中文字幕一级黄色A级片|免费特级毛片。性欧美日本|偷拍亚洲欧美1级片|成人黄色中文小说网|A级片视频在线观看|老司机网址在线观看|免费一级无码激情黄所|欧美三级片区精品网站999|日韩av超碰日本青青草成人|一区二区亚洲AV婷婷

本文主要介紹了廈門(mén)致善生物科技股份有限公司研發(fā)的醫(yī)療器械“分枝桿菌鑒定試劑盒（熒光PCR熔解曲線法）”的臨床前研發(fā)實(shí)驗(yàn)。

一、分枝桿菌鑒定試劑盒（熒光PCR熔解曲線法）產(chǎn)品的主要組成成分 

本試劑盒含有分枝桿菌PCR反應(yīng)管、分枝桿菌陽(yáng)性對(duì)照、分枝桿菌陰性對(duì)照、PCR八聯(lián)管管蓋，主要組成成分見(jiàn)表1。

表 1 試劑盒主要組成成分

二、分枝桿菌鑒定試劑盒（熒光PCR熔解曲線法）的產(chǎn)品預(yù)期用途 

本產(chǎn)品用于體外定性檢測(cè)分枝桿菌培養(yǎng)物樣本中的19種分枝桿菌核酸，包括：結(jié)核分枝桿菌（復(fù)合群）、恥垢分枝桿菌、牛分枝桿菌、瘰疬分枝桿菌、龜分枝桿菌、猿猴分枝桿菌、緩黃分枝桿菌、戈登分枝桿菌、堪薩斯分枝桿菌、膿腫分枝桿菌、偶然分枝桿菌、海分枝桿菌或潰瘍分枝桿菌、土地分枝桿菌、不產(chǎn)色分枝桿菌、蘇加分枝桿菌、馬爾摩分枝桿菌、蟾蜍分枝桿菌、胞內(nèi)分枝桿菌和鳥(niǎo)分枝桿菌。

本產(chǎn)品適用于臨床上分枝桿菌感染的輔助診斷。 

三、分枝桿菌鑒定試劑盒（熒光PCR熔解曲線法）的產(chǎn)品包裝規(guī)格

48測(cè)試/盒。 

四、分枝桿菌鑒定試劑盒（熒光PCR熔解曲線法）的產(chǎn)品檢驗(yàn)原理

本試劑盒采用熒光 PCR 熔解曲線法，根據(jù)不同分枝桿菌ITS片段的特異序列設(shè)計(jì)探針，采用特定的熒光通道和熔點(diǎn)進(jìn)行分枝桿菌的鑒別。同時(shí)在體系中加入外源性內(nèi)控模板（擬南芥管家基因SUC2作為參照基因），對(duì)擴(kuò)增體系進(jìn)行質(zhì)量控制。

五、分枝桿菌鑒定試劑盒（熒光PCR熔解曲線法）的主要原材料

本產(chǎn)品主要原材料包括：引物、探針、聚合酶、UNG酶、dNTPs、質(zhì)粒原料等。主要原材料聚合酶和質(zhì)粒原料為自產(chǎn)，其他原材料均為外購(gòu)。引物、探針為申請(qǐng)人自行設(shè)計(jì)后由專業(yè)合成公司合成。申請(qǐng)人選擇有資質(zhì)的供應(yīng)商提供的原料，通過(guò)功能性試驗(yàn)，篩選出最佳原材料和供應(yīng)商，制定了各主要原材料的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)并經(jīng)檢驗(yàn)合格。 

企業(yè)參考品設(shè)置情況：申請(qǐng)人設(shè)計(jì)了完整的企業(yè)參考品，包括陽(yáng)性參考品、陰性參考品、檢測(cè)限參考品和重復(fù)性參考品等，均采用真實(shí)樣本滅活后制備而成。陽(yáng)性參考品來(lái)源于30份檢測(cè)范圍內(nèi)分枝桿菌樣本制備而成，陰性參考品來(lái)源于25份檢測(cè)范圍外分枝桿菌樣本或不含分枝桿菌樣本制備而成，檢測(cè)限參考品來(lái)源于5份檢測(cè)范圍內(nèi)分枝桿菌樣本制備而成，重復(fù)性參考品來(lái)源于5份檢測(cè)范圍內(nèi)分枝桿菌樣本制備而成。

