中文字幕一级黄色A级片|免费特级毛片。性欧美日本|偷拍亚洲欧美1级片|成人黄色中文小说网|A级片视频在线观看|老司机网址在线观看|免费一级无码激情黄所|欧美三级片区精品网站999|日韩av超碰日本青青草成人|一区二区亚洲AV婷婷

目的   

探討高效液相色譜法檢查有關(guān)物質(zhì)時(shí)容易被誤認(rèn)為是雜質(zhì)的峰。方結(jié)合日常檢驗(yàn)工作和相關(guān)文獻(xiàn),對(duì)易被誤認(rèn)為是雜質(zhì)峰的進(jìn)行了研究總結(jié)。結(jié)果 易被誤認(rèn)為是雜質(zhì)峰的峰包括溶劑峰、有機(jī)酸鹽峰、無(wú)機(jī)酸鹽峰和輔料峰,并對(duì)這些峰的形成原因進(jìn)行簡(jiǎn)單分析。結(jié)論 分析工作者在藥物的有關(guān)物質(zhì)高效液相色譜法的方法開發(fā)和檢查,應(yīng)對(duì)檢驗(yàn)過(guò)程中出現(xiàn)的雜質(zhì)峰予以重視,以免出現(xiàn)誤判。

根據(jù)藥品注冊(cè)的國(guó)際技術(shù)要求中雜質(zhì)的含義，雜質(zhì)分為有機(jī)雜質(zhì)、無(wú)機(jī)雜質(zhì)和殘留溶劑。有關(guān)物質(zhì)是雜質(zhì)的一種，主要是指有機(jī)雜質(zhì)，它可能是原料藥合成過(guò)程中帶入的原料藥前體、中間體、試劑、分解物、副產(chǎn)物、聚合體、異構(gòu)體以及不同晶型、旋光異構(gòu)的物質(zhì)，也可能是制劑過(guò)程或是在貯藏、運(yùn)輸、使用過(guò)程中產(chǎn)生的降解物。

有關(guān)物質(zhì)的檢查方法很多，主要有薄層色譜法、高效液相色譜法（HPLC法）、氣相色譜法和紫外分光光度法等。其中，HPLC法由于分離效果好、專屬性強(qiáng)、靈敏度高，在有關(guān)物質(zhì)檢查中最為常用。在采用HPLC法對(duì)藥物進(jìn)行有關(guān)物質(zhì)分析時(shí)，一般要求考察最大雜質(zhì)峰面積或各雜質(zhì)峰面積的和，將其與對(duì)照溶液的主峰面積（主成分自身對(duì)照品法）或總峰面積（面積歸一化法）比較，規(guī)定應(yīng)不超過(guò)某一特定的數(shù)值。但在實(shí)際檢驗(yàn)過(guò)程中，排除配樣引進(jìn)或者是柱子沒沖干凈這些因素外，色譜圖上仍然會(huì)出現(xiàn)保留時(shí)間較弱的峰，易被誤認(rèn)為是雜質(zhì)峰，從而造成結(jié)果的誤判。筆者結(jié)合日常檢驗(yàn)工作和相關(guān)文獻(xiàn)，選取了幾個(gè)具有代表性的品種，將這些易被誤認(rèn)為是雜質(zhì)峰的峰歸納為溶劑峰、有機(jī)酸鹽峰、無(wú)機(jī)酸鹽峰和輔料峰，并對(duì)這些峰的形成原因進(jìn)行分析，以期對(duì)藥物的有關(guān)物質(zhì)HPLC方法的研究和常規(guī)檢查提供參考。

1.溶劑峰

在HPLC法中，由于溶解對(duì)照品或供試品的溶劑和流動(dòng)相在某一波長(zhǎng)的吸光值不一樣，因此產(chǎn)生了吸光值的變化，表現(xiàn)為出現(xiàn)溶劑峰。溶劑峰可能是正常形狀的峰，也可能是倒峰，還有可能是一組奇形怪狀的峰。減小該類溶劑峰最有效的方法是使用流動(dòng)相作為溶劑溶解樣品，這樣既可以避免樣品溶劑和流動(dòng)相之間任何強(qiáng)度或黏度的不匹配，也可以減少樣品分析時(shí)基線的漂移。

