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色譜柱是高效液相色譜儀最主要的部件，被測物質(zhì)能否被很好的分離和測定，色譜柱的性能起著決定性的作用。因此，在日常工作中，應特別注意色譜柱的正確使用和維修保養(yǎng)，以延長色譜柱的使用壽命。

01 色譜柱的活化

反相色譜柱：使用新的C18柱時，先用甲醇或乙腈沖洗20-30個柱體積，然后用甲醇/乙腈：水（50:50）沖洗10個柱體積，然后再用流動相平衡10-30柱體積。

正相色譜柱：新柱用流動相平衡20-30個柱體積。

離子色譜柱（SAX, SCX）：新柱先用100%甲醇或乙腈沖洗20個柱體積，然后轉(zhuǎn)換到流動相平衡。

部分品牌的氨基柱和氰基柱是保存在正相流動相中，用于反相色譜時，先用異丙醇或乙醇沖洗色譜柱50-100個柱體積。

當用HILIC模式時，新柱用50倍柱體積50/50乙腈/水活化平衡，然后再用流動相平衡20個柱體積。

02 色譜柱的日常保存

反相柱：100%甲醇或乙腈保存。

正相柱：異丙醇或正己烷保存。

離子交換柱：100%甲醇，或大于40%的有機相保存。

切忌用緩沖鹽保存色譜柱。

03 色譜柱的清洗和再生

反相C18色譜柱

清洗：每天柱子使用完后，立刻沖洗，如果使用緩沖液，必須先用相同比例的有機相/水沖洗20個柱體積，然后再轉(zhuǎn)換到100%有機相沖洗20個柱體積。

再生：用100%水，甲醇，三氯甲烷，甲醇，100%水分別沖洗20個柱體積，在第一次用100%水時，進樣5次200 μL二氯亞砜DMSO。

正相色譜柱

清洗：每次清洗都用低流速起步，當檢測到柱壓穩(wěn)定在一定水平后再增加流速。先用10柱體積不含其它添加劑的流動相中的弱溶劑，如正己烷、氯仿等反沖色譜柱。再用20柱體積的諸如二氯甲烷或異丙醇等流動相中的強溶劑反沖色譜柱。

再生：用四氫呋喃，甲醇，四氫呋喃，二氯甲烷，正己烷分別沖洗20個柱體積。

離子色譜柱

清洗：用100%水沖洗30個柱體積去除鹽，然后用100%甲醇或乙腈沖洗20個柱體積后保存在50%甲醇或乙腈中。

再生：先用高濃度鹽的緩沖液清洗（濃度可以是5-10倍，不超過1M），然后再用100%水洗，100%乙腈或甲醇清洗，再用50%乙腈或甲醇保存。

04 色譜柱日常使用保養(yǎng)

使用預柱保護分析柱（硅膠在極性流動相/離子性流動相中有一定的溶解度）

注意色譜的pH范圍，大多數(shù)反相色譜柱的pH穩(wěn)定范圍是2-8

避免流動相組成及極性的劇烈變化

使用HPLC級試劑，流動相使用前必須經(jīng)脫氣和過濾處理

如果使用極性或離子性的緩沖溶液作流動相，應在實驗完畢將柱子沖洗干凈并保存在乙腈中

壓力升高是需要更換預柱的信號

確認流動相中緩沖鹽的溶解性

確認樣品在流動相中的溶解性

避免壓力的突變