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嘉峪檢測網(wǎng) 2022-07-14 07:05
標準物質(zhì)一直是藥品質(zhì)量控制特別是純度和含量分析的首選，但標準物質(zhì)的供需矛盾，如有些雜質(zhì)標準物質(zhì)不易獲取以及多個標準物質(zhì)同時使用所帶來的高昂檢測成本等限制了標準物質(zhì)的實際應(yīng)用。為解決這一問題，替代方法應(yīng)運而生，高效液相色譜(HPLC)校正因子法便是其中之一。
該方法最初主要用于HPLC有關(guān)物質(zhì)檢查時對于特定雜質(zhì)的定量，進而又逐漸用于中藥多指標含量的測定，發(fā)展至今已經(jīng)成為一項成熟的分析方法。
近年來，隨著國內(nèi)仿制藥一致性評價的深入開展，有關(guān)物質(zhì)作為藥品的關(guān)鍵質(zhì)量屬性已成為被評價的重要內(nèi)容之一，而在有關(guān)物質(zhì)申報資料中缺少校正因子的研究是藥品審評中心通知申請企業(yè)補充完善資料的一個主要原因，這使得校正因子的研究重回企業(yè)和科研單位的視線，成為被關(guān)注的焦點。
目前，國內(nèi)外有關(guān)校正因子在測定和應(yīng)用方面鮮有詳細的指導(dǎo)原則發(fā)表，因此本文綜述了近年來國內(nèi)外相關(guān)領(lǐng)域的研究進展，以期總結(jié)出校正因子在測定和應(yīng)用方面的一些規(guī)律和存在的問題，給企業(yè)提供更多的參考依據(jù)。
定義
在HPLC法定量測定中，通常所講的校正因子是某物質(zhì)i與所選定的參照物質(zhì)s的絕對校正因子之比，即相對校正因子，其計算公式如公式（1）。校正因子在各國藥典中均有應(yīng)用，只是表述方式不盡相同。
《中國藥典》與《歐洲藥典》(EP10.0)基本一致，使用校正因子(correction factor)的概念，差別在于國內(nèi)要求當已知雜質(zhì)對主成分的相對校正因子在0.9～1.1內(nèi)時，可以用主成分自身對照法計算雜質(zhì)的含量，超出這個范圍時宜用雜質(zhì)對照品或者加校正因子的主成分自身對照法計算雜質(zhì)的含量；而EP10.0中則規(guī)定校正因子在0.8～1.2時仍可使用主成分對照法計算雜質(zhì)含量。
《美國藥典》(USP)中給出了相對響應(yīng)因子(relativeresponse factor)的概念，從其各論中具體計算方法可以推導(dǎo)出相對響應(yīng)因子與相對校正因子是互為倒數(shù)的關(guān)系，在使用時需要注意將待測峰面積(A)與校正因子相乘或與相對響應(yīng)因子(f)相除以校正峰面積。
c為待測物和參比物溶液濃度
另外校正因子的使用也有一定的范圍，如校正因子在0.2～5.0的范圍以外時，表明雜質(zhì)與主成分的UV吸收相差過大，校正因子的作用會受到顯著影響，此時應(yīng)改變檢測波長等檢測條件，使校正因子位于上述范圍內(nèi)，或使用結(jié)構(gòu)或UV吸收與該雜質(zhì)接近的另一標準物質(zhì)為參照物質(zhì)(如對照品易于獲得、標準已采用對照品外標法定量的另一特定雜質(zhì))，重新確立校正因子；如校正因子仍無法調(diào)節(jié)至適當范圍，需考慮采用雜質(zhì)對照品外標法等適當方法定量。
測定方法
HPLC-UV/PDA方法
單點法