此外，值得注意的是，在進(jìn)行有關(guān)物質(zhì)分析時(shí)，要等基線平穩(wěn)后，再進(jìn)空白溶劑。一般進(jìn)樣2次，計(jì)算供試品溶液的雜質(zhì)峰時(shí)，溶劑峰位置的峰是不參與計(jì)算的。

2.有機(jī)酸鹽峰

《中華人民共和國(guó)藥典》（以下簡(jiǎn)稱《中國(guó)藥典》）2 0 1 5年版（二部）采用H P L C法對(duì)苯磺酸氨氯地平的有關(guān)物質(zhì)進(jìn)行控制。以甲醇-乙腈-0.7%三乙胺溶液（取三乙胺7.0 mL，加水至1000 mL，用磷酸調(diào)節(jié)pH值至3.0±0.1）（35:15:50）為流動(dòng)相，色譜柱為十八烷基硅烷鍵合硅膠柱，檢測(cè)波長(zhǎng)為237 nm。標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定：氨氯地平雜質(zhì)I峰的峰面積乘以2與其他各雜質(zhì)峰面積的和應(yīng)不得大于對(duì)照溶液主峰面積的1.5倍（1.5%）。實(shí)際檢測(cè)時(shí)，氨氯地平的出峰時(shí)間為17.5 min，但是在溶劑峰出峰的位置有響應(yīng)較高的峰（保留時(shí)間3.0 min），色譜圖見圖 1。若將該峰判定為雜質(zhì)峰，則會(huì)出現(xiàn)有關(guān)物質(zhì)超標(biāo)的情況。將苯磺酸配制成一定濃度進(jìn)樣后最終確定該峰為苯環(huán)酸的峰。也有研究采用液相色譜-四級(jí)桿飛行時(shí)間質(zhì)譜聯(lián)用對(duì)苯磺酸的出峰予以確證。苯磺酸為一元有機(jī)酸，其pKa為0.7，在通常的流動(dòng)相pH范圍內(nèi)，苯磺酸氨氯地平主要解離為氨氯地平陽(yáng)離子（被質(zhì)子化）和苯磺酸陰離子（C6H5SO3-），因此，苯磺酸氨氯地平會(huì)出現(xiàn)兩個(gè)峰，一個(gè)是苯磺酸（保留時(shí)間較短），一個(gè)是氨氯地平。

同時(shí)，研究表明，采用反相HPLC法同時(shí)測(cè)定復(fù)方感冒藥中的多種成分時(shí)，對(duì)馬來(lái)酸氯苯那敏色譜峰的識(shí)別易出現(xiàn)判斷錯(cuò)誤，將馬來(lái)酸的峰誤認(rèn)為是馬來(lái)酸氯苯那敏。馬來(lái)酸為二元有機(jī)酸，其pKa分別為2.00和6.26，在通常的流動(dòng)相pH范圍內(nèi)，馬來(lái)酸氯苯那敏主要解離為氯苯那敏陽(yáng)離子（被質(zhì)子化）和馬來(lái)酸陰離子（HOOCCH=CHCOO-），因此，馬來(lái)酸氯苯那敏也會(huì)出現(xiàn)兩個(gè)峰。

在色譜系統(tǒng)開發(fā)過(guò)程中，一般會(huì)調(diào)節(jié)流動(dòng)相pH，與目標(biāo)化合物pKa相差2個(gè)單位以上，使藥物全部解離或結(jié)合，這樣才能準(zhǔn)確定量。對(duì)于帶有機(jī)酸根的化合物的液相檢測(cè)，比如馬來(lái)酸氯苯那敏、富馬酸喹硫平、苯磺酸氨氯地平，在選擇的流動(dòng)相pH條件下，若目標(biāo)化合物以離子型存在，則馬來(lái)酸、苯磺酸和富馬酸等有機(jī)酸也會(huì)以鹽的形式存在，這些有機(jī)酸因含有共軛結(jié)構(gòu)均有紫外吸收，從而在液相條件下也會(huì)出現(xiàn)一個(gè)色譜峰。因此，做此類物質(zhì)的有關(guān)物質(zhì)和含量測(cè)定時(shí)就應(yīng)注意，不應(yīng)將有機(jī)酸的峰誤認(rèn)為是雜質(zhì)峰，或者是將有機(jī)酸的峰誤認(rèn)為是目標(biāo)化合物的峰，造成結(jié)果的誤判。

