一、原料藥中亞硝基胺雜質(zhì)控制的法規(guī)背景
2018年7月5日EMA發(fā)布的有關(guān)纈沙坦的公告和2018年12月11日FDA官方網(wǎng)站上有關(guān)華海藥業(yè)的警告信將華海藥業(yè)推到了風(fēng)口浪尖。事件的主角是之前默默無聞的纈沙坦原料藥中的微量雜質(zhì)N-亞硝基二胺（NDMA）。N-亞硝基二胺（NDMA）是一種基因毒性雜質(zhì)，可以直接或間接損傷細(xì)胞DNA，能引起基因突變，甚至是可能促使腫瘤發(fā)生。世界衛(wèi)生組織國(guó)際癌癥研究機(jī)構(gòu)將N-亞硝基二胺（NDMA）列為2類致癌物質(zhì)，其對(duì)人類致癌性證據(jù)有限，對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物致癌性證據(jù)充分。隨著事件的發(fā)酵和科學(xué)的認(rèn)知，人們發(fā)現(xiàn)不僅在纈沙坦、厄貝沙坦、氯沙坦等沙坦類抗高血壓藥物中有，還在抗胃酸藥雷尼替丁和尼扎替丁中也有，甚至在抗糖神藥二甲雙胍中也存在亞硝胺雜質(zhì)。同時(shí)亞硝基雜質(zhì)從最初檢測(cè)出的單一的N-亞硝基二胺（NDMA）發(fā)展到原料藥或藥品中已檢測(cè)出N-亞硝基二甲胺（NDEA）、N-亞硝基-N-甲基-4-氨基丁酸（NMBA）、N-亞硝基異丙基乙胺（NIPEA）和N-亞硝基甲基苯胺（NMPA）雜質(zhì)以及理論上應(yīng)該存在的N-亞硝基二異丙胺（NDPA）和N-亞硝二丁基胺（NDBA）等雜質(zhì)。
EMA針對(duì)亞硝胺雜質(zhì)連續(xù)發(fā)文，包括2020年6月23日沙坦類藥品中亞硝胺雜質(zhì)事件教訓(xùn)，2020年6月25日藥品中的亞硝胺雜質(zhì)評(píng)估報(bào)告 EMEA/H/A-5(3) /1490，2020年8月3日 授權(quán)持有人/申請(qǐng)人就CHMP對(duì)第726/2004號(hào)條例關(guān)于人用藥品中亞硝胺雜質(zhì)的第5(3)條的意見的提問和回答 EMA/409815(4) /2020等，文中重點(diǎn)說明了亞硝基雜質(zhì)存在的根本原因，如何進(jìn)行亞硝胺雜質(zhì)進(jìn)行評(píng)估，如何進(jìn)行檢測(cè)確認(rèn)，分析方法及限度要求，MAH應(yīng)如何展開相應(yīng)后續(xù)工作等等。原料藥生產(chǎn)企業(yè)申報(bào)CEP時(shí)需要在3.2.S.3.2雜質(zhì)項(xiàng)下描述亞硝胺雜質(zhì)情況，否則會(huì)收到缺陷信。注冊(cè)同行要知道延誤獲得CEP證書的時(shí)間，是直接或間接會(huì)增加企業(yè)的成本。筆者在2021年5月就收到了EDQM要求增補(bǔ)亞硝胺雜質(zhì)信息的發(fā)補(bǔ)，其原文為“A suitable risk assessment in relation to the possible formation of nitrosamines should be included in 3.2.S.3.2. This should take into account the manufacturing process, including starting materials and raw materials used.”
2020年9月1日，F(xiàn)DA頒布《人用藥中亞硝胺雜質(zhì)控制》指南，建議了API和藥品生產(chǎn)商應(yīng)采取的步驟，以檢測(cè)和防止藥品中亞硝胺雜質(zhì)含量不合格。同時(shí)美國(guó)藥典委員會(huì)USP發(fā)布了通則（1469）亞硝胺雜質(zhì)征求意見稿，對(duì)樣品制備，限度推導(dǎo)、計(jì)算方法等進(jìn)行了描述，并提供了四種參考定量方法。USP特別推薦亞硝胺雜質(zhì)定量分析方法驗(yàn)證應(yīng)考慮線性范圍、準(zhǔn)確度、重現(xiàn)性、中間精密度和定量限等指標(biāo)及其可接受標(biāo)準(zhǔn)。FDA在指南中也明確了亞硝胺雜質(zhì)評(píng)估的時(shí)間表：1.已上市或批準(zhǔn)的原料藥或藥品，在指南發(fā)布后6個(gè)月內(nèi)完成風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估；評(píng)估發(fā)現(xiàn)有亞硝胺雜質(zhì)的品種應(yīng)盡快進(jìn)行檢測(cè)并在3年內(nèi)完成必要的注冊(cè)變更申報(bào)。2.