中文字幕一级黄色A级片|免费特级毛片。性欧美日本|偷拍亚洲欧美1级片|成人黄色中文小说网|A级片视频在线观看|老司机网址在线观看|免费一级无码激情黄所|欧美三级片区精品网站999|日韩av超碰日本青青草成人|一区二区亚洲AV婷婷

雜質(zhì)的來源分析

 

對藥物雜質(zhì)研究時引入“質(zhì)量源于設(shè)計( Quality byDesign，QbD)”的理念，可在藥物生產(chǎn)之前根據(jù)具體工藝的合成機制、起始物料及各中間體的基本結(jié)構(gòu)，初步勾畫出產(chǎn)品的雜質(zhì)譜。

 

雜質(zhì)來源分析是制定藥物雜質(zhì)控制策略的基礎(chǔ)，尤其是在對毒性雜質(zhì)來源分析時，應(yīng)分析所有合成和生產(chǎn)工藝中的試劑、中間體、副產(chǎn)物，推測可能產(chǎn)生的潛在雜質(zhì)以及分析實際存在的雜質(zhì)。在原料藥合成結(jié)束后，藥物的活性化合物雖然經(jīng)過毒性分析已不含有“警示結(jié)構(gòu)”(alerting structure)，但是在生產(chǎn)過程中使用到含有警示結(jié)構(gòu)的化合物則還需考慮其遺傳毒性。

 

 

1、雜質(zhì)的分類和存在的問題

 

任何影響藥物純度的物質(zhì)統(tǒng)稱為雜質(zhì)。在藥物研發(fā)中雜質(zhì)的研究貫穿其整個階段，是保證藥品質(zhì)量的重要內(nèi)容。藥品中的雜質(zhì)分類通常有四種方法：

①按理化性質(zhì)分類：有機雜質(zhì)、無機雜質(zhì)及殘留溶劑。

 

②按來源分類：工藝雜質(zhì)( 包括合成中未反應(yīng)完全的反應(yīng)物及試劑、中間體、副產(chǎn)物等)、降解產(chǎn)物、從反應(yīng)物及試劑中混入的雜質(zhì)等。

 

③按毒性分類：毒性雜質(zhì)和普通雜質(zhì)等。

 

④按化學(xué)結(jié)構(gòu)分類：其它甾體、其它生物堿、幾何異構(gòu)體、光學(xué)異構(gòu)體和聚合物等。雜質(zhì)的存在對藥物的安全性和有效性有很大的影響，如何制定雜質(zhì)的限度也是藥物研發(fā)過程中一個非常敏感的問題。目前國內(nèi)在藥物雜質(zhì)研究中存在的主要問題是“雜質(zhì)限度制訂的依據(jù)不充分”。研制單位通常是根據(jù)多批樣品的研究結(jié)果確定，或憑所謂的“經(jīng)驗”制訂。特別是方法學(xué)研究不全面，沒有對雜質(zhì)進行有效地分析，并進行定性研究，導(dǎo)致雜質(zhì)研究不完善，成品與國外產(chǎn)品的質(zhì)量差別較大。

 

2、一般要求

 

藥品的開發(fā)需遵循三個原則：安全、有效和質(zhì)量可控。因此，在制訂質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中雜質(zhì)的限度時，首先應(yīng)從安全性和有效性方面考慮，尤其對具有藥理活性或毒性的雜質(zhì)，要嚴(yán)格控制其限度。其次，應(yīng)考慮生產(chǎn)的可行性及批與批之間的正常波動，以及藥物本身的穩(wěn)定性。在保證安全和有效的前提下，根據(jù)工藝的波動情況制定合理的限度。此外，在藥物研發(fā)過程中不同藥物或者同一藥物在不同研究階段的側(cè)重點是不一樣的。因此，其雜質(zhì)研究也各具特點，需要根據(jù)這些具體情況分別對待。

 

通常，可以根據(jù)藥物規(guī)定的劑量確定降解產(chǎn)物的報告閾值、鑒定閾值和界定閾值，以此來確定雜質(zhì)的限度。另外，亦可通過已知雜質(zhì)的毒性數(shù)據(jù)，或其毒性研究結(jié)果來確定雜質(zhì)的限度。

 

（1） ICH 的一般要求

在確定了藥物的劑量后，可以根據(jù)降解產(chǎn)物的閾值來制訂雜質(zhì)的限度。此時，可參照ICH( 人用藥品注冊技術(shù)要求國際協(xié)調(diào)會) 的相關(guān)要求制訂雜質(zhì)限度。

