中文字幕一级黄色A级片|免费特级毛片。性欧美日本|偷拍亚洲欧美1级片|成人黄色中文小说网|A级片视频在线观看|老司机网址在线观看|免费一级无码激情黄所|欧美三级片区精品网站999|日韩av超碰日本青青草成人|一区二区亚洲AV婷婷

生物制品中的病毒防護和去除一直以來是各監(jiān)管部門重點關(guān)注的內(nèi)容[1,2,3,4]，根據(jù)《生物組織提取制品和真核細胞表達制品的病毒安全性評價的技術(shù)審評一般原則》的要求，生產(chǎn)工藝中必須包含病毒去除/滅活的有效工藝步驟，若不包含，則應(yīng)根據(jù)不同品種的特點增加相應(yīng)的處理方法，并不得改變制品原有的質(zhì)量。對于從生物組織中提取制成的生物制品，在工藝上應(yīng)有2個有效工藝步驟從機制上進行互補，對于非脂包膜病毒，應(yīng)不少于1個工藝有效步驟有效去除和/或滅活作用；對于通過真核細胞表達的生物制品，要求至少有一個工藝有效步驟，能夠有效去除和/或滅活非脂包膜病毒。

病毒去除工藝的方法有很多種，常見的有低pH滅活、熱力消毒法、輻射消毒法、化學(xué)消毒法、多因子協(xié)同消毒法、免疫中和消毒法、過濾法、層析法等。

常用的基于真核細胞表達的生物制品的病毒滅活工藝包括低pH滅活和納濾去病毒工藝，根據(jù)ICH Q5A和《血液制品去除／滅活病毒技術(shù)方法及驗證指導(dǎo)原則》中的要求，這些步驟在病毒滅活中累積去除率在6個log的水平，對于病毒滅活工藝和產(chǎn)品安全性考慮僅僅實現(xiàn)了部分的能力，而對于病毒去除的工藝要求和安全性要求來說，更期望有更多的方法實現(xiàn)在工藝生產(chǎn)中的病毒去除能力。

《生物制品病毒清除驗證的要求及工藝解決方案》中介紹，各種層析的病毒去除能力在2~5個log的水平，由于層析工藝是大部分生物制品產(chǎn)品工藝中會用到的，如抗體工藝親和和陰陽離子交換層析的工藝，再結(jié)合低pH滅活與納濾除病毒的工藝，如此，抗體工藝中的病毒去除能力可達到約20個log下降的水平，由此可以充分保證產(chǎn)品在病毒污染防控工藝的能力，有效地實現(xiàn)產(chǎn)品在此方面的安全性。

圖1. 病毒清除結(jié)果匯總

當然，由于不同工藝的特點，不同的生物制品工藝需要考慮不同的滅活方式的組合，所用到的緩沖液體系、參數(shù)、控制范圍也不盡相同。因此不同工藝應(yīng)當根據(jù)自身的特點選擇合適的工藝方法和參數(shù)，并對這些工藝進行工藝表征研究，以保證病毒滅活或去除效果的有效性。

對殘留病毒檢測是一個檢測能力很差的項目，常見的病毒滴度檢測的系統(tǒng)誤差也很大，現(xiàn)在很多企業(yè)使用qPCR[5]的方法進行的檢測也具有一定的局限性，這一類的質(zhì)量屬性屬于FDA提到的“檢測不能有效表征產(chǎn)品屬性”[6]的情況，如病毒的分布不均勻、取樣的代表性很差、檢測方法系統(tǒng)誤差較大等，因此工藝上需要對工藝參數(shù)進行非常嚴格的控制，工藝研究階段對最差條件、工藝可接受范圍、日常運行范圍等均需要開展研究，在生產(chǎn)中對各類參數(shù)進行嚴格控制以保證工藝的有效實現(xiàn)。

通過對病毒滅活/去除工藝所用到的設(shè)備進行充分的確認、對病毒滅活/去除工藝的驗證、對病毒對日常參數(shù)的有效控制以及必要的再驗證是保證病毒滅活/去除工藝有效的基本方法。

病毒滅活/去除工藝的驗證通常需要考慮以下幾個要點：

 1 毒種的選擇：根據(jù)ICH Q5A、《生物組織提取制品和真核細胞表達制品的病毒安全性評價的技術(shù)審評一般原則》、《血液制品去除／滅活病毒技術(shù)方法及驗證指導(dǎo)原則》的要求，需要選擇不同類型的指示病毒，對于層析系統(tǒng)用于證明病毒滅活效果所針對的病毒類型需要進行充分考慮，如親和層析通常在低pH滅活工藝之前，涉及的病毒種類可能更為豐富，并沒有要求所有的病毒類型在一步工藝中均能有效去除，因此需要考慮毒種類型，《生物制品病毒清除驗證的要求及工藝解決方案》中提到的病毒可以作為一個參考。

 2 毒種濃度的考慮：根據(jù)《生物制品病毒清除驗證的要求及工藝解決方案》給出的經(jīng)驗值，不同的層析系統(tǒng)可以下降2~5個log的水平，通常我們建議毒種濃度應(yīng)當大于目標值至少1個log，以防止去除后病毒無法檢出的情況，進而無法計算實際去除效果。

 3 病毒去除參數(shù)的考察：一定應(yīng)考慮“最差條件”的方法，一般可能包括最高的病毒滴度、最短的時間、如有溫度要求時的最低或最高的溫度（高溫可能導(dǎo)致目標蛋白的不穩(wěn)定）、最大上樣體積和蛋白濃度等。

 4 病毒滅活/去除驗證不得在商業(yè)化規(guī)模廠房進行加樣（病毒）驗證，因此采用小規(guī)模的實驗進行，因此對于病毒滅活/去除的小規(guī)模至商業(yè)化放大時工藝一致性的考慮應(yīng)當有足夠的評估，并對不一致的方面進行討論，必要時需要在商業(yè)化條件下進行參數(shù)考察（不加入病毒）。

 5 病毒滅活/去除驗證雖然是實驗室規(guī)模的研究，但為工藝驗證中的重要環(huán)節(jié)，應(yīng)在QA監(jiān)管的條件下進行，病毒滅活/去除的驗證報告應(yīng)當有質(zhì)量負責(zé)人的批準。