藥物雜質(zhì)測定中加校正因子的主成分自身對照法:
在雜質(zhì)研究中,因某一雜質(zhì)與主成分在某一波長下的響應(yīng)因子不在0.9-1.1范圍內(nèi),可考慮采用加校正因子的主成分自身對照法。此校正因子可直接載入各品種項下,用于校正雜質(zhì)的實測峰面積。這些需做校正因子的雜質(zhì),通常以主成分為參照,采用相對保留時間定位,其數(shù)值一并載入各品種項下。(可以理解為校正因子具有法律效應(yīng)的作用)
關(guān)于校正因子的理論知識如下:
色譜定量分析的依據(jù)是被測組分量與檢測器的響應(yīng)信號(峰面積或峰高)成正比。但是同一種物質(zhì)在不同類型檢測器上往往有不同的響應(yīng)靈敏度;同樣,不同物質(zhì)在同一檢測器上的響應(yīng)靈敏度也往往不同,即相同量的不同物質(zhì)產(chǎn)生不同值的峰面積或峰高。這樣,各組分峰面積或峰高的相對百分?jǐn)?shù)并不等于樣品中各組分的百分含量。
色譜的檢測器對不同物質(zhì)有不同的響應(yīng),換句話說,1mg化合物A在檢測器上能產(chǎn)生1000mAu的響應(yīng),但同樣是1mg的化合物B在該檢測器上也許就只能產(chǎn)生847mAu的響應(yīng),所以我們不能在檢測器輸出1000mAu的響應(yīng)時就認(rèn)定樣品中一定含有1mg化合物,這時就必須引入定量校正因子。校正后的峰面積或峰高可以定量地代表物質(zhì)的量,校正因子的作用就是反映某物質(zhì)的量與檢測器響應(yīng)之間的關(guān)系。
定量校正因子分為兩種:
1、絕對定量校正因子f;f=M/A,(其中M代表被測物質(zhì)的量,A代表檢測器信號響應(yīng),可以是峰面積或峰高),其意義為單位響應(yīng)所反映的物質(zhì)量。絕對定量校正因子,即單位峰面積所代表的物質(zhì)量。這是以峰面積表示的定量校正因子,也可以用峰高來表示定量校正因子。此外,也有用它們的倒數(shù)來表示的,簡稱為響應(yīng)值。絕對定量校正因子的值隨色譜實驗條件而改變,因而很少使用。
2、相對定量校正因子f';f'=fi/fs=(Mi/Ai)/(Ms/As)=(Mi*As)/(Ms*Ai),(其中i代表被測定物質(zhì),s代表選定的基準(zhǔn)物質(zhì))。定義為某物質(zhì)i與所選定的基準(zhǔn)物質(zhì)s的絕對定量校正因子(即單位峰面積所代表的物質(zhì)的量)之比。
絕對定量校正因子一般用于外標(biāo)法,相對定量校正因子一般用于內(nèi)標(biāo)法。
色譜法的含量測定中之所以要先用待測成分的對照品來建立校準(zhǔn)曲線,然后才用這個曲線來計算待測樣品中該化合物的含量,實際上就是在測定樣品前先確定校正因子。日常操作中我們都是以:M標(biāo)/A標(biāo)=M樣/A樣 直接計算樣品含量了,所以沒太注意有什么校正因子,事實上只要將公式作一個簡單的變形:M樣=A樣*(M標(biāo)/A標(biāo)),不難看出式中的(M標(biāo)/A標(biāo))其實正是定量校正因子f,那么M樣=A樣*f了。(簡單來說可以理解為標(biāo)準(zhǔn)曲線的斜率)
所以,用面積歸一化比法做含量測定時,不可簡單地認(rèn)為各成分的峰面積百分比就是它們的含量百分比哦,理由如上所述,各成分含量與響應(yīng)的比例關(guān)系可不一定都相同啊!