已申報(bào)正在審評(píng)中的原料藥或藥品，盡快完成風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估，檢測(cè)發(fā)現(xiàn)亞硝胺雜質(zhì)高于可接受限度（AI）的應(yīng)立即通知FDA；3.準(zhǔn)備申報(bào)的原料藥或藥品，進(jìn)行風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估必要時(shí)檢測(cè)確認(rèn)；若已完成除亞硝胺雜質(zhì)評(píng)估外工作原計(jì)劃立即申報(bào)的，可先提交申請(qǐng)，在完成亞硝胺雜質(zhì)評(píng)估和測(cè)試后以增補(bǔ)或變更內(nèi)容提交。
2020年5月，國(guó)家藥監(jiān)局藥審中心發(fā)布了《化學(xué)藥物中亞硝胺類雜質(zhì)研究技術(shù)指導(dǎo)原則(試行)》。因此無論是基于內(nèi)部質(zhì)量管理體系要求，還是考慮外部產(chǎn)品申報(bào)注冊(cè)和回復(fù)客戶問卷調(diào)查需求，國(guó)內(nèi)的原料藥生產(chǎn)企業(yè)應(yīng)對(duì)產(chǎn)品進(jìn)行亞硝基雜質(zhì)的風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估并據(jù)此制定控制策略。需要特別提醒的是，從今往后，原料藥生產(chǎn)企業(yè)甚至產(chǎn)品研發(fā)公司對(duì)基因毒性雜質(zhì)包含亞硝胺雜質(zhì)應(yīng)在產(chǎn)品的研發(fā)源頭即開始考慮，此舉對(duì)產(chǎn)品生命周期全過程管理起著至關(guān)重要的作用。引用孫子兵法云：“謀定而后動(dòng)，知止而有得”。企業(yè)的決策如同作戰(zhàn)用兵，必須做到三思而后行，從而實(shí)現(xiàn)“未戰(zhàn)而廟算勝”。
二、舉例進(jìn)行原料藥中亞硝胺雜質(zhì)的評(píng)估
1 風(fēng)險(xiǎn)識(shí)別
在公司內(nèi)組建一個(gè)包含研發(fā)部、生產(chǎn)部、物控部、工程設(shè)備部、化驗(yàn)室和質(zhì)量保證部等部門人員的評(píng)估團(tuán)隊(duì)展開以下工作。
研發(fā)部人員為主，根據(jù)FDA和ICH指南首先從理論上確定亞硝胺雜質(zhì)化學(xué)結(jié)構(gòu)為亞硝基與胺（R1N（-R2）-N=O），如下反應(yīng)方程所示。它們通過胺（仲胺、叔胺或季胺類）和亞硝酸（酸性條件下的亞硝酸鹽）之間的亞硝化反應(yīng)形成。
接下來以研發(fā)為主的評(píng)估團(tuán)隊(duì)結(jié)合本公司實(shí)際情況從理論上梳理了亞硝胺雜質(zhì)可能存在的根本原因和需要排查的情況見下表.凡是對(duì)于排查結(jié)果為有的，應(yīng)進(jìn)一步重點(diǎn)分析評(píng)估，必要時(shí)應(yīng)采取措施降低亞硝胺雜質(zhì)的存在限度。
評(píng)估團(tuán)隊(duì)逐一對(duì)原料藥A的以上八種情況進(jìn)行了討論和評(píng)估，沒有發(fā)現(xiàn)任何一個(gè)符合上述產(chǎn)生亞硝胺雜質(zhì)根本原因的情況。但一致認(rèn)為應(yīng)按照指南從各個(gè)可能的源頭和具體細(xì)節(jié)進(jìn)行進(jìn)一步的討論。
亞硝胺雜質(zhì)可能從多個(gè)來源進(jìn)入原料藥A，評(píng)估團(tuán)隊(duì)從下面魚骨圖中各個(gè)影響因素來討論亞硝胺雜質(zhì)的情況。
1.1 生產(chǎn)設(shè)備
原料藥A生產(chǎn)過程中用到的設(shè)備清單表
原料藥A生產(chǎn)過程中所用的設(shè)備均為專用設(shè)備，這些設(shè)備含輔助用品，如濾袋、濾紙、墊圈、閥門等材質(zhì)均不含亞硝基化合物，胺基和亞硝基。同時(shí)，儲(chǔ)存和轉(zhuǎn)移用到的儲(chǔ)罐、管道、桶等均為不銹鋼或聚丙烯材質(zhì)，也不含亞硝基化合物、胺基和亞硝基結(jié)構(gòu)。因此，原料藥A生產(chǎn)設(shè)備帶來亞硝胺雜質(zhì)污染的風(fēng)險(xiǎn)極低。
1.2 包裝系統(tǒng)
原料藥A直接接觸的內(nèi)包裝為低密度聚乙烯，該供應(yīng)商是經(jīng)現(xiàn)場(chǎng)審計(jì)批準(zhǔn)和具有藥用塑料袋國(guó)家注冊(cè)證的合格供應(yīng)商。根據(jù)原料藥A的性質(zhì)，產(chǎn)品在室溫條件保存理論上不會(huì)與低密度聚乙烯產(chǎn)生相互作用，更不會(huì)產(chǎn)生亞硝胺雜質(zhì)。包裝過程在潔凈區(qū)18-26℃進(jìn)行，不涉及熱熔或吹泡，而是采用雙層藥用塑料袋包裝每層塑料扎帶扎緊，也不會(huì)產(chǎn)生亞硝胺雜質(zhì)。因此原料藥A包裝系統(tǒng)帶來的亞硝胺雜質(zhì)污染風(fēng)險(xiǎn)也極低。
