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分析方法開發(fā)是藥品質(zhì)量研究中的先行工作，一般在小試研究過程中同步分析方法開發(fā)的工作，基于分析方法開發(fā)是頗為費(fèi)時(shí)的一項(xiàng)工作，那么如何高效高質(zhì)的將方法開發(fā)出來，并且耐用性與可轉(zhuǎn)移性均良好呢？分析研發(fā)人員需要特別關(guān)注幾個(gè)分析方法開發(fā)過程中的思維陷阱。本文結(jié)合案例對(duì)分析方法開發(fā)過程中的幾個(gè)思維陷阱做以介紹，希望可以為同行提供一些參考，也歡迎同行的廣泛討論。

思維陷阱一：在梯度優(yōu)化的路上越走越遠(yuǎn)

舉例：API的起始物料M，需要制定企業(yè)的內(nèi)控標(biāo)準(zhǔn)；

可提供的信息：供應(yīng)商的COA報(bào)告及M的合成路線和純度及有關(guān)物質(zhì)的檢測(cè)方法；

本例中待開發(fā)的方法：M的有關(guān)物質(zhì)檢查方法和含量測(cè)定方法；

思維陷阱分析：以有關(guān)物質(zhì)方法開發(fā)為例，因?yàn)榭蓞⒖脊?yīng)商的純度及有關(guān)物質(zhì)分析方法，可獲取色譜方法的基礎(chǔ)參數(shù)如下：

色譜柱；C18（150×4.6mm,5μm）；流動(dòng)相：0.1%HAc溶液與乙腈梯度洗脫；柱溫：30℃；檢測(cè)波長(zhǎng)：254nm；流速：1.0ml/min；進(jìn)樣量：10μl；

在分析方法開發(fā)之初，研究者首先會(huì)重現(xiàn)以上的方法，單以M的供試品溶液考察專屬性不夠充分，需要結(jié)合M的強(qiáng)制降解試驗(yàn)樣品溶液，供試品加標(biāo)溶液和M的粗品溶液等分別進(jìn)行專屬性的考察，于是在研究中發(fā)現(xiàn)具有典型系統(tǒng)適用性的溶液為M的氧化破壞溶液，但是發(fā)現(xiàn)應(yīng)用以上色譜方法，主峰與降解產(chǎn)物之間的分離度<1.0，如圖1所示。考慮通過調(diào)整梯度洗脫程序進(jìn)行分離度的優(yōu)化，一般考慮梯度放緩，部分等度的優(yōu)化策略，但是經(jīng)過幾十種優(yōu)化后獲得的分離效果卻不是很理想，此時(shí)研究者就是在一個(gè)思維陷阱中，跳出陷阱嘗試應(yīng)用柱效更高的色譜柱C18（150×4.6mm,3.5μm），會(huì)有意外的驚喜，如圖2所示。

圖1 方法重現(xiàn)

圖2 色譜柱更換

思維陷阱二：只把精力集中在色譜柱和梯度優(yōu)化上

舉例：API的有關(guān)物質(zhì)方法開發(fā)；

可提供信息：API的制劑法定標(biāo)準(zhǔn)的有關(guān)物質(zhì)方法；

思維陷阱分析：在API的有關(guān)物質(zhì)方法開發(fā)中，研究者首先采用API粗品重現(xiàn)標(biāo)準(zhǔn)中的方法，發(fā)現(xiàn)主藥與未知雜質(zhì)的分離度<1.0，如圖3所示，采取的優(yōu)化措施更換其它廠家的相同型號(hào)的色譜柱，但是分離效果無改善，考慮更換相同型號(hào)的較長(zhǎng)的色譜柱，分離效果不理想。于是固定色譜峰形相關(guān)因素較為理想的色譜柱，采用梯度變化的方式進(jìn)行分離，但是發(fā)現(xiàn)梯度變化后實(shí)現(xiàn)分離，但是主峰的保留時(shí)間相對(duì)較長(zhǎng)，需要付出較長(zhǎng)的洗脫時(shí)間。研究者在這樣的思維陷阱中，認(rèn)為色譜柱和梯度優(yōu)化是重中之重，確定了這兩個(gè)因素之后，才適用于方法簡(jiǎn)單耐用性的考察，實(shí)則不然，流速、柱溫也是方法開發(fā)中的關(guān)鍵因素，本例中將流速自0.8ml/min，改變?yōu)?.0ml/min后，實(shí)現(xiàn)良好的基線分離，而且主峰的保留時(shí)間也提前了，節(jié)省了方法的洗脫時(shí)間，如圖4所示。

