tǒng)具有良好的密封性能，則可以省略濕度相關(guān)的穩(wěn)定性試驗。應(yīng)注意半滲透性容器不同容積在不同濕度下對產(chǎn)品的影響。
關(guān)于容器與密閉系統(tǒng)，試驗應(yīng)關(guān)注液體制劑與密閉系統(tǒng)的相互作用，應(yīng)將樣品以倒立放置或水平放置、正立放置兩種情況進(jìn)行穩(wěn)定性試驗，以確定密閉系統(tǒng)對產(chǎn)品的影響，原則上液體制劑與密閉系統(tǒng)應(yīng)充分接觸。不同密閉系統(tǒng)的產(chǎn)品應(yīng)分別進(jìn)行穩(wěn)定性試驗。如果產(chǎn)品為多次使用的包裝，應(yīng)模擬實際使用情況進(jìn)行試驗，確保多次使用后產(chǎn)品的穩(wěn)定性仍符合標(biāo)準(zhǔn)要求。
對于需要冷凍保存的原液、中間產(chǎn)物均應(yīng)驗證其在多次反復(fù)凍融條件下產(chǎn)品質(zhì)量的變化。對于需要冷鏈保存和運(yùn)輸?shù)漠a(chǎn)品，應(yīng)對產(chǎn)品的運(yùn)輸條件進(jìn)行模擬，應(yīng)充分考慮運(yùn)輸時可能遇到的最差條件，通過試驗確保運(yùn)輸過程的穩(wěn)定性，并應(yīng)盡可能對產(chǎn)品脫離冷鏈的溫度、次數(shù)、總時間等參數(shù)制定相應(yīng)的要求。
如產(chǎn)品對光照、振動、氧化等條件比較敏感，也應(yīng)設(shè)置相應(yīng)的試驗條件。
2.6 試驗時間
長期穩(wěn)定性試驗應(yīng)根據(jù)預(yù)定的有效期設(shè)定合理的試驗時間點。應(yīng)基于產(chǎn)品穩(wěn)定性的突變期，增加檢測時間點。原則上長期試驗應(yīng)在存放時限內(nèi)盡可能做到產(chǎn)品不合格，產(chǎn)品的有效期應(yīng)參考長期穩(wěn)定性試驗結(jié)果。加速和影響因素試驗應(yīng)根據(jù)產(chǎn)品的特點設(shè)置試驗時間點，應(yīng)盡可能觀察到產(chǎn)品不合格。
2.7 結(jié)果分析
穩(wěn)定性試驗應(yīng)根據(jù)產(chǎn)品的特點建立合理的結(jié)果驗收標(biāo)準(zhǔn)，對不同的考察項目分別進(jìn)行分析，并對比試驗結(jié)果進(jìn)行綜合評估。不同批次的試驗結(jié)果應(yīng)有較好的一致性，并且對不同時間點的穩(wěn)定性差異進(jìn)行趨勢分析。
對于變更的產(chǎn)品，變更的內(nèi)容若影響產(chǎn)品的穩(wěn)定性，則應(yīng)進(jìn)行穩(wěn)定性試驗，并與變更前的穩(wěn)定性歷史數(shù)據(jù)進(jìn)行比較。若變更前后的穩(wěn)定性試驗具有可比性，穩(wěn)定性試驗數(shù)據(jù)可以進(jìn)行橋接。
3 小結(jié)
生物制品的穩(wěn)定性研究是保證生物制品安全有效的基礎(chǔ)，是貫穿于整個產(chǎn)品研發(fā)階段和支持產(chǎn)品上市及上市后研究的重要內(nèi)容，是產(chǎn)品有效期設(shè)定的依據(jù)。生物制品穩(wěn)定試驗可以用于對產(chǎn)品生產(chǎn)工藝、制劑處方、包裝材料選擇合理性的判斷，同時也是產(chǎn)品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)制定的基礎(chǔ)。《中國藥典》2020年版生物制品穩(wěn)定性試驗指導(dǎo)原則的修訂，為生物制品穩(wěn)定性研究的規(guī)范化奠定了基礎(chǔ)。該指導(dǎo)原則相較于ICH Q5C[6]，增加了方案制定、試驗類別和結(jié)果分析，通過這幾個章節(jié)明確的要求了穩(wěn)定性試驗應(yīng)根據(jù)產(chǎn)品的特點制定完整的試驗方案，設(shè)計合理的實驗條件、分析方法和驗收標(biāo)準(zhǔn)。該指導(dǎo)原則在試驗樣品的選擇中有說明“可通過合理的實驗設(shè)計選擇適宜的規(guī)格開展穩(wěn)定性研究”，但未能明確合理的實驗設(shè)計方法和依據(jù)，是由于試驗樣品的實驗設(shè)計內(nèi)容較為復(fù)雜，很難在該指導(dǎo)原則中詳細(xì)描述。目前試驗樣品的實驗設(shè)計可以參考ICH Q1D“新原料藥和制劑穩(wěn)定性試驗的括號法和矩陣法設(shè)計”[9]。
隨著生物技術(shù)的不斷發(fā)展，生物制品的概念不斷擴(kuò)充，新型生物制品在生產(chǎn)和質(zhì)量控制中均與傳統(tǒng)生物制品存在較大差異。這對相關(guān)的指導(dǎo)原則的制修訂是一個挑戰(zhàn)。指導(dǎo)原則應(yīng)具有技術(shù)的前瞻性，也需要不斷更新，以滿足各種生物制品管理需求。
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來源：中國藥品標(biāo)準(zhǔn)
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