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蛋白類藥物具有的翻譯后修飾，如糖基化、N末端的焦谷氨酸化、C末端的賴氨酸截除、氧化、脫酰胺等，這些不同的翻譯后修飾組合可使蛋白分子產(chǎn)生無(wú)數(shù)種電荷異構(gòu)體。另外，單抗在特定的條件下會(huì)發(fā)生降解、斷裂，形成低分子量的片段。這些異構(gòu)體對(duì)于蛋白藥物的穩(wěn)定性及生物學(xué)功能發(fā)揮具有重要影響，需要用合適的方法進(jìn)行分析。

1CE-SDS進(jìn)行單抗純度及大小變異體的檢測(cè)。

CE-SDS蛋白凝膠電泳是采用液態(tài)凝膠作為篩分介質(zhì)，根據(jù)不同分子量大小的樣品在凝膠中不同的遷移時(shí)間將其區(qū)分，從而進(jìn)行大小變異體檢測(cè)。

將單抗與 β-巰基乙醇或碘乙酰胺混勻進(jìn)行前處理后，進(jìn)行還原及非還原的純度分析。該方法有兩種分析分離的模式，分別為高分辨率（High Resolution, HR）和快速（High Speed, HS）模式。HR下樣品從進(jìn)口端到檢測(cè)窗口的距離為20.0 cm。HS下樣品從進(jìn)口端到檢測(cè)窗口的距離為10.2 cm。HS模式的分辨率略有下降，但是相比HR模式能夠帶來(lái)更快速的分析（HS大約需要15 min，HR大約需要30 min）。

通過(guò)還原處理，可得到單抗的輕鏈、非糖基化重鏈以及重鏈，其中非糖基化重鏈和重鏈能夠達(dá)到基線分離。在非還原法中，得到了輕鏈、重鏈、二重一輕鏈、非糖基化的IgG以及IgG主體。

HR電泳模式                                    HS電泳模式

另外，還可以用激光誘導(dǎo)熒光 (LIF)的檢測(cè)方式，對(duì)單抗分子大小異構(gòu)體進(jìn)行高靈敏的檢測(cè)，靈敏度可比UV高10倍。

UV（紫外）下與LIF下對(duì)同一個(gè)單抗進(jìn)行CE-SDS的電泳圖譜

2等電點(diǎn)及電荷異構(gòu)體的檢測(cè)

毛細(xì)管電泳儀可以采用等電聚焦電泳（Capillary Isoelectric Focusing, cIEF）及區(qū)帶電泳（Capillary zone electrophoresis CZE）兩種方式對(duì)蛋白電荷異構(gòu)體進(jìn)行表征。

在cIEF的分離過(guò)程中，毛細(xì)管左右兩端施加的高壓電場(chǎng)使得陽(yáng)極液和陰極液中的氫離子和氫氧根離子相向運(yùn)動(dòng)，其內(nèi)部填充的兩性電解質(zhì)在酸性（陽(yáng)極）溶液和堿性（陰極）溶液所形成電場(chǎng)的作用下形成連續(xù)的pH梯度，從而使得兩性化合物向各自等電點(diǎn)（pI）遷移，可以得到不同電荷異構(gòu)體的峰。

采用同一種分離方法，CE能夠在寬pH范圍內(nèi)對(duì)多種單抗進(jìn)行cIEF分析。此種方法使用三種PI marker，等電點(diǎn)計(jì)算值更加準(zhǔn)確；分離使用30cm長(zhǎng)的毛細(xì)管，能夠獲得較高的分辨率。

          三種單抗CIEF電泳圖             一種單抗的六種CIEF重復(fù)性結(jié)果 

cIEF是一種根據(jù)蛋白各亞型等電點(diǎn)的變化分離電荷異構(gòu)體的方法，需要在涂層毛細(xì)管中進(jìn)行聚焦和遷移，分辨率高，但是分析時(shí)間較長(zhǎng)，因此還可以采用區(qū)帶電泳CZE的模式快速對(duì)蛋白電荷異構(gòu)體進(jìn)行分析?？墒褂肊ACA作為兩性電解質(zhì)，TETA作為動(dòng)態(tài)涂層，HPMC作為篩分基質(zhì)對(duì)蛋白的電荷異構(gòu)體進(jìn)行分離，只需12分鐘就可得到高分辨率和高重現(xiàn)性的分離結(jié)果。

                      單抗CZE 分離結(jié)果                       9針單抗CZE分離結(jié)果

PA 800 Plus 毛細(xì)管電泳制藥分析系統(tǒng)配有UV、PDA、LIF三種檢測(cè)器，配合IgG純度分析試劑盒，cIEF 等點(diǎn)聚焦試劑盒和CZE試劑盒可進(jìn)行單抗純度、蛋白等電點(diǎn)及電荷異構(gòu)體分析，另外PA 800 Plus具有專利的循環(huán)冷卻控溫系統(tǒng)可使結(jié)果的重復(fù)性和穩(wěn)定性更佳。