 

如，按ICH 要求，對于新的原料藥，每日最大劑量大于2 g 時，單個雜質(zhì)的界定閾值為0.05％ ；每日最大劑量不大于2 g 時雜質(zhì)的界定閾值0.1％或1 mg( 按嚴(yán)格的要求定)。當(dāng)一個原料藥的每日最大劑量為1.5 g 時，如按界定閾值0.1％計，則雜質(zhì)的絕對攝入量為1.5 g×0.1％ =1.5 mg，大于界定閾值1 mg ；

 

如按閾值1 mg 計，則雜質(zhì)的限度值為1 mg÷1.5 g×100％ =0.07％，與界定閾值(0.1％ )不一致。在這種情況下，制訂雜質(zhì)限度的原則是“按嚴(yán)格的要求定”，即雜質(zhì)限度應(yīng)訂為0.07％。

 

當(dāng)然ICH 只是一般的要求，對于特殊雜質(zhì)( 具有一定活性) 或雜質(zhì)限度超出ICH 的要求時，應(yīng)進行相關(guān)的安全性研究或根據(jù)文獻數(shù)據(jù)，以判斷限度的合理性。

 

（2） 已知雜質(zhì)化合物的毒性數(shù)據(jù)

對于已知雜質(zhì)化合物，可參考相關(guān)的文獻，或一些數(shù)據(jù)庫( 如www.discoveryGate.com 網(wǎng)站) 查得其毒性數(shù)據(jù)，并根據(jù)藥品臨床擬用的劑量推算藥物的安全限度。

 

比如，雜質(zhì)苯肼的臨床主要毒性反應(yīng)為急性血管內(nèi)出血，內(nèi)臟器官損害包括肝、腎、心、骨髓和中樞神經(jīng)系統(tǒng)等的多發(fā)性損害，高濃度還可引起肺組織損害；即使作為苯肼衍生物，也具有潛在的致癌性風(fēng)險。文獻[3] 顯示，雄性鵪鶉靜注苯肼0.6、6、60 mg/kg，給藥后24 h 和72 h 均產(chǎn)生明顯的溶血反應(yīng)，并伴有淋巴細胞增多、單核細胞減少和嗜酸性細胞減少。因此，對于某些藥物中的苯肼雜質(zhì)，應(yīng)進行必要的控制。人體試驗或用藥中的苯肼總量

 

應(yīng)不高于0.05 mg/kg。若人體最大用藥劑量為2 g時，產(chǎn)品中如含有該雜質(zhì)，按人體重60 kg 計，其限度值為0.05 mg/kg×60 kg÷2 g×100％ =0.15％。

 

（3）根據(jù)安全性的研究結(jié)果推算

對于沒有安全性數(shù)據(jù)的雜質(zhì)，需要進行安全性試驗，然后根據(jù)雜質(zhì)的NOAEL( 未觀察到毒性反應(yīng)的劑量水平，no adverse effect level) 數(shù)據(jù)進行推算。

 

一般情況可采用以下方法：

 

①對單個雜質(zhì)進行毒理學(xué)研究，確定其NOAEL，制訂該雜質(zhì)的限度如，某創(chuàng)新藥臨床前試驗樣品中雜質(zhì)A 的限度為0.34％，每天的最大用量擬定為10 mg。其臨床研究用藥，申報單位將雜質(zhì)A 限度確定為0.5％。這一限度不但超過了ICH Q3 規(guī)定的常規(guī)雜質(zhì)限量標(biāo)準(zhǔn)( 0.1％ )，也超過了臨床前試驗樣品中雜質(zhì)A0.34％的限度。因此，在該品種的審評中，藥審中心建議提供該雜質(zhì)限度確定的依據(jù)。

 

研究者對此進行了說明，其推算過程如下：該藥在大鼠重復(fù)給藥6 個月的毒性試驗中，無毒性反應(yīng)劑量為26.5 mg·kg-1·d-1，則雜質(zhì)A 的實際用量為26.5×0.34％ =0.09 mg·kg-1·d-1。通過動物類比法轉(zhuǎn)換為0.09 mg·kg-1·d-1×6=0.54 mg·/m-2·d-1( 大鼠在人體中mg/kg 劑量的轉(zhuǎn)換因子為6)，再用FDA 轉(zhuǎn)換標(biāo)準(zhǔn)( 人體中mg/kg 與mg/m2 的轉(zhuǎn)換因子為37)，得出相當(dāng)于60 kg 的人體耐受雜質(zhì)A 的量為0.54×60÷37=0.88 mg/d。

