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1  k的定義

保留因子（k）：固定相中的溶質(zhì)分子總量（s）除以流動相（m）中的溶質(zhì)分子總量得到。當(dāng)化合物在固定相中溶質(zhì)分子越多，K值越大，保留時間越長。

2 k的計算

（1）等度洗脫中，運用公式k=（tR-t0）/t0進(jìn)行計算，其中t0約等于5x10-4Ldc2/F。式中L是色譜柱的長度，以mm為單位；dc是色譜柱的內(nèi)徑，也以mm為單位；F是流動相流速，以ml/min為單位；t0以分鐘為單位；其中5x10-4Ldc2為色譜柱的死體積Vm。

舉例來說，對于4.6mm內(nèi)徑的色譜柱，其死體積Vm近似為0.01L，因此對于一根150x4.6mm的色譜柱，如果使用流速為 0.5ml/min，那么t0=Vm/F=1.5/0.5=3分鐘；然后根據(jù)待測樣品的保留時間tR就可以計算出該色譜峰的k值了。

（2）在梯度洗脫中，條件比較復(fù)雜，k值計算公式為0.87tGf/vmΔΦs。其中tG為梯度時間，F(xiàn)為流速，Vm為色譜柱的死體積，ΔΦ為梯度范圍，一般分子量為100-500Da的化合物S大約為4，根據(jù)此公式我們同樣可以計算出梯度洗脫中化合物的k值。

3  k的使用原則

在進(jìn)行HPLC方法開發(fā)時一般要求k為1到10，最大容許范圍為2-20。在這個范圍內(nèi)我們可以得到又窄又高的色譜峰，同時化合物的分離能夠達(dá)到最佳。如果k小于1時，化合物的分離就會很差；當(dāng)化合物的k大于20時候，繼續(xù)提高k值，化合物的分離度變化十分微小，但是保留時間卻增加明顯。