圖3 參考方法重現(xiàn)

圖4 改變流速

思維陷阱三：含量的方法洗脫時(shí)間按照主成分保留時(shí)間的1.2-1.5倍即可

舉例：注射液A的含量方法開發(fā)；

可獲取信息：注射液A的強(qiáng)制降解試驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)在酸堿熱光氧幾種條件下均不穩(wěn)定；

思維陷阱分析：在注射液A的含量方法開發(fā)中，研究者以有關(guān)物質(zhì)方法的參數(shù)為基礎(chǔ)，以等度洗脫的方法擬定為注射液A的含量方法，主峰的保留時(shí)間約為8min，于是含量方法的洗脫時(shí)間擬定為15min。因?yàn)楹康墓┰嚻窛舛葹橛嘘P(guān)物質(zhì)供試品濃度1/80，研究者認(rèn)為含量濃度下供試品的強(qiáng)制降解雜質(zhì)均不會(huì)超過LOQ。但是在影響因素30天光照樣品的檢測(cè)中，發(fā)現(xiàn)樣品在2+2的進(jìn)樣中，第2針開始0-0.3min基線不是從0開始，信號(hào)總是先從0.05降回0，于是在線觀察中發(fā)現(xiàn)在前一針樣品洗脫時(shí)間結(jié)束，下一針進(jìn)樣的間歇會(huì)出現(xiàn)一個(gè)未在洗脫時(shí)間內(nèi)的色譜峰，也就是說含量方法的洗脫時(shí)間制定的不合理，需要延長(zhǎng)洗脫時(shí)間。所以含量分析方法開發(fā)過程中，思維局限在系統(tǒng)適用性的要求，拖尾因子、理論塔板數(shù)、分離度，而未充分考慮降解雜質(zhì)的洗脫能力等因素，勢(shì)必會(huì)在后面的穩(wěn)定性檢驗(yàn)過程中發(fā)生偏差，增加工作負(fù)擔(dān)。

思維陷阱四：有關(guān)物質(zhì)檢查的色譜條件只能是一個(gè)方法

舉例：API的有關(guān)物質(zhì)方法的開發(fā)

可獲取信息：API中有4個(gè)中間體、3個(gè)副產(chǎn)物、還有降解雜質(zhì)4個(gè)，擬研究的有關(guān)物質(zhì)為以上11個(gè)，經(jīng)過分析11個(gè)雜質(zhì)的極性差別很大，并且極性相近的雜質(zhì)的性質(zhì)相似，表現(xiàn)在色譜行為上的保留時(shí)間比相似；

思維陷阱分析：研究者擬用一個(gè)色譜條件分離11個(gè)待研究雜質(zhì)，同時(shí)需要兼顧強(qiáng)制降解試驗(yàn)的樣品一同考察方法的專屬性，在研究中發(fā)現(xiàn)，極性較大的幾個(gè)待研究雜質(zhì)總是分離度小于1.0，于是通過選擇色譜柱、優(yōu)化梯度、變化不同緩沖鹽濃度、種類等多種因素進(jìn)行方法的優(yōu)化，最后獲得了一個(gè)相對(duì)理想的色譜條件，但是主峰的保留時(shí)間需要40min左右，而且最后的雜質(zhì)保留時(shí)間在150min左右，不可否認(rèn)這是一個(gè)專屬性良好的有關(guān)物質(zhì)方法，但是卻使得方法的洗脫時(shí)間過長(zhǎng)。研究者可以跳出有關(guān)物質(zhì)檢查必須一個(gè)方法的陷阱，完全可以為了極性較大且極其難分的幾個(gè)雜質(zhì)開發(fā)一個(gè)方法，雖然方法學(xué)的工作量增加一倍，但是也可以解決因?yàn)橄疵摃r(shí)間過長(zhǎng)而帶來的溶液穩(wěn)定性不穩(wěn)定造成的偏差的風(fēng)險(xiǎn)。

綜上，分析方法開發(fā)過程是一個(gè)需要綜合許多因素考慮與評(píng)估的過程，如果思維深陷某一個(gè)方向越走越遠(yuǎn)，會(huì)不必要的浪費(fèi)很多精力和時(shí)間。那么如何盡量做到事半功倍，試驗(yàn)開始前的縝密的方案設(shè)計(jì)和階段性試驗(yàn)結(jié)果的復(fù)盤是非常重要的，批判性思維是必不可少的，可以在方法開發(fā)過程中起到一定的助推作用，希望本文可以為同行的工作提供一些參考。