 

考慮到該新藥在臨床研究中的最大給藥劑量為10 mg，若按0.5％的雜質(zhì)含量計算，每日的雜質(zhì)A 最大劑量為0.05 mg/d，僅為雜質(zhì)A無毒性反應(yīng)劑量0.88 mg/d 的1/17，因此雜質(zhì)A 的限度訂為0.5％是可行的。

 

②根據(jù)毒理學(xué)實驗樣品雜質(zhì)含量情況進行推算，制訂出雜質(zhì)的限度如，某個藥物口服給藥的每日最大劑量為60mg，相當(dāng)于一個體重60 kg 的人給藥劑量為1mg/kg。在13 周犬的口服給藥毒理學(xué)研究中，確定其NOAEL 為2 mg/kg。

 

根據(jù)該批樣品中雜質(zhì)A 的含量為0.1％計算，雜質(zhì)A 最大安全性限度為2 mg/kg×0.1％ =2 μg/kg，換算到人體的雜質(zhì)A 安全劑量約為1μg/kg( 犬在人體中mg/kg 劑量的轉(zhuǎn)換因子為1.8)，則雜質(zhì)A 的限度為1 μg/kg÷1 mg/kg×100％=0.1％。

 

以上方法只是一個參考，研究者可根據(jù)研究結(jié)果綜合考慮，選擇合理的方法，制定科學(xué)、合理的雜質(zhì)限度，當(dāng)然不同類別的藥物雜質(zhì)限度的研究有所不同。

 

分析方法 

 

分析方法的選擇直接關(guān)系到雜質(zhì)測定結(jié)果的專屬性與準(zhǔn)確性，因此，在進行雜質(zhì)研究時首要問題是選擇合適的雜質(zhì)分析方法。

 

1、分析方法的選擇 

 

（1）有機雜質(zhì)的分析方法 

 

有機雜質(zhì)的檢測方法包括化學(xué)法、光譜法、色譜法等，因藥物結(jié)構(gòu)及降解產(chǎn)物的不同采用不同的檢測方法。通過合適的分析技術(shù)將不同結(jié)構(gòu)的雜質(zhì)進行分離、檢測，從而達到對雜質(zhì)的有效控制。隨著分離、檢測技術(shù)的發(fā)展與更新，高效、快速的分離技術(shù)與靈敏、穩(wěn)定、準(zhǔn)確、適用的檢測手段相結(jié)合，幾乎所有的有機雜質(zhì)均能在合適的條件下得到很好的分離與檢測。

 

在質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中，目前普遍采用的雜質(zhì)檢測方法主要為高效液相色譜法（High Performance Liquid Chromatography；HPLC）、薄層色譜法(Thin Layer Chromatography；TLC)、氣相色譜法(Gas Chromatography；GC)和毛細管電泳法（Capillary Electrophoresis；CE）。應(yīng)根據(jù)藥物及雜質(zhì)的理化性質(zhì)、化學(xué)結(jié)構(gòu)、雜質(zhì)的控制要求等確定適宜的檢測方法。

 

由于各種分析方法均具有一定的局限性，因此在進行雜質(zhì)分析時，應(yīng)注意不同原理的分析方法間的相互補充與驗證，如HPLC與TLC及HPLC與CE的互相補充，反相HPLC系統(tǒng)與正相HPLC系統(tǒng)的相互補充，HPLC不同檢測器檢測結(jié)果的相互補充等。 

 

（2）無機雜質(zhì)的分析方法 

 

無機雜質(zhì)的產(chǎn)生主要與生產(chǎn)工藝過程有關(guān)。由于許多無機雜質(zhì)直接影響藥品的穩(wěn)定性，并可反映生產(chǎn)工藝本身的情況，了解藥品中無機雜質(zhì)的情況對評價藥品生產(chǎn)工藝的狀況有重要意義。對于無機雜質(zhì)，各國藥典都收載了經(jīng)典、簡便而又行之有效的檢測方法。

 

對于成熟生產(chǎn)工藝的仿制，可根據(jù)實際情況，采用藥典收載的方法進行質(zhì)量考察及控制。對于采用新生產(chǎn)工藝生產(chǎn)的新藥，鼓勵采用離子色譜法及電感耦合等離子發(fā)射光譜－質(zhì)譜（ICP-MS）等分析技術(shù)，對產(chǎn)品中可能存在的各類無機雜質(zhì)進行定性、定量分析，以便對其生產(chǎn)工藝進行合理評價，并為制定合理的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提供依據(jù)。 