3.無(wú)機(jī)酸鹽峰

《中國(guó)藥品標(biāo)準(zhǔn)》采用HPLC法檢測(cè)鹽酸左氧氟沙星氯化鈉注射液的有關(guān)物質(zhì)。以硫酸銅D-苯丙氨酸溶液（取D-苯丙氨酸1.32 g與硫酸銅1 g，加水1000 mL溶解后，用氫氧化鈉試液調(diào)節(jié)pH值至3.5）-甲醇（82:18）為流動(dòng)相，檢測(cè)波長(zhǎng)為293 nm。標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定，供試品溶液色譜圖中如有雜質(zhì)峰，各雜質(zhì)峰面積的和不得大于對(duì)照溶液主峰面積。實(shí)際分析時(shí)，在3.3 min出現(xiàn)一個(gè)很大的峰，色譜圖見圖 2。經(jīng)過(guò)分析，認(rèn)為與鹽酸稀釋后進(jìn)樣的峰位相同，因而在計(jì)算有關(guān)物質(zhì)時(shí)不應(yīng)將該峰誤認(rèn)為是雜質(zhì)峰。

筆者在參與針對(duì)新版藥典用的氫溴酸右美沙芬化學(xué)對(duì)照品的標(biāo)化工作中，參照《中國(guó)藥典》 中氫溴酸右美沙芬膠囊含量測(cè)定的方法，對(duì)氫溴酸右美沙芬進(jìn)行有關(guān)物質(zhì)檢查，流動(dòng)相為乙腈－磷酸鹽緩沖液（取磷酸和三乙胺各5 mL，加水至1000 mL）（28:72），檢測(cè)波長(zhǎng)220 nm，實(shí)際檢測(cè)時(shí)發(fā)現(xiàn)在2.5 min出了一個(gè)很大的色譜峰。為了驗(yàn)證該峰，用溴水稀釋后直接進(jìn)樣分析，結(jié)果在同樣位置出峰。見圖 3。因此，在結(jié)果判定時(shí)，應(yīng)注意不要誤將該峰歸納入雜質(zhì)峰。

類似于含有有機(jī)酸的藥物，含有無(wú)機(jī)酸的藥物在通常的流動(dòng)相pH條件下也均會(huì)發(fā)生解離，以鹽形式存在的化合物進(jìn)入液相系統(tǒng)后會(huì)以游離堿的形式存在，鹽酸和氫溴酸是強(qiáng)酸，也在流動(dòng)相里解離形成氯離子和溴離子。肖欣等在對(duì)不同水中氯離子含量的比對(duì)分析中，用1 cm的石英比色皿，取一定濃度的氯化鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液作為待測(cè)液，采用紫外-可見分光光度計(jì)，掃描范圍280~350 nm，確定了氯離子在波長(zhǎng)為308.7 nm左右處有最大吸收。呂偉等研究也驗(yàn)證了溴離子在200~220 nm波長(zhǎng)范圍內(nèi)有較強(qiáng)的紫外吸收。分析原因，可能是氯離子和溴離子有8電子的穩(wěn)定結(jié)構(gòu)而導(dǎo)致紫外吸收，具體原因還有待進(jìn)一步分析。

4.輔料峰

藥用輔料是指在藥品制劑中經(jīng)過(guò)合理的安全評(píng)價(jià)的不包括有效成分或前體的組分。例如，在配制注射劑時(shí)，可以根據(jù)藥物的性質(zhì)加入適宜的輔料，如滲透壓調(diào)節(jié)劑、pH值調(diào)節(jié)劑、增溶劑、組溶劑、抑菌劑和抗氧劑等，注射劑中所用到的輔料應(yīng)在標(biāo)簽及說(shuō)明書中說(shuō)明。對(duì)于在HPLC法中會(huì)出峰的輔料，在對(duì)藥物進(jìn)行有關(guān)物質(zhì)檢測(cè)時(shí)，應(yīng)扣除輔料峰的影響。

