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液相色譜“溶劑效應(yīng)”，是個(gè)老生常談的話題，泛指樣品中某些組分在稀釋劑與流動(dòng)相中存在狀態(tài)有較大差異，導(dǎo)致色譜行為表現(xiàn)異常的情況。本文以某稀釋劑在不同品牌液相上的色譜行為為例，闡明稀釋劑選擇也有可能影響其本身的色譜行為，進(jìn)而影響方法的耐受性。

Part1  發(fā)現(xiàn)問題

我公司某項(xiàng)目在采用waters液相進(jìn)行方法轉(zhuǎn)移時(shí)發(fā)現(xiàn)空白溶劑（流動(dòng)相A）在3.5min有出峰，干擾雜質(zhì)B的靈敏度測(cè)定，空白溶劑譜圖如下：

Part2  問題排查思路

方法開發(fā)方是否也存在同樣的問題

方法開發(fā)方采用的是Agilent液相進(jìn)行的方法開發(fā)及驗(yàn)證，空白溶劑(流動(dòng)相A)在雜質(zhì)B出峰位置無干擾，空白溶劑譜圖如下：

方法開發(fā)方采用waters液相重新方法，存在同樣的問題，空白溶劑(流動(dòng)相A)在雜質(zhì)B出鋒位置也有干擾，空白溶劑譜圖如下：

是否是緩沖鹽或溶劑引入的干擾

本方法色譜條件為流動(dòng)相A：磷酸二氫銨溶液（取磷酸二氫銨11.5g，加水1000ml溶解，并用磷酸調(diào)pH值至4.4）流動(dòng)相B為乙腈-流動(dòng)相A（1:1）柱溫為40℃；檢測(cè)波長(zhǎng)為230nm；進(jìn)樣體積為10μl，梯度洗脫程序如下表所示：

是否是“溶劑效應(yīng)”導(dǎo)致不同品牌液相色譜行為的差異

更換磷酸二氫銨為SIGMA廠家HPLC級(jí)別的鹽并安裝新鬼鋒捕集小柱，稀釋劑（流動(dòng)相A）譜圖未見改善，仍有干擾峰出現(xiàn)，譜圖如下：

更換稀釋劑（流動(dòng)相A）為稀釋劑（流動(dòng)相A：流動(dòng)相B 82:18，v/v），采用waters液相，稀釋劑干擾峰消失，譜圖如下：

Part3  現(xiàn)象分析

在日常檢測(cè)中，稀釋劑干擾是一個(gè)很讓人頭痛的問題，其本質(zhì)是稀釋劑中不可避免也可能含有光譜響應(yīng)的物質(zhì)，通常這樣雜質(zhì)保留較弱，容易產(chǎn)生“溶劑效應(yīng)”，解決該問題最好的方式就是采用初始比例的流動(dòng)相作為稀釋劑。我們?cè)谶M(jìn)行分析方法開發(fā)中首先應(yīng)考慮流動(dòng)相作為稀釋劑，如遇到溶解性、溶液穩(wěn)定性等問題，可以適當(dāng)在稀釋劑中增加助溶劑，穩(wěn)定劑等，但要做充分的耐受性考察，如更換不同品牌的液相等，以確保檢測(cè)數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性和可重現(xiàn)性。

參考文獻(xiàn)

[1]液相色譜柱與方法開發(fā)指南

[2] 實(shí)用高效液相色譜法建立。