 

通常情況下，不揮發(fā)性無機雜質(zhì)采用熾灼殘渣法進行檢測。某些金屬陽離子雜質(zhì)（銀、鉛、汞、銅、鎘、鉍、銻、錫、砷、鋅、鈷與鎳等）籠統(tǒng)地用重金屬限度檢查法進行控制。

 

因在藥品生產(chǎn)中遇到鉛的機會較多，且鉛易積蓄中毒，故作為重金屬的代表，以鉛的限量表示重金屬限度。如需對某種（些）特定金屬離子或上述方法不能檢測到的金屬離子作限度要求，可采用專屬性較強的原子吸收分光光度法或具有一定專屬性的經(jīng)典比色法（如采用藥典已收載的鐵鹽、銨鹽、硒等的檢查法檢測藥品中微量鐵鹽、銨鹽和硒等雜質(zhì)）。

 

雖然重金屬檢查法可同時檢測砷，但因其毒性大，且易帶入產(chǎn)品中，故需采用靈敏度高、專屬性強的砷鹽檢查法進行專項考察和控制，各國藥典收載的方法已歷經(jīng)多年驗證，行之有效，應(yīng)加以引用。 

 

由于硫酸根離子、氯離子、硫離子等多來源于生產(chǎn)中所用的干燥劑、催化劑或pH調(diào)節(jié)劑等，考察其在產(chǎn)品中的殘留量，可反映產(chǎn)品純度，故應(yīng)采用藥典中的經(jīng)典方法進行檢測。如生產(chǎn)中用到劇毒物（如氰化物等），須采用藥典方法檢測可能引入產(chǎn)品中的痕量殘留物。 

 

對于藥典尚未收載的無機雜質(zhì)（如磷酸鹽、亞磷酸鹽、鋁離子、鉻離子等）的檢測，可根據(jù)其理化特性，采用具有一定專屬性、靈敏度等的方法，如離子色譜法、原子吸收分光光度法、比色法等。 

 

2、分析方法的驗證 

 

雜質(zhì)檢測方法的驗證應(yīng)參照相關(guān)的技術(shù)指導(dǎo)原則進行，重點在于專屬性和靈敏度的驗證。專屬性系指在其它成分可能共存的情況下，采用的方法能準(zhǔn)確測定出被測雜質(zhì)的特性。檢測限是反映分析方法靈敏度的一個重要指標(biāo)，所用分析方法的檢測限一定要符合質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中對雜質(zhì)限度的要求，最低檢測限不得大于該雜質(zhì)的報告限度。 

 

為驗證雜質(zhì)分析方法的專屬性，對于原料藥，可根據(jù)其合成工藝，采用各步反應(yīng)的中間體（尤其是后幾步反應(yīng)的中間體）、立體異構(gòu)體、粗品、重結(jié)晶母液等作為測試品進行系統(tǒng)適用性研究，考察產(chǎn)品中各雜質(zhì)峰及主成分峰相互間的分離度是否符合要求，從而驗證方法對工藝雜質(zhì)的分離能力。 

 

為了考察方法能否有效檢測出原料藥或制劑中的降解產(chǎn)物，還可根據(jù)藥物的化學(xué)結(jié)構(gòu)特點、制劑的處方與工藝、儲存條件等選用合適的酸、堿、光、熱、氧化反應(yīng)等加速破壞性試驗來驗證分析方法的專屬性，必要時可采用二極管陣列檢測器、質(zhì)譜檢測器等檢測峰的純度。

 

因為在強制降解試驗條件下產(chǎn)生的降解產(chǎn)物較藥品貨架期產(chǎn)生的降解產(chǎn)物復(fù)雜、未知雜質(zhì)多，分離難度大，上述分析方法可有效地顯示各色譜峰的純度，以免因分離度不符合要求，導(dǎo)致分析結(jié)果的不準(zhǔn)確。

 

如不具備檢測峰純度的試驗條件，可通過適當(dāng)調(diào)整流動相的組成或比例使各色譜峰的相對保留時間發(fā)生改變，用同一份經(jīng)加速破壞試驗的供試品溶液進樣，然后比較流動相調(diào)整前后雜質(zhì)峰的個數(shù)；也可采用TLC法比較同一份經(jīng)加速破壞試驗的供試品溶液在不同展開系統(tǒng)下的斑點個數(shù)及位置，以此佐證雜質(zhì)分析方法的專屬性。 