制備適當濃度的待測物對照品溶液和參比物對照品溶液，分別注入液相色譜儀進行測定，按照公式1計算得到校正因子。
該方法的優(yōu)點是操作簡單，但由于無法排除樣品處理或者檢測過程所引入的偶然誤差，且沒有考慮到樣品濃度對測定結(jié)果的影響等因素，因此該方法主要用于預(yù)實驗時粗略的估計實驗結(jié)果，在校正因子定值時實際應(yīng)用較少。
多點法
制備適當?shù)母?、中、低三水平濃度的待測物對照品溶液和參比物對照品溶液，如果是加校正因子的主成分自身對照法計算雜質(zhì)含量用，則建議待測物和參比物濃度涵蓋定量限和標準限度，分別注入液相色譜儀進樣測定，按照公式1計算得到多個校正因子值，求取平均值作為校正因子。目前該測定方法在中藥多指標對照品替代測定中應(yīng)用較為廣泛，但在雜質(zhì)含量確定方面應(yīng)用較少。
標準曲線法
目前，校正因子的測定最常用的方法還是標準曲線測定法。具體操作如下：
精密稱取待測物對照品和參比物對照品各適量，分別配制成不同濃度的系列溶液，如果是加校正因子的主成分自身對照法計算雜質(zhì)含量用，則建議待測物和參比物濃度涵蓋定量限和標準限度，分別注入液相色譜儀進樣測定，以濃度c為橫坐標，峰面積A為縱坐標，分別繪制參比物和待測物標準曲線A=kc+b，當b=0時，可以推導(dǎo)出兩者的相對校正因子為二者斜率k之比，即公式（2）：
其中k分別為參比物和待測物標準曲線的斜率。
聯(lián)立方程法
前述3種HPLC方法使用的前提就是待測物和參比物最好備有色譜純的化學(xué)試劑或標準物質(zhì)，即使沒有色譜純，也要確知物質(zhì)的百分含量。但在藥物研發(fā)的早期，很難得到已知雜質(zhì)的純品，因此，Yu提出了一種無純樣色譜校正因子的測定方法。
根據(jù)校正因子與峰面積成正比(校正因子是常數(shù)的條件)的前提，設(shè)一“標”樣僅含A、B二組分且都出峰，各組分的量之和為一定值(如A、B兩組分含量之和為100%)，因而可建立各組分的量之和與校正因子、峰面積三者之關(guān)聯(lián)式，另一“標”樣亦僅含A、B二組分，但峰面積有差異(即二組分含量有異)，同樣可建立三者關(guān)聯(lián)式，解兩個關(guān)聯(lián)式即可得各組分校正因子。由此推論有幾個組分就要建立相應(yīng)個數(shù)的關(guān)聯(lián)式求解而得到各組分的校正因子。
該方法為早期檢測研發(fā)中帶有多個未知校正因子組分的樣品提供了一個新的解決思路，但是受早期研發(fā)樣品中可能還含有很多未知雜質(zhì)等因素的限制，目前可以檢索到該方法的實際應(yīng)用較少。
紫外吸光系數(shù)比值法
結(jié)合文獻，Xu等首次推導(dǎo)出了公式（3），證明了兩物質(zhì)的相對校正因子是兩者的百分吸光系數(shù)(E)之比。
因此可按吸光系數(shù)測定的相關(guān)技術(shù)要求，如對照品級別的標準物質(zhì)、高中低三水平濃度測定、吸光度介于0.3～0.8之間、至少5臺不同型號的UV分光光度計、2份供試液同時平行制備測定、同臺儀器2份供試液的平行測定結(jié)果不超過±0.5%等，以流動相為溶劑，測定待測物和參比物在檢測波長處的紫外吸收系數(shù)E1%1cm，計算比值，求得校正因子。
HPLC聯(lián)用其他方法
HPLC-UV/PDA串聯(lián)其他檢測器方法