1.3 原輔料
原料藥A生產(chǎn)過程中用到的原輔料清
從上表中各物料的結(jié)構(gòu)式或分子式可知，原料藥A的物料中沒有用到亞硝酸鈉和其它任何亞硝酸化合物，但用到了仲胺和叔胺化合物以及強(qiáng)酸鹽酸。評(píng)估團(tuán)隊(duì)對(duì)以上物料逐一進(jìn)行了風(fēng)險(xiǎn)分析。
起始原料
原料藥A的起始物料。它的制備過程為：以XXXX為原料，以甲醇為溶劑和丙酮氰醇、碳酸鉀發(fā)生氰化反應(yīng)，用鹽酸中和水解得到氰化物；氰基物再與乙二醇和原甲酸三乙酯以及對(duì)甲苯磺酸進(jìn)行縮酮反應(yīng)，加三乙胺水析得到縮酮物；第三步先用鎂、一氯甲烷、四氫呋喃制備格氏試劑，然后縮酮物以甲苯做溶劑與慢慢滴加的格氏試劑反應(yīng)，最后用鹽酸中和得到格氏物；格氏物在甲醇中用鹽酸水解，再用碳酸鈉中和水析得到粗品；粗品在二氯甲烷和乙醇中用活性炭脫色，固液分離最后用甲醇溶解，降溫析晶得到起始原料成品。整個(gè)工藝過程未用到亞硝酸鈉或其它亞硝基類化合物，僅在縮酮反應(yīng)后用到三乙胺進(jìn)行中和，反應(yīng)體系不是強(qiáng)酸性且不存在亞硝基化合物，因此不會(huì)形成亞硝胺雜質(zhì)。經(jīng)現(xiàn)場(chǎng)審計(jì)確認(rèn)：起始原料供應(yīng)商有完善的質(zhì)量保證體系，且采用專用生產(chǎn)線組織生產(chǎn)，不使用回收溶劑或物料也沒有委托第三方進(jìn)行回收，溶劑采用專用槽車運(yùn)輸且生產(chǎn)過程不使用塑料或鐵桶轉(zhuǎn)運(yùn)而直接用管道傳輸?shù)缴a(chǎn)車間，生產(chǎn)過程遵守詳細(xì)的操作規(guī)程等等。結(jié)合對(duì)供應(yīng)商的現(xiàn)場(chǎng)審計(jì)情況及其生產(chǎn)、儲(chǔ)存和運(yùn)輸?shù)裙芾泶胧?，原料藥A起始物料中雖然使用了EMA提到的溶劑甲苯（有報(bào)道稱可能還有伯胺或仲胺雜質(zhì)）和試劑三乙胺，但總體上亞硝胺雜質(zhì)存在的風(fēng)險(xiǎn)較低。
醋酐
醋酐生產(chǎn)采用乙酸在高溫、負(fù)壓條件下，以磷酸三乙酯作催化劑，其乙酸蒸汽在裂化管內(nèi)裂解生成乙烯酮和水。經(jīng)冷凝并冷卻分離后，乙烯酮用乙酸吸收，生成粗醋酐；粗醋酐經(jīng)精餾提純制得醋酐。制備醋酐的工藝過程未用到胺類化合物及亞硝基類化合物。結(jié)合對(duì)供應(yīng)商的問卷調(diào)查情況及其生產(chǎn)、儲(chǔ)存和運(yùn)輸?shù)裙芾泶胧鋪喯醢冯s質(zhì)污染風(fēng)險(xiǎn)極低。
起始原料
冰醋酸以乙醛為原料，醋酸錳為催化劑，氧化生成醋酸。冰醋酸制備工藝過程未用到胺類化合物及亞硝基類化合物。結(jié)合對(duì)供應(yīng)商的問卷調(diào)查情況及其生產(chǎn)、儲(chǔ)存和運(yùn)輸?shù)裙芾泶胧?，其亞硝胺雜質(zhì)污染風(fēng)險(xiǎn)極低。
四氫呋喃
1.4-丁二醇在酸性（硫酸）條件下脫水制得四氫呋喃粗品，粗品經(jīng)精餾得到四氫呋喃。四氫呋喃制備工藝過程未用到胺類化合物及亞硝基類化合物。同時(shí)本公司四氫呋喃供應(yīng)商采用專用桶包裝和運(yùn)輸。結(jié)合對(duì)供應(yīng)商的調(diào)查問卷情況及其生產(chǎn)、儲(chǔ)存和運(yùn)輸?shù)裙芾泶胧?，其亞硝胺雜質(zhì)污染風(fēng)險(xiǎn)極低。
原甲酸三乙酯
原甲酸三乙酯以乙醇、氫氧化鈉和氯仿為原料。先以乙醇和氫氧化物制得乙醇鈉溶液，再于氯仿進(jìn)行縮合反應(yīng)，除去固體氯化鈉后，精餾得到原甲酸三乙酯。原甲酸三乙酯制備工藝過程未用到胺類化合物及亞硝基類化合物。同時(shí)本公司原甲酸三乙酯供應(yīng)商采用專用桶包裝和運(yùn)輸。結(jié)合對(duì)供應(yīng)商的現(xiàn)場(chǎng)審計(jì)情況及其生產(chǎn)、儲(chǔ)存和運(yùn)輸?shù)裙芾泶胧鋪喯醢冯s質(zhì)污染風(fēng)險(xiǎn)極低。
無水乙醇
乙醇采用分子篩吸附法制得。無水乙醇制備工藝過程未用到胺類化合物及亞硝基類化合物。同時(shí)本公司乙醇供應(yīng)商采用專用槽車運(yùn)輸。結(jié)合對(duì)供應(yīng)商的問卷調(diào)查情況及其生產(chǎn)、儲(chǔ)存和運(yùn)輸?shù)裙芾泶胧?，其亞硝胺雜質(zhì)污染風(fēng)險(xiǎn)極低。