申請(qǐng)人通過(guò)對(duì)試劑主要生產(chǎn)工藝的研究，確定了最佳生產(chǎn)工藝。申請(qǐng)人對(duì)反應(yīng)體系中引物、探針、聚合酶、UNG酶和dNTPs等的濃度和用量進(jìn)行了優(yōu)化，并對(duì)反應(yīng)體系的擴(kuò)增程序、退火溫度、退火時(shí)間、擴(kuò)增循環(huán)數(shù)、樣本用量等進(jìn)行了優(yōu)化和驗(yàn)證，此外對(duì)樣本核酸的提取方法和取樣量進(jìn)行了驗(yàn)證，通過(guò)驗(yàn)證最終確定了最佳反應(yīng)體系。 

七、分枝桿菌鑒定試劑盒（熒光PCR熔解曲線法）的分析性能評(píng)估研究

該產(chǎn)品分析性能主要包括：核酸提取性能、陰陽(yáng)性符合率、精密度、最低檢測(cè)限、特異性（交叉反應(yīng)、干擾試驗(yàn)）、包容性研究等。申請(qǐng)人提交了有效運(yùn)行的質(zhì)量管理體系下生產(chǎn)的不少于三批的產(chǎn)品在適用機(jī)型SLAN-96S全自動(dòng)醫(yī)用PCR分析系統(tǒng)上的性能評(píng)估資料。

在核酸提取性能研究中，比較評(píng)估了產(chǎn)品配套使用的核酸提取試劑盒的提取效果，結(jié)果表明配套使用的核酸提取試劑盒的核酸提取性能滿足產(chǎn)品使用需求。

在陰陽(yáng)性符合率研究中，申請(qǐng)人采用不少于三批的成品試劑盒，檢測(cè)企業(yè)陽(yáng)性參考品、陰性參考品和臨床樣本。結(jié)果表明陽(yáng)性符合率和陰性符合率均為100%。

在精密度研究中，申請(qǐng)人采用不少于三批的成品試劑盒，對(duì)兩種不同濃度的 19 份陽(yáng)性樣本和 4 份陰性樣本，進(jìn)行了多天的精密度研究，評(píng)估了試劑盒批內(nèi)/批間、日內(nèi)/日間、不同操作者之間等的精密度。結(jié)果表明：試劑盒批內(nèi)/批間、日內(nèi)/日間、不同操作者之間的精密度均符合要求。

在最低檢測(cè)限研究中，申請(qǐng)人采用不少于三批的成品試劑盒，檢測(cè)19種分枝桿菌的系列濃度梯度樣本，將達(dá)到100%陽(yáng)性檢出率的最低濃度水平作為確定的最低檢測(cè)限，并進(jìn)行最低檢測(cè)限驗(yàn)證。最終確定該產(chǎn)品最低檢測(cè)限為 103菌/mL。

在交叉反應(yīng)研究中，申請(qǐng)人采用不少于三批的成品試劑盒，進(jìn)行了近源菌及不在試劑盒檢測(cè)范圍中的呼吸道感染相關(guān)病原體等的交叉反應(yīng)。結(jié)果表明：本試劑盒與亞洲分枝桿菌、胃分枝桿菌、施氏分枝桿菌、次要分枝桿菌、產(chǎn)鼻疽分枝桿菌、草分枝桿菌、抗熱分枝桿菌、金色分枝桿菌、微黃分枝桿菌、淺黃分枝桿菌、科莫斯分枝桿菌、新金色分枝桿菌、副偶然分枝桿菌、豬分枝桿菌、灰塵分枝桿菌、塞內(nèi)加爾分枝桿菌、田野分枝桿菌、南非分枝桿菌、迪氏分枝桿菌、母牛分枝桿菌、肺炎球菌、嗜肺軍團(tuán)菌、百日咳博德特氏菌、巴西諾卡氏菌、北京棒桿菌、流感嗜血桿菌、大腸桿菌、表皮葡萄球菌、金黃色葡萄球菌、隱球菌、綠膿桿菌、白色念珠菌、人流感病毒A型、人流感病毒B型、人副流感病毒1型、人副流感病毒2型、人副流感病毒3型無(wú)交叉反應(yīng)。