為解決HPLC-UV/PDA檢測器方法有時很難獲得待測物和參比物標準物質(zhì)的難題，有研究者提出通用型質(zhì)量檢測器技術(shù)與PDA或UV檢測器串聯(lián)以確定校正因子的方法。這種通用型質(zhì)量檢測器產(chǎn)生的峰面積與相應(yīng)的進入檢測器的分析物的量成正比關(guān)系，而與分析物的結(jié)構(gòu)特性無關(guān)，從而可以得出進入檢測器中的待測物與參比物的相對數(shù)量關(guān)系，再結(jié)合UV/PDA檢測器得到的峰面積，由公式（1）可推導(dǎo)出待測物相對于參比物的校正因子，如公式（4）所示：
在藥物早期研發(fā)過程中使用此方法可以快速方便的測定特定雜質(zhì)的相對響應(yīng)因子，不需要進行雜質(zhì)的分離純化，也不需要雜質(zhì)標準品，甚至可以不需要知道分析物的濃度。
目前可與紫外檢測器串聯(lián)測定相對校正因子的通用型質(zhì)量檢測器主要有蒸發(fā)光散射檢測器(ELSD)、電噴霧檢測器(CAD)、化學(xué)發(fā)光氮檢測器(CLND)、示差折光檢測器(RI)等。其中ELSD、CAD，其檢測的峰面積與進入檢測器的分析物的質(zhì)量成正比關(guān)系；CLND檢測的峰面積與分析物中含氮的摩爾數(shù)成正比關(guān)系。
通過這些信息可以得出進入檢測器中的待測物與參比物的相對數(shù)量關(guān)系，再結(jié)合紫外吸收檢測器得到的待測物與參比物峰面積，可計算出特定雜質(zhì)相對于參比物的校正因子。目前僅檢索到國外的相關(guān)研究工作，未見國內(nèi)相關(guān)報道。
HPLC-UV/PDA檢測器結(jié)合核磁定量方法
雖然紫外檢測器與通用型質(zhì)量檢測器串聯(lián)的HPLC法在測定雜質(zhì)相對校正因子時方便、快速，但這些通用型的質(zhì)量檢測器都各有局限性。
如ELSD受精密度、線性動態(tài)范圍、需要揮發(fā)性流動相等因素的局限，且ELSD的響應(yīng)取決于探測器中發(fā)生的去溶劑化過程所產(chǎn)生的粒子的數(shù)量和性質(zhì)；CLND只能測定含氮化合物，但不能夠測定結(jié)構(gòu)中包含—N=N—和—N—N—結(jié)構(gòu)的化合物，也不能夠用含氮的流動相、流動相中不能有非揮發(fā)性的緩沖鹽；CAD的流動相中也不能有非揮發(fā)性的緩沖鹽，而且只適用于在電噴霧電離條件下能夠攜帶電荷的化合物，RI受靈敏度、重現(xiàn)性等問題限制且不能用于梯度洗脫。
NMR除具備檢測器串聯(lián)HPLC法的優(yōu)點外，不受上述檢測器的流動相、緩沖液等色譜條件的限制，q-1H-NMR檢測的峰面積與分析物中相應(yīng)的氫的摩爾數(shù)成正比關(guān)系，可以作為含有質(zhì)子的化合物測定相對校正因子的通用質(zhì)量型檢測器，但前提是該化合物可溶解在合適的氘代溶劑中。于是Webster等建立了HPLC-UV與q-1H-NMR結(jié)合的方法測定特定雜質(zhì)的相對響應(yīng)因子(RRF)的方法。
1H-NMR檢測的峰面積與分析物中相應(yīng)的氫的摩爾數(shù)成正比關(guān)系，所以相對響應(yīng)因子的計算公式如下：
其中AUV為紫外檢測器的相應(yīng)峰面積；INMR為NMR譜圖中相應(yīng)氫的積分值；Mr為相對分子質(zhì)量；NH為化合物結(jié)構(gòu)中用于積分計算的相應(yīng)的氫的個數(shù)。
應(yīng)用
在有關(guān)物質(zhì)含量測定中的應(yīng)用