N-甲基苯胺
N-甲基苯胺采用苯胺和甲醇在銅鋅鉻催化劑作用下進(jìn)行烷基化反應(yīng)得到N-甲基苯胺，再經(jīng)過精餾制得高純度的N-甲基苯胺。N-甲基苯胺為仲胺結(jié)構(gòu)，在酸性條件下若與亞硝酸反應(yīng)會(huì)產(chǎn)生N-甲基苯基亞硝胺雜質(zhì)（NMPA）。結(jié)合對(duì)供應(yīng)商的現(xiàn)場(chǎng)審計(jì)情況及其生產(chǎn)、儲(chǔ)存和運(yùn)輸?shù)裙芾泶胧?，N-甲基苯胺的生產(chǎn)過程沒有用到任何亞硝基化合物，理論上其亞硝胺雜質(zhì)污染風(fēng)險(xiǎn)低。但考慮其本身為仲胺，需要進(jìn)一步考慮原料藥A制備過程中N-甲基苯胺使用步驟是否在強(qiáng)酸條件下與亞硝酸鈉或其它亞硝基化合物有接觸，故N-甲基苯胺的使用存在一定亞硝基雜質(zhì)污染的風(fēng)險(xiǎn)。
甲醛
甲醛采用甲醇在銀催化下空氣氧化法制得。甲醛制備工藝過程未用到胺類化合物及亞硝基類化合物。同時(shí)本公司甲醛供應(yīng)商采用專用桶儲(chǔ)存和運(yùn)輸。結(jié)合對(duì)供應(yīng)商的問卷調(diào)查情況及其生產(chǎn)、儲(chǔ)存和運(yùn)輸?shù)裙芾泶胧?，其亞硝胺雜質(zhì)污染風(fēng)險(xiǎn)極低。
鹽酸
鹽酸主要由氫氣和氯氣反應(yīng)制得氯化氫氣體，冷卻后用水吸收成為鹽酸。鹽酸制備工藝過程未用到胺類化合物及亞硝基類化合物。同時(shí)本公司鹽酸供應(yīng)商采用專用設(shè)備生產(chǎn)和儲(chǔ)存，也用專用桶儲(chǔ)存和運(yùn)輸。結(jié)合對(duì)供應(yīng)商的問卷調(diào)查情況及其生產(chǎn)、儲(chǔ)存和運(yùn)輸?shù)却胧?，其亞硝胺雜質(zhì)污染風(fēng)險(xiǎn)極低。但鹽酸作為強(qiáng)酸可作為亞硝酸生成的因素之一，需要特別考慮其被使用的步驟是否有亞硝胺化合物和胺類化合物存在，最終導(dǎo)致亞硝胺雜質(zhì)產(chǎn)生的可能性。
N,N-二甲基甲酰胺
N,N-二甲基甲酰胺以甲醇為溶劑，甲醇鈉為催化劑，將原料一氧化碳在高壓下與二甲胺反應(yīng)，經(jīng)過分離得到N,N-二甲基甲酰胺。N,N-二甲基甲酰胺為叔胺結(jié)構(gòu)，在酸性條件下若與亞硝酸反應(yīng)會(huì)產(chǎn)生N，N-二甲基亞硝胺雜質(zhì)（NDMA）.結(jié)合對(duì)供應(yīng)商的問卷調(diào)查情況及其生產(chǎn)、儲(chǔ)存和運(yùn)輸?shù)裙芾泶胧?，N,N-二甲基甲酰胺自身制備過程沒有用到亞硝基化合物，故形成亞硝胺雜質(zhì)可能性低。但考慮它本身為胺類，需要進(jìn)一步考慮原料藥A制備過程中N,N-二甲基甲酰胺使用步驟是否在強(qiáng)酸條件下與亞硝酸鈉或其它亞硝基化合物有接觸，故N,N-二甲基甲酰胺的使用，存在產(chǎn)生亞硝胺雜質(zhì)的風(fēng)險(xiǎn)。
鈀炭
鈀炭合成過程為活性炭加入飲用水中攪拌，以氯化鈀溶液滴加到活性炭水溶液中進(jìn)行碳吸附，滴加完成后通氫氣進(jìn)行還原，還原反應(yīng)完畢后加氫氧化鈉水溶液中和，離心，水洗得到鈀炭。鈀碳制備工藝過程未用到胺類化合物及亞硝基類化合物，同時(shí)本公司鈀炭供應(yīng)商采用專用設(shè)備生產(chǎn)。結(jié)合對(duì)供應(yīng)商的問卷調(diào)查情況及其生產(chǎn)、儲(chǔ)存和運(yùn)輸?shù)却胧?，其亞硝胺雜質(zhì)污染風(fēng)險(xiǎn)極低。
化合物B
化合物B以XXXX為原料，加硫酸進(jìn)行脫水得到XXXX粗品，粗品經(jīng)過精餾得到化合物B?；衔顱制備工藝過程未用到胺類化合物及亞硝基類化合物。同時(shí)本公司化合物B供應(yīng)商采用專用設(shè)備生產(chǎn)和儲(chǔ)存，也用專用桶儲(chǔ)存和運(yùn)輸。結(jié)合對(duì)供應(yīng)商的問卷調(diào)查情況及其生產(chǎn)、儲(chǔ)存和運(yùn)輸?shù)裙芾泶胧鋪喯醢冯s質(zhì)污染風(fēng)險(xiǎn)極低。
甲醇
甲醇以一氧化碳與氫氣為原料在加壓和高溫下采用酮基催化劑合成甲醇。甲醇制備工藝過程未用到胺類化合物及亞硝基類化合物。同時(shí)本公司甲醇供應(yīng)商采用專用儲(chǔ)罐儲(chǔ)存，也用專用桶運(yùn)輸。結(jié)合對(duì)供應(yīng)商的現(xiàn)場(chǎng)審計(jì)情況及其生產(chǎn)、儲(chǔ)存和運(yùn)輸?shù)裙芾泶胧?，其亞硝胺雜質(zhì)污染風(fēng)險(xiǎn)極低。