在干擾試驗(yàn)研究中，申請(qǐng)人采用不少于三批的成品試劑盒，對(duì)樣本中可能含有的干擾物質(zhì)進(jìn)行了研究，包括常見(jiàn)的外源干擾物質(zhì)利福平（9 mg/L）、異煙肼（12 mg/L）、乙胺丁醇（8 mg/L）、吡嗪酰胺（45 mg/L）、卡那霉素（30 mg/L）、鏈霉素（50 mg/L）、阿莫西林（11 mg/L）、扎那米韋（0.5 mg/L）、腎上腺素（1 mg/L）、地塞米松（20 mg/L）、莫匹羅星（20 mg/L）藥物等，結(jié)果顯示相應(yīng)干擾物質(zhì)不會(huì)對(duì)產(chǎn)品的檢測(cè)結(jié)果產(chǎn)生干擾。

在包容性研究中，申請(qǐng)人采用三批成品試劑盒，對(duì)標(biāo)準(zhǔn)菌株及收集于不同地區(qū)的不同來(lái)源的各目標(biāo)菌的陽(yáng)性樣本進(jìn)行檢測(cè)。包括：結(jié)核分枝桿菌（含 H37RV 菌株）、非洲分枝桿菌、田鼠分枝桿菌、牛分枝桿菌（含 ATCC35743 菌株和 BCG 菌株）、恥垢分枝桿菌、瘰疬分枝桿菌、龜分枝桿菌、猿猴分枝桿菌、緩黃分枝桿菌、戈登分枝桿菌、堪薩斯分枝桿菌、膿腫分枝桿菌、偶然分枝桿菌、海分枝桿菌、潰瘍分枝桿菌、土地分枝桿菌、不產(chǎn)色分枝桿菌、蘇加分枝桿菌、馬爾摩分枝桿菌、蟾蜍分枝桿菌、胞內(nèi)分枝桿菌和鳥(niǎo)分枝桿菌。檢測(cè)結(jié)果表明，本試劑檢測(cè)不同地區(qū)收集的上述不同種類分枝桿菌均能檢出。

八、分枝桿菌鑒定試劑盒（熒光PCR熔解曲線法）的陽(yáng)性判斷值研究

申請(qǐng)人采用該產(chǎn)品和配套儀器對(duì)收集的臨床樣本進(jìn)行檢測(cè)，獲得原始的 Tm 值，通過(guò)對(duì)相應(yīng)樣本的數(shù)據(jù)分布進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析并計(jì)算標(biāo)準(zhǔn)偏差制定各指標(biāo)的參考區(qū)間。采用多例樣本進(jìn)行參考區(qū)間的驗(yàn)證，根據(jù)驗(yàn)證結(jié)果最終確定了試劑盒的參考區(qū)間。

九、分枝桿菌鑒定試劑盒（熒光PCR熔解曲線法）的穩(wěn)定性研究

申請(qǐng)人對(duì)本產(chǎn)品的實(shí)時(shí)穩(wěn)定性、開(kāi)封穩(wěn)定性、凍融穩(wěn)定性、運(yùn)輸穩(wěn)定性以及樣本穩(wěn)定性等進(jìn)行了系統(tǒng)的研究，確定了在各種條件下本產(chǎn)品及樣本的有效保存時(shí)間。

實(shí)時(shí)穩(wěn)定性：試劑盒分別儲(chǔ)存于 2～8℃和-20±5℃溫度下，在不同時(shí)間點(diǎn)對(duì)試劑盒的外觀、最低檢測(cè)限、特異性和精密度等性能進(jìn)行考察。結(jié)果表明試劑盒在-25～8℃避光保存，有效期 18 個(gè)月。