高效液相色譜法是目前藥品有關(guān)物質(zhì)檢查最常規(guī)的手段，使用高效液相色譜進行雜質(zhì)含量測定仍首推外標法，但該方法常常受到雜質(zhì)標準物質(zhì)獲得和供應(yīng)困難等因素的制約。
加校正因子的主成分自身對照法由于在日常檢驗中省去了雜質(zhì)標準物質(zhì)，又同時考慮了雜質(zhì)與主成分的響應(yīng)因子可能不同所引起的測定誤差，準確度較好，目前已被廣泛應(yīng)用。
《中國藥典》自2000年版在《高效液相色譜法》通則中增加了“加校正因子的主成分自身對照法”，同時各國藥典各論也在逐漸采用該方法替代簡單的主成分自身對照法，如《歐洲藥典》(EP10.0)和《中國藥典》(2015年版)均采用了加校正因子的主成分自身對照法檢測環(huán)丙沙星雜質(zhì)B、C、D、E的含量。
目前對于校正因子在有關(guān)物質(zhì)檢查中的應(yīng)用研究大致可以分為兩類。
第一類是測定特定藥品雜質(zhì)相對于主成分的校正因子，以完善主成分的質(zhì)量標準。如Zhao等采用自建的標準曲線法測定了注射用頭孢孟多酯鈉中雜質(zhì)A、C、D和E相對于頭孢孟多酯的校正因子；Qi等建立了加校正因子的主成分自身對照法測定吉非替尼原料藥中有關(guān)物質(zhì)的含量，其中采用標準曲線法測定了雜質(zhì)SM1、I、XV、SM2、XII、D和C相對于吉非替尼的校正因子；Guo等建立了HPLC加校正因子的主成分自身對照法同時測定琥珀酸索利那新原料藥中7種有關(guān)物質(zhì)的方法，其中采用標準曲線法測定了7種有關(guān)物質(zhì)相對于琥珀酸索利的校正因子。
從查閱的這些校正因子測定的文獻來看，目前校正因子的測定方法主要集中在標準曲線法。僅個別研究采用了多點法進行校正因子的測定，如Yan等配制了低、中、高3個濃度水平的對照品溶液，每個濃度平行制備3份樣品分別進樣分析，以均值作為有關(guān)物質(zhì)A、B、C、D相對埃索美拉唑鎂的校正因子，建立了加校正因子的主成分自身對照法測定埃索美拉唑鎂原料藥中有關(guān)物質(zhì)含量的HPLC法。
另一類則是針對目前校正因子在測定和使用方面的不足，對方法進行改進或者開發(fā)新的方法。如針對存在多個雜質(zhì)的藥品使用校正因子方法時可能存在雜質(zhì)定位困難的問題，Chen提出應(yīng)用定向降解主成分得到相應(yīng)雜質(zhì)進行定位，再采用加校正因子的主成分自身對照法對該雜質(zhì)進行定量的方法。
針對在藥物研發(fā)的早期，很難得到已知雜質(zhì)的純品用于校正因子測定的問題，Yu提出采用聯(lián)立方程組的方法測定無純樣色譜校正因子，也有人嘗試兩種檢測器串聯(lián)的HPLC法以解決這一難題，如Hong等建立了高效液相色譜法紫外檢測器與蒸發(fā)光散射檢測器串聯(lián)(HPLC-UV-ELSD)的方法測定格列美脲中有關(guān)物質(zhì)B和C的相對響應(yīng)因子；Sun等采用紫外檢測器和電噴霧檢測器串聯(lián)的高效液相色譜法(HPLC-UV-CAD)測定紫杉醇中8種有關(guān)物質(zhì)的相對響應(yīng)因子；Nuss‐baum等建立了紫外檢測器和化學(xué)發(fā)光氮檢測器串聯(lián)的高效液相色譜法(HPLC-UV-CLND)測定特定雜質(zhì)的相對響應(yīng)因子。
針對上述質(zhì)量型檢測器與紫外檢測器串聯(lián)測定校正因子的一些局限性，HPLC-UV與q-1H-NMR結(jié)合的方法測定特定雜質(zhì)的相對響應(yīng)因子的方法應(yīng)運而生。