二氯甲烷
二氯甲烷以氯甲烷和液氯為原料，氯化鈣為催化劑制得二氯甲烷。二氯甲烷制備工藝過程未用到胺類化合物及亞硝基類化合物。同時(shí)本公司二氯甲烷供應(yīng)商采用專用設(shè)備生產(chǎn)和儲(chǔ)存，也用專用桶儲(chǔ)存和運(yùn)輸。結(jié)合對(duì)供應(yīng)商現(xiàn)場(chǎng)審計(jì)情況及其生產(chǎn)、儲(chǔ)存和運(yùn)輸?shù)裙芾泶胧?，其亞硝胺雜質(zhì)污染風(fēng)險(xiǎn)極低。
活性炭
活性炭以木屑為原料，干燥后與氯化鋅溶液混合攪拌，然后進(jìn)行碳化，碳化完成后萃取氯化鋅。再用鹽酸水溶液除去碳中的鋅離子，用飲用水沖洗鹽酸，最后干燥得到活性炭?；钚蕴恐苽涔に囘^程未用到胺類化合物及亞硝基類化合物。結(jié)合對(duì)供應(yīng)商的問卷調(diào)查情況及其生產(chǎn)、儲(chǔ)存和運(yùn)輸?shù)却胧?，其亞硝胺雜質(zhì)污染風(fēng)險(xiǎn)極低。
對(duì)甲苯磺酸
對(duì)甲苯磺酸以三氧化硫作為磺化劑，加入少量醋酸作為定位劑，磺化甲苯制備得到對(duì)甲苯磺酸。對(duì)甲苯磺酸制備工藝過程未用到胺類化合物及亞硝基類化合物。結(jié)合對(duì)供應(yīng)商的問卷調(diào)查情況及其生產(chǎn)、儲(chǔ)存和運(yùn)輸?shù)却胧鋪喯醢冯s質(zhì)污染風(fēng)險(xiǎn)極低。
吡啶
吡啶以β-酮酸酯，乙醛及氨做原料，經(jīng)多分子環(huán)化成吡啶。吡啶及其衍生物比苯穩(wěn)定，其反應(yīng)性與硝基苯類似。典型的芳香族親電取代反應(yīng)發(fā)生在3、5位上，但反應(yīng)性比苯低，一般不易發(fā)生硝化、鹵化、磺化等反應(yīng)。結(jié)合對(duì)供應(yīng)商的問卷調(diào)查情況及其生產(chǎn)、儲(chǔ)存和運(yùn)輸?shù)裙芾?，其形成亞硝胺雜質(zhì)可能性低。但也應(yīng)考慮其使用過程中是否在強(qiáng)酸條件下與亞硝酸鈉或其它亞硝基化合物接觸，吡啶的使用存在亞硝胺雜質(zhì)污染的一定風(fēng)險(xiǎn)。
碳酸氫鈉
碳酸氫鈉主要采用純堿碳化法合成。碳酸氫鈉制備工藝過程未用到胺類化合物及亞硝基類化合物。結(jié)合對(duì)供應(yīng)商的問卷調(diào)查情況及其生產(chǎn)、儲(chǔ)存和運(yùn)輸?shù)却胧?，其亞硝胺雜質(zhì)污染風(fēng)險(xiǎn)極低。
飲用水
本公司原料藥A合成過程中用到較大配比的飲用水。生產(chǎn)過程用到的飲用水由XXXX市自來水公司管網(wǎng)供應(yīng)，自來水公司采用 “混凝—沉淀—過濾—消毒”流程對(duì)原水處理，過程中加入了二氧化氯，硫酸鋁，沒有使用亞硝酸鈉或其它亞硝基化合物處理，同時(shí)也沒有加入任何胺類化合物。但因亞硝基化合物廣泛存在于植物中，原水不可避免的含有一定量的亞硝基化合物。本公司每年委托有資質(zhì)的單位按照國(guó)標(biāo)進(jìn)行飲用水的全檢，2020年飲用水檢測(cè)結(jié)果中顯示亞硝基濃度為0.003mg/L，因此需要考慮在原料藥A制備中飲用水的使用步驟是否在強(qiáng)酸條件下能與胺類化合物接觸發(fā)生反應(yīng)形成亞硝胺雜質(zhì)。因此飲用水的使用存在一定的亞硝胺雜質(zhì)污染風(fēng)險(xiǎn)。
綜上所述，原料藥A原輔料中的N,N-二甲基甲酰胺、N-甲基苯胺、吡啶和飲用水存在引入亞硝胺雜質(zhì)污染的風(fēng)險(xiǎn)，需要從工藝的角度進(jìn)一步討論其可能性。
1.4 從工藝流程方面進(jìn)行評(píng)估
原料藥A工藝流程圖
1.4.1 各工序是否能產(chǎn)生亞硝胺雜質(zhì)的討論
中間體1制備工序
以起始原料為原料，冰醋酸和醋酐為反應(yīng)溶劑，對(duì)甲苯磺酸作催化劑，發(fā)生?；磻?yīng)。反應(yīng)完成后，加乙醇與過量的醋酐反應(yīng)生成乙酸乙酯，終止反應(yīng)。再加鹽酸水解副產(chǎn)物單酯雙酯物，水解反應(yīng)完成后加碳酸氫鈉中和至中性，離心。固體物水洗干燥得到中間體1。
根據(jù)亞硝胺雜質(zhì)生成的原理：亞硝酸鈉或其它亞硝基化合物，胺類化合物在強(qiáng)酸下條件形成。本步反應(yīng)中沒有使用任何亞硝基化合物和胺類化合物，即使在鹽酸強(qiáng)酸性條件下不會(huì)有亞硝胺雜質(zhì)形成。假設(shè)起始原料中殘留微量的三乙胺與飲用水中極微量的亞硝基在本步強(qiáng)酸條件下生成N-二乙胺亞硝基雜質(zhì)（NDEA），也是極低量的存在，可考慮對(duì)成品進(jìn)行測(cè)試進(jìn)一步證實(shí)。