《中國(guó)藥典》收載了利巴韋林原料及利巴韋林注射液，標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定利巴韋林原料及其注射液中單個(gè)雜質(zhì)的峰面積應(yīng)不得大于對(duì)照溶液主峰面積的0.25倍（0.25%），各雜質(zhì)峰面積的和應(yīng)不得大于對(duì)照溶液的主峰面積（1.0%）。研究發(fā)現(xiàn)，采用《中國(guó)藥典》的方法檢查利巴韋林注射液的有關(guān)物質(zhì)時(shí)，對(duì)于加有氯化鈉的利巴韋林注射液而言，氯化鈉會(huì)在利巴韋林的雜質(zhì)峰處同樣出現(xiàn)吸收峰。文獻(xiàn)報(bào)道，氯離子在200~220 nm范圍內(nèi)有較弱的紫外吸收，而且氯離子在磺酸型陽(yáng)離子交換柱上存在離子排斥，故氯化鈉在色譜柱上基本不保留，對(duì)有關(guān)物質(zhì)檢查干擾很大，故在有關(guān)物質(zhì)檢測(cè)時(shí)應(yīng)排除氯化鈉峰的影響，或者建議企業(yè)在利巴韋林注射液的處方中標(biāo)注氯化鈉的量或不加氯化鈉以利于檢測(cè)。

同時(shí)，在對(duì)硝酸甘油片有關(guān)物質(zhì)研究中，建立了液質(zhì)聯(lián)用法確證了色譜圖中保留時(shí)間2.8 min前的色譜峰為聚維酮K29/32的輔料峰，解決了硝酸甘油片質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中有關(guān)物質(zhì)輔料峰的判定和扣除問題。在扣除輔料峰后，3批硝酸甘油片樣品的有關(guān)物質(zhì)結(jié)果均符合規(guī)定，為《中國(guó)藥典》中硝酸甘油片質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)修訂提供了參考。

此外，《中國(guó)藥典》收載的阿奇霉素分散片的有關(guān)物質(zhì)檢驗(yàn)明確規(guī)定了計(jì)算時(shí)予以扣除相對(duì)保留時(shí)間0.12之前的色譜峰為輔料峰，必要時(shí)應(yīng)取輔料進(jìn)行對(duì)照。研究表明，羅紅霉素分散片中的輔料糖精鈉的保留時(shí)間受儀器、色譜柱、流動(dòng)相配比影響不大，在一定的流速范圍內(nèi)只根據(jù)保留時(shí)間就能很好地對(duì)其進(jìn)行定性，在做有關(guān)物質(zhì)檢查時(shí)可以直接將其扣除。

國(guó)家藥典委員會(huì)藥典業(yè)化函8號(hào)文對(duì)雜質(zhì)峰的問題作了如下規(guī)定：“雜質(zhì)峰不包括溶劑峰和確認(rèn)的輔料峰，藥品說(shuō)明書應(yīng)列出制劑中所用輔料名稱”。按照理解，已被確認(rèn)的輔料峰在有關(guān)物質(zhì)判定時(shí)不被認(rèn)為是雜質(zhì)峰，可以將其扣除。但將其扣除前必須對(duì)其進(jìn)行研究，以確認(rèn)其確實(shí)為某種輔料峰，而非輔料中的雜質(zhì)峰，如無(wú)法確認(rèn)是何種輔料則無(wú)法扣除。筆者建議，在制劑的有關(guān)物質(zhì)方法開發(fā)中，也可以避開輔料存在的吸收波長(zhǎng)，同時(shí)選取主成分和各雜質(zhì)的特征波長(zhǎng)，使輔料無(wú)吸收或有較低吸收，以消除或降低輔料峰的干擾；或者更改提取溶劑，利用藥用輔料和主藥的溶解性差異，在充分了解輔料和主藥理化性質(zhì)的情況下更換提取溶劑，將輔料峰降至最低干擾，以便可以忽略不計(jì)。

5.結(jié)語(yǔ)

藥物中有關(guān)物質(zhì)的研究是藥物研發(fā)和質(zhì)量控制的一個(gè)重要方面，貫穿于藥品研究、生產(chǎn)和儲(chǔ)存的整個(gè)過(guò)程。這就要求分析工作者對(duì)檢驗(yàn)過(guò)程中出現(xiàn)的雜質(zhì)峰予以重視，以免出現(xiàn)錯(cuò)誤的結(jié)果。只有這樣，才能真正使HPLC法測(cè)定有關(guān)物質(zhì)的檢驗(yàn)數(shù)據(jù)準(zhǔn)確、可靠。