Webster等在文獻的基礎(chǔ)上應(yīng)用HPLC-UV-CLND方法和新建立的HPLC-UVNMR方法分別測定了撲熱息痛、2-羥基喹啉、丹磺酰苯丙氨酸相對于2-喹啉酮的相對響應(yīng)因子，結(jié)果顯示兩個方法測定的相對響應(yīng)因子無明顯差異；除此之外，還利用了標準曲線法、HPLC-UV-CLND法和HPLCUV-NMR法測定了酸性除草劑中3種雜質(zhì)相對于2，4-D的相對響應(yīng)因子，結(jié)果顯示3種方法測定的相對響應(yīng)因子值無明顯差異。
Iqbal等利用傳統(tǒng)的標準曲線法和HPLC-UV-NMR的方法分別對萘普生中丙烯酸雜質(zhì)進行了相對響應(yīng)因子值測定，證明兩方法結(jié)果無顯著差異。
Liu等也利用傳統(tǒng)的標準曲線法和HPLC-UV-NMR法分別對頭孢唑林中10種雜質(zhì)的相對響應(yīng)因子進行了測定，并對兩種方法的不確定度進行了計算和比較，證明兩種方法的相對響應(yīng)因子值測定結(jié)果和不確定度均無明顯差異。
在中藥及其復(fù)方制劑多指標成分測定中的應(yīng)用
目前相對校正因子方法不僅應(yīng)用于藥品的有關(guān)物質(zhì)含量測定，而且廣泛應(yīng)用于活性成分特別是中藥及其復(fù)方制劑中多指標成分的測定。
其實，最早將校正因子方法引入活性成分含量測定的并非在中藥領(lǐng)域，2004年，Liu等選用穩(wěn)定物質(zhì)頭孢唑林作為參比物質(zhì)，通過HPLC方法測定該物質(zhì)與力達霉素之間的校正因子，然后通過參比物質(zhì)和校正因子來表征力達霉素標準品的量值，以解決不穩(wěn)定標準物質(zhì)量值傳遞的問題。但該方法并未在化學(xué)藥品活性成分含量測定中推廣，僅檢索到個別文獻應(yīng)用。
中藥屬于多成分協(xié)同作用，隨著分析技術(shù)的不斷進步，其質(zhì)量控制也逐漸向多指標精準測控轉(zhuǎn)變。然而很多天然產(chǎn)物標準物質(zhì)制備困難、價格昂貴，給標準物質(zhì)的供應(yīng)和使用單位都帶來巨大的壓力。
為解決這一矛盾，Wang等提出了“一測多評”的中藥控制理念，即在多指標質(zhì)量評價時，以藥材中某一有標準物質(zhì)供應(yīng)的典型組分為內(nèi)標，建立該組分與其他組分之間的相對校正因子，通過校正因子計算其他組分的含量。
Xie等將該方法拓展到以一種非藥材中成分，但是日常檢驗中易獲得標準物質(zhì)且穩(wěn)定的化合物作為替代對照品，測定替代對照品相對待測組分的校正因子，利用校正因子和替代對照品進行中藥中特定成分的含量的測定，該方法在很多文獻中被稱為“替代對照品法”。
無論是“一測多評”法還是“替代對照品”法，兩者的實質(zhì)都是在沒有待測成分標準物質(zhì)的前提下利用校正因子結(jié)合替代對照品測定待測成分的含量。其中一部分文獻校正因子的測定采用多點法，如He等以五味子醇甲為內(nèi)參物，采用多點法計算了五味子酯甲、五味子甲素和五味子乙素與五味子醇甲的相對校正因子，并進行了含量計算；Lu等以人參皂苷Rg3為內(nèi)標，計算了黑參中其余11種皂苷類成分的校正因子；Hou等以大黃素為內(nèi)標，計算了何首烏中其余3種成分的校正因子。