中間體2制備工序
以中間體1為原料，四氫呋喃和無水乙醇為溶劑，原甲酸三乙酯做反應(yīng)試劑，對(duì)甲苯磺酸為催化劑進(jìn)行醚化反應(yīng)。醚化反應(yīng)完成后加入N-甲基苯胺及甲醛進(jìn)行麥尼烯反應(yīng)，N-甲基苯胺和甲醛縮合形成麥尼烯堿，形成6位中間體2。反應(yīng)完成后滴加鹽酸水解，離心水洗干燥得到中間體2。麥尼烯堿在鹽酸作用下形成麥尼烯鹽，通過離心水洗去除。
根據(jù)亞硝胺雜質(zhì)生成的原理：亞硝酸鈉或其它亞硝基化合物，胺類化合物在強(qiáng)酸下條件形成。本步反應(yīng)中沒有使用任何亞硝基化合物，僅用到了N-甲基苯胺。即使使用鹽酸具備強(qiáng)酸性條件，因缺少亞硝基化合物也不會(huì)有亞硝胺雜質(zhì)形成。假設(shè)本步反應(yīng)中N-甲基苯胺與飲用水中極微量的亞硝基在本步強(qiáng)酸條件下生成N-甲基苯基亞硝基雜質(zhì)（NMPA），也是極低量的存在，可考慮對(duì)成品進(jìn)行測(cè)試進(jìn)一步證實(shí)。N-甲基苯胺以鹽的方式溶解于大量的水離心除去，同時(shí)后續(xù)在離心機(jī)中一小時(shí)的沖水可進(jìn)一步將之除去。經(jīng)對(duì)成品采用驗(yàn)證后的方法測(cè)試，連續(xù)5批原料藥A中含N-甲基苯胺量低于1ppm，可證實(shí)其基本被完全消除。
中間體3工序
以中間體2為原料，二甲基甲酰胺為溶劑，化合物B做反應(yīng)試劑，鈀炭做催化劑進(jìn)行反應(yīng)，將6位中間體2催化加氫反應(yīng)生成6位的甲基。氫化反應(yīng)完成后過濾鈀炭，滴加入鹽酸將副產(chǎn)物6β-原料藥A進(jìn)行轉(zhuǎn)位生成原料藥A。轉(zhuǎn)位完成后加入碳酸氫鈉溶液中和鹽酸，離心水洗干燥得到中間體3。
根據(jù)亞硝胺雜質(zhì)生成的原理：亞硝酸鈉或其它亞硝基化合物，胺類化合物在強(qiáng)酸下條件形成。本步反應(yīng)中沒有使用任何亞硝基化合物，使用了N,N-二甲基甲酰胺作溶劑，使用鹽酸具備強(qiáng)酸條件，但因缺少亞硝基化合物不會(huì)有亞硝胺雜質(zhì)形成?？紤]到工藝中反應(yīng)溫度98℃左右二甲基甲酰胺可能降解為二甲胺，假設(shè)鹽酸和碳酸氫鈉溶液中水含有的微量亞硝基與二甲胺在強(qiáng)酸性條件下反應(yīng)生產(chǎn)N-二甲基硝基化合物雜質(zhì)（NDMA）。但這是極低量的存在，可考慮對(duì)成品進(jìn)行測(cè)試進(jìn)一步證實(shí)。N,N-二甲基甲酰胺與水、甲醇、二氯甲烷等溶劑混溶，因此其很容易在后續(xù)工藝步驟的溶解、水洗、離心、干燥等工序被去除。經(jīng)對(duì)成品采用驗(yàn)證后的方法測(cè)試，連續(xù)5批原料藥A中N,N-二甲基甲酰胺含量低于檢測(cè)限（2.6ppm），可證實(shí)其基本被完全消除。
中間體4工序
以中間體3為原料，無水乙醇為反應(yīng)溶劑，原甲酸三乙酯為反應(yīng)試劑，對(duì)甲苯磺酸作催化劑，進(jìn)行醚化反應(yīng)。醚化反應(yīng)完成后，加吡啶中和終止反應(yīng)，離心水洗得到中間體4，主要目的中間體3醚化后通過離心去除特定雜質(zhì)。
根據(jù)亞硝胺雜質(zhì)生成的原理：亞硝酸鈉或其它亞硝基化合物，胺類化合物在強(qiáng)酸下條件形成。本步反應(yīng)中沒有使用任何亞硝基化合物，用到了吡啶為胺類化合物，但沒有水和強(qiáng)酸性條件下，因此不會(huì)有亞硝胺雜質(zhì)形成。吡啶用量少，且與水、甲醇、二氯甲烷等溶劑混溶，其很容易在后續(xù)工藝步驟的溶解、水洗、離心、干燥等工序被去除。經(jīng)對(duì)成品采用驗(yàn)證后的方法測(cè)試，連續(xù)5批原料藥A中吡啶含量低于檢測(cè)限（1.6ppm），可證實(shí)其基本被完全消除。
中間體5工序
以中間體4為原料，二甲基甲酰胺為溶劑，加鹽酸水解3位乙?；?，反應(yīng)完成后加入碳酸氫鈉水溶液水析中和鹽酸，離心水洗干燥得到中間體5。