 

強制降解試驗對于未知雜質(zhì)的分離度考察是非常必要的，其目的主要是提供關(guān)于雜質(zhì)（特別是降解物）與主成分的分離情況、樣品穩(wěn)定性及降解途徑等重要信息。在試驗過程中，應(yīng)注意破壞性試驗要適度，應(yīng)著重考察敏感條件。

 

如產(chǎn)品在一定條件下穩(wěn)定，則無必要再提高條件的劇烈程度進行重復(fù)試驗。破壞試驗的程度暫無統(tǒng)一要求，一般以強力破壞后主成分的含量仍占絕大部分為宜。此時已產(chǎn)生了一定量的降解產(chǎn)物，與樣品長期放置的降解情況相似，考察此情況下的分離度更具有實際意義。

 

要達到這種破壞程度，需要在研究過程中進行摸索，先通過初步試驗了解樣品對光、熱、濕、酸、堿、氧化條件的基本穩(wěn)定情況，然后進一步調(diào)整破壞性試驗條件（如光照強度、酸堿濃度、破壞的時間、溫度等），以得到能充分反映降解產(chǎn)物與主成分分離的結(jié)果和圖譜。

 

另外，通過比較試驗前后主峰面積的變化，還可粗略估算降解物對主成分的相對響應(yīng)因子，了解樣品在各種條件下的穩(wěn)定性，為包裝及貯藏條件的選擇等提供信息。對于性質(zhì)相對穩(wěn)定的藥品，如有充分的文獻依據(jù)或試驗數(shù)據(jù)，則可以免做強制降解試驗。 

 

3、有機雜質(zhì)的定量方法 

 

有機雜質(zhì)的檢測一般多采用HPLC法，有時也采用TLC、GC等其它方法。

 

如采用HPLC法，須采用峰面積法，具體定量方法有

 

①外標(biāo)法（雜質(zhì)對照品法）、

 

②加校正因子的主成分自身對照法、

 

③不加校正因子的主成分自身對照法、

 

④峰面積歸一化法。

 

①法定量比較準(zhǔn)確，采用時應(yīng)對對照品進行評估和確認，并制訂質(zhì)量要求。

 

②法應(yīng)對校正因子進行嚴(yán)格測定，僅適用于已知雜質(zhì)的控制。

 

③法的前提是假定雜質(zhì)與主成分的響應(yīng)因子基本相同。一般情況下，如雜質(zhì)與主成分的分子結(jié)構(gòu)相似，其響應(yīng)因子差別不會太大。

 

④法簡便快捷，但因各雜質(zhì)與主成分響應(yīng)因子不一定相同、雜質(zhì)量與主成分量不一定在同一線性范圍內(nèi)、儀器對微量雜質(zhì)和常量主成分的積分精度及準(zhǔn)確度不相同等因素，所以在質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中采用有一定的局限性。 

 

有關(guān)物質(zhì)中包括已知雜質(zhì)和未知雜質(zhì)。已知雜質(zhì)對主成分的相對響應(yīng)因子在0.9-1.1范圍內(nèi)時，可以用主成分的自身對照法計算含量，超出0.9-1.1范圍時，宜用雜質(zhì)對照品法計算含量，也可用加校正因子的主成分自身對照法。理想的定量方法為已知雜質(zhì)對照品法與未知雜質(zhì)不加校正因子的主成分自身對照法兩者的結(jié)合。研究人員可根據(jù)實際情況選用合適的定量方法。 

 

在選擇合適的分析方法時還應(yīng)考慮生產(chǎn)能力及質(zhì)量控制的可行性等技術(shù)因素。盡管在附件中規(guī)定的限度精確到小數(shù)點后第二位，但并不意味著在日常的生產(chǎn)質(zhì)控中所用的分析方法也要如此精確。如經(jīng)過必要的驗證，也可采用薄層色譜法等分析方法。在研發(fā)過程中，如果分析方法有改變，則應(yīng)進行方法改變前后所得分析結(jié)果的可比性研究。 

 

對于TLC法，通常采用雜質(zhì)對照品法和主成分自身對照法進行檢控制，后者僅限于雜質(zhì)斑點的顏色與主成分斑點顏色一致的情況下使用。