另外，為了減少多點法中偶然誤差對于均值帶來的巨大影響，近年來也逐漸有人開始采用標準曲線法，該方法中個別點的偏差對于校正曲線斜率影響較小，且無需逐個濃度計算相對校正因子，更加簡便高效。
如Liu等采用多點法和斜率校正法分別計算了元胡止痛系列制劑中4種成分的相對校正因子，兩種方法的計算結(jié)果基本一致；Zhang等用斜率校正法，以綠原酸為內(nèi)標，測定了甜葉菊中其他5種綠原酸類成分的相對校正因子。
目前該方法也已經(jīng)逐漸從研究走向成熟應(yīng)用，各國藥典中也有相應(yīng)收載，比如《歐洲藥典》(EP10.0)收載的大蒜粉質(zhì)量標準中，將大蒜辣素列為其控制指標，并采用羥苯丁酯作為大蒜辣素的替代對照品，從而解決了大蒜素不穩(wěn)定的難題；《中國藥典》(2015年版)一部黃連藥材含量測定項采用了以鹽酸小檗堿測定小檗堿、表小檗堿、黃連堿和巴馬汀4個生物堿成分的一測多評方法。
問題和小結(jié)
標準曲線法校正因子的測定
相對校正因子用于雜質(zhì)的定量或者中藥多組分活性成分的定量方法已經(jīng)得到廣泛的應(yīng)用，但是其在使用過程中還存在一些問題需要統(tǒng)一或者規(guī)范，其在中藥方面的應(yīng)用已經(jīng)有多人對相應(yīng)的技術(shù)要求進行過建議和總結(jié)，但在雜質(zhì)定量研究方面相關(guān)報道甚少，因此本文將文獻中相對校正因子在雜質(zhì)定量方面應(yīng)用存在的一些問題進行了總結(jié)。
曲線是否需要強制過原點
對于色譜方法，校正曲線的斜率b=0是一種理想的狀態(tài)，事實上由于每一臺儀器都有其檢測限度，需要待分析物達到一定濃度水平以后才能檢測出信號，以及溶劑干擾等系統(tǒng)誤差的存在，因此截距一般不會為0。
正的Y軸截距表示高濃度響應(yīng)的飽和度或響應(yīng)處有干擾存在，負的截距說明可能方法靈敏度有問題，或被分析物質(zhì)殘留在容器或者HPLC系統(tǒng)中。但是標準曲線法使用斜率求取校正因子的前提是假設(shè)截距b=0，由此可見無論是否對截距進行校正，這種方法對于相對校正因子的測定都會產(chǎn)生一定的誤差。
目前對于標準曲線法求校正因子的截距和斜率未檢索到明確的要求。因此文獻對于校正曲線的處理也有兩種方法，一種是將截距校正為0；大部分則未做校正。但校正因子在中藥方面的應(yīng)用中有一些相關(guān)要求的報道，如校正曲線相關(guān)系數(shù)r不得低于0.999，k/b值大于100時，b值可以忽略不計。
Zhao等還以實例證明在中藥多組分含量測定中采用截距校正后的曲線斜率求相對校正因子方法最為合理。但截距校正與否對校正因子計算會產(chǎn)生多大的影響，哪一種方式計算得到的雜質(zhì)含量更為準確未見文獻報道。
校正曲線濃度范圍的選擇
在進行雜質(zhì)定量方法驗證時，線性驗證是方法驗證中必不可少的一項內(nèi)容，由于在驗證過程中要分別建立雜質(zhì)和主成分濃度和響應(yīng)值之間的校正曲線，可以就此以兩校正曲線的斜率計算出相對校正因子，因此很多研究對于校正曲線濃度的范圍便遵從線性驗證的要求從定量限到限度值的120%～150%。也有專家建議標準曲線法測定校正因子的濃度范圍要涵蓋定量限和標準限度。
從目前檢索到的文獻看，有些文獻的確涵蓋了定量限和標準限度，有些則僅涵蓋限度或未明確定量限，其中一些文獻上限定了限度水平的200%甚至500%，高濃度范圍對于溶液的配制可能更為簡單，低濃度范圍則更加接近正常雜質(zhì)檢測水平，不同濃度范圍所得到校正因子是否有所差別未檢索到文獻報道。