根據(jù)亞硝胺雜質(zhì)生成的原理：亞硝酸鈉或其它亞硝基化合物，胺類化合物在強(qiáng)酸下條件形成。本步反應(yīng)中沒有使用任何亞硝基化合物，使用了N,N-二甲基甲酰胺作溶劑，使用鹽酸具備強(qiáng)酸條件，但因缺少亞硝基化合物不會(huì)有亞硝胺雜質(zhì)形成?？紤]到工藝中反應(yīng)溫度98℃左右二甲基甲酰胺可能降解為二甲胺，假設(shè)鹽酸和碳酸氫鈉溶液中水含有的微量亞硝基與二甲胺以及上步反應(yīng)殘留下來的極微量吡啶，在強(qiáng)酸性條件下反應(yīng)生產(chǎn)N-二甲基亞硝胺雜質(zhì)（NDMA）。但這是極低的量，可考慮對(duì)成品進(jìn)行測(cè)試進(jìn)一步證實(shí)。N,N-二甲基甲酰胺與水、甲醇、二氯甲烷等溶劑混溶，其很容易在后續(xù)工藝步驟的溶解、水洗、離心、干燥等工序被去除。經(jīng)對(duì)成品采用驗(yàn)證后的方法測(cè)試，連續(xù)5批原料藥A中N,N-二甲基甲酰胺含量低于檢測(cè)限（2.6ppm），可證實(shí)其基本被完全消除。
XXXX粗品制備工序
中間體5為原料，二氯甲烷和甲醇混合溶劑溶解，加活性炭脫色，回流后過濾活性炭，常壓濃縮，留甲醇母液，離心得濕料。濕料用N,N-二甲基甲酰胺溶解，冷卻重結(jié)晶，淋洗、干燥得到粗品。
根據(jù)亞硝胺雜質(zhì)生成的原理：亞硝酸鈉或其它亞硝基化合物，胺類化合物在強(qiáng)酸下條件形成。本步反應(yīng)中沒有使用任何亞硝基化合物，用到了N,N-二甲基甲酰胺為胺類化合物，但沒有水和強(qiáng)酸性條件下，因此不會(huì)有亞硝胺雜質(zhì)形成。N,N-二甲基甲酰胺與甲醇、二氯甲烷等溶劑混溶，其很容易在后續(xù)工藝步驟的溶解、離心、干燥等工序被去除。經(jīng)對(duì)成品采用驗(yàn)證后的方法測(cè)試，連續(xù)5批原料藥A中N,N-二甲基甲酰胺含量低于檢測(cè)限（2.6ppm），可證實(shí)其基本被完全消除。
XX精制品工序
XX粗品為原料，二氯甲烷和甲醇混合溶劑溶解物料，活性炭脫色。回流后過濾活性炭，常壓濃縮，留甲醇母液，離心、干燥得到原料藥A。
根據(jù)亞硝胺雜質(zhì)生成的原理：亞硝酸鈉或其它亞硝基化合物，胺類化合物在強(qiáng)酸下條件形成。本步反應(yīng)中沒有使用任何亞硝基化合物和胺類化合物，也沒有水和強(qiáng)酸性條件下，因此不會(huì)有亞硝胺雜質(zhì)形成。
1.4.2 工藝中回收溶劑的討論
本公司原料藥A高版本XXXX產(chǎn)品不涉及任何回收溶劑的使用，因此不會(huì)因?yàn)槿軇┗厥找雭喯醢冯s質(zhì)的風(fēng)險(xiǎn)。
需要說明的是，原料藥A低版本1212涉及回收溶劑的使用，如：N,N-二甲基甲酰胺，回收甲醇-二氯甲烷混合溶劑等。但本公司低版本或化工級(jí)別的產(chǎn)品回收溶劑使用均有明確的工藝規(guī)程支持，同時(shí)回收溶劑的回收設(shè)備是固定的，不存在委托第三方或溶劑使用后返還供應(yīng)商代為回收的情況。本公司回收溶劑的回收工藝、質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)、測(cè)試方法等均是書面批準(zhǔn)的。回收溶劑使用必須符合兩個(gè)條件，一是回收溶劑只用在同一步驟，即在哪步使用回收后仍用于該步驟；二是精制步驟回收溶劑可用于粗品步驟，反之則不行。本公司高版本和低版本產(chǎn)品在同一生產(chǎn)線上間隔生產(chǎn)，更換版本生產(chǎn)前會(huì)使用經(jīng)清潔驗(yàn)證有效的設(shè)備清潔規(guī)程徹底的進(jìn)行二次清潔，設(shè)備在清潔烘干后使用。同時(shí)本公司高版本產(chǎn)品可以降級(jí)為低版本產(chǎn)品銷售，但低版本產(chǎn)品不得作為或混入高版本作為高版本產(chǎn)品使用銷售。因此，低版本產(chǎn)品生產(chǎn)使用回收溶劑，不會(huì)給高版本產(chǎn)品引入亞硝胺雜質(zhì)風(fēng)險(xiǎn)。
1.4.3 生產(chǎn)和工藝管理的討論
本公司原料藥A生產(chǎn)工藝經(jīng)過持續(xù)工藝驗(yàn)證證明是具有穩(wěn)定性和一致性的，能生產(chǎn)出安全、有效、穩(wěn)定均一的產(chǎn)品。整個(gè)生產(chǎn)過程是有計(jì)劃的，嚴(yán)格按照各步驟詳細(xì)的生產(chǎn)操作規(guī)程進(jìn)行的且有生產(chǎn)記錄支持的。生產(chǎn)過程中車間管理人員和QA會(huì)檢查復(fù)核，若一旦發(fā)生偏差，操作人員會(huì)上報(bào)管理人員和QA并按照偏差處理程序調(diào)查。因此因未按照工藝規(guī)程進(jìn)行或操作失誤導(dǎo)致亞硝胺雜質(zhì)引入原料藥A的風(fēng)險(xiǎn)極低。
1.4.4 人員
原料藥A生產(chǎn)人員均經(jīng)過人員衛(wèi)生、工作服管理或人員進(jìn)出潔凈區(qū)管理等培訓(xùn)并考核合格。合成區(qū)人員操作時(shí)穿工作服戴頭盔和手套，潔凈區(qū)人員穿潔凈區(qū)工作服，戴口罩和手套等。生產(chǎn)人員不得有外傷也不得有傳染病，整個(gè)生產(chǎn)過程中人員與物料無直接接觸。因此原料藥A涉及的人員帶來的亞硝胺雜質(zhì)風(fēng)險(xiǎn)也極低。