校正曲線上濃度點的選擇
在計算相對校正因子時，多采用線性驗證時的校正曲線，因此一般要求至少制備5份不同濃度的對照品溶液用于校正曲線的繪制。在配置不同濃度的對照品溶液時應(yīng)盡量采用逐級稀釋,在校正曲線上的點也應(yīng)均勻分布，也有一些文獻濃度點分布并不均勻，如在低濃度處選點更加密集，曲線上濃度分布對校正因子的測定是否產(chǎn)生影響未見文獻報道。
涉及校正因子的方法開發(fā)與驗證
目前對于雜質(zhì)與主成分相對校正因子的測定多在進行有關(guān)物質(zhì)方法線性驗證時直接以校正曲線的斜率順帶求得，僅在《中國藥典》2015年版四部《9101藥品質(zhì)量標準分析方法驗證指導(dǎo)原則》中明確規(guī)定了校正因子需進行準確度驗證，但對于測定校正因子的方法開發(fā)以及耐用性驗證沒有明確的要求。
在檢索到的有關(guān)化學(xué)藥品具體品種校正因子的26篇相關(guān)文獻中，有16篇文獻在計算相對校正因子時考慮到了儀器、色譜柱的相關(guān)影響，以在不同儀器不同色譜柱上測定得到的均值作為校正因子；有11篇文獻進行了校正因子的耐用性驗證，但驗證項目不一，主要涉及人員、實驗室、儀器、色譜柱、流動相pH值和比例、流速、試劑等級、柱溫、粒徑等多個影響因素，其中檢測波長、色譜柱、柱溫、流速都被報道過對校正因子測定結(jié)果有顯著影響。
由此可見，應(yīng)該在方法開發(fā)時對于特定雜質(zhì)相對校正因子的耐用性根據(jù)具體情況進行全面考察，如果校正因子發(fā)生顯著變化，應(yīng)對具體測試條件在方法標準中加以嚴格限定，這樣相對校正因子才能作為一個常數(shù)，直接載入質(zhì)量標準用于雜質(zhì)的準確定量。
校正因子的使用
雜質(zhì)色譜峰的準確定位是保證校正因子法應(yīng)用的前提，因此校正因子測定時多采用相對保留時間進行雜質(zhì)定位，對于成分復(fù)雜樣品，相對保留時間不能準確定位時，可考慮選用定性用的標準物質(zhì)。
從目前查閱文獻看，其中一些研究在確定相對校正因子時并未明確特定雜質(zhì)的相對保留時間，提示可能對相對保留時間對于校正因子應(yīng)用的重要性認識不足，但也有一些研究在考察了相對校正因子耐用性的同時考察了相對保留時間的耐用性。
由于很多色譜條件如色譜柱、柱溫、流速等均會對保留時間產(chǎn)生影響，因此建議在使用相對校正因子結(jié)合相對保留時間進行雜質(zhì)鑒別和定量時，對相對保留時間也進行耐用性考察，如果要求條件苛刻，同樣需要在質(zhì)量標準中進行明確規(guī)定以保證檢測方法具有足夠的重現(xiàn)性。
展望
隨著大眾對于藥品安全性認識和需求的不斷提高，藥品有關(guān)物質(zhì)檢查中進行特定雜質(zhì)控制會逐漸成為藥品質(zhì)控的常態(tài)，標準物質(zhì)無法及時供應(yīng)的情況下，采用相對校正因子計算特定雜質(zhì)的方法也會越來越普遍。相對校正因子將成為藥品HPLC方法中用于雜質(zhì)含量測定和限度檢查過程中一個至關(guān)重要的參數(shù)。
國內(nèi)外采用相對校正因子方法用于雜質(zhì)控制的研究已較為廣泛和深入，其中許多方法被各國藥典收載，具有良好的發(fā)展和應(yīng)用前景。未來針對目前研究過程中存在的一些問題還需加強標準化和規(guī)范化的研究。
來源：銘研醫(yī)藥
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