2 風(fēng)險(xiǎn)分析
評(píng)估團(tuán)隊(duì)根據(jù)魚骨圖評(píng)估所有因素后，認(rèn)為亞硝胺雜質(zhì)帶入原料藥A成品的可能性極低。但考慮到飲用水和其它物料中不可避免的含有微量的亞硝基化合物，生產(chǎn)過程也用到了N-甲基苯胺、N,N-二甲基甲酰胺和吡啶等胺基化合物，同時(shí)有強(qiáng)酸條件，因此需要對(duì)原料藥A中N-亞硝基二甲胺（NDMA）、N-亞硝基二乙胺（NDEA）、N-亞硝基甲基苯胺（NMPA）含量進(jìn)行測(cè)試，以證實(shí)上述分析是否合理。
2021年4月，化驗(yàn)室對(duì)原料藥A中上述亞硝胺雜質(zhì)進(jìn)行了測(cè)試。測(cè)試結(jié)果顯示5批原料藥A（批號(hào)分別為2009001，2009002，2009003，2009004，2009005）中N-亞硝基二甲胺（NDMA）、N-亞硝基二乙胺（NDEA）、N-亞硝基甲基苯胺（NMPA）中的亞硝胺雜質(zhì)均為未檢出。而原料藥A中N-亞硝基二甲胺（NDMA）、N-亞硝基二乙胺（NDEA）、N-亞硝基甲基苯胺（NMPA）測(cè)試方法的檢測(cè)限分別為0.019ppm，0.0053ppm，0.0069ppm。結(jié)合原料藥A制劑最大日劑量為800mg，原料藥A中未檢出完全符合指南推薦的上述亞硝胺雜質(zhì)含量最小限值為0.03ppm，不超過26.5 ng/天的限度。樣品測(cè)試前進(jìn)行了方法的專屬性、線性和準(zhǔn)確度等項(xiàng)目的考察，結(jié)果均為符合要求。
注：若原料藥檢測(cè)后發(fā)現(xiàn)有一種或幾種亞硝胺雜質(zhì)，切記應(yīng)按照指南執(zhí)行一系列的活動(dòng)，如:計(jì)算總限度，擴(kuò)大檢測(cè)批次范圍，查找根本原因，采用降低亞硝胺雜質(zhì)措施，放行測(cè)試，通報(bào)官方等等。
3 風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估
基于風(fēng)險(xiǎn)識(shí)別和分析的情況以及連續(xù)5批原料藥A中N-亞硝基二甲胺（NDMA）、N-亞硝基二乙胺（NDEA）、N-亞硝基甲基苯胺（NMPA）含量測(cè)試結(jié)果，同時(shí)考慮本公司GMP體系運(yùn)行情況，我們?cè)u(píng)估原料藥A產(chǎn)品中亞硝胺雜質(zhì)的風(fēng)險(xiǎn)程度極低。
4 風(fēng)險(xiǎn)控制
基于風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估情況，亞硝胺雜質(zhì)不加入到原料藥A的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中，即不包括在放行測(cè)試中，但需要定期監(jiān)測(cè)。在沒有發(fā)生可能影響亞硝胺雜質(zhì)的變更情況下，本公司按照每三年測(cè)試一次，每次至少三個(gè)連續(xù)批次的測(cè)試頻率（優(yōu)先考慮每三年一次的工藝再驗(yàn)證批次），測(cè)試項(xiàng)目為N-亞硝基二甲胺（NDMA）、N-亞硝基二乙胺（NDEA）、N-亞硝基甲基苯胺（NMPA）三種雜質(zhì)含量。
5 風(fēng)險(xiǎn)審核
原料藥A生產(chǎn)全過程發(fā)生以下情況時(shí)，需要重新進(jìn)行評(píng)估：
原料藥A生產(chǎn)工藝和或主要物料發(fā)生顯著變更;
生產(chǎn)關(guān)鍵設(shè)備和或與物料直接接觸的管道或儲(chǔ)罐，備品備件發(fā)生變化時(shí);
發(fā)現(xiàn)新的亞硝胺雜質(zhì)出現(xiàn)的根本原因或條件時(shí)；
GMP體系發(fā)生重大變化時(shí)；
原料藥A中測(cè)試出亞硝胺雜質(zhì)時(shí)，等等.
6 風(fēng)險(xiǎn)溝通
我們承諾與客戶分享原料藥A亞硝胺雜質(zhì)的評(píng)估情況。必要時(shí)，也將在產(chǎn)品注冊(cè)時(shí)或產(chǎn)品批準(zhǔn)后向相關(guān)法規(guī)官方匯報(bào)相關(guān)的評(píng)估信息。
編者：EDQM和FDA指南提供了各種條件和因素描述可供參詳。因本人水平有限，多有不當(dāng)之處提請(qǐng)讀者指正和包涵。
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