細(xì)菌內(nèi)毒素是是革蘭氏陰性菌的細(xì)胞壁成分，當(dāng)細(xì)胞死亡或自溶后便會(huì)釋放出內(nèi)毒素，如果被大量注射進(jìn)入血液時(shí)可引起發(fā)熱、微循環(huán)障礙、內(nèi)毒素休克及播散性血管內(nèi)凝血等反應(yīng)——又叫“熱原反應(yīng)”。因此，在注射劑中需嚴(yán)格控制細(xì)菌內(nèi)毒素。
二 如何制定化學(xué)藥品注射劑細(xì)菌內(nèi)毒素限度
化學(xué)藥品注射劑細(xì)菌內(nèi)毒素限度制定思路：
①根據(jù)《中國(guó)藥典2020年版》1143 細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法中公式L=K/M計(jì)算得出限度，其中L為供試品的細(xì)菌內(nèi)毒素限值，K為人每千克體重每小時(shí)最大可接受的內(nèi)毒素劑量，M為人用每千克體重每小時(shí)的最大供試品劑量；
②結(jié)合《中國(guó)藥典2020年版》9251 細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法應(yīng)用指導(dǎo)原則要求；
③查找各國(guó)藥典（如美國(guó)藥典、英國(guó)藥典、日本藥典）以及進(jìn)口注冊(cè)標(biāo)準(zhǔn)收載的該產(chǎn)品細(xì)菌內(nèi)毒素要求。
綜上，選擇最嚴(yán)格的細(xì)菌內(nèi)毒素要求作為本品的限度值。
三 化學(xué)藥品注射劑細(xì)菌內(nèi)毒素帶入途徑
（1）原輔料本身的細(xì)菌內(nèi)毒素
在注射劑中細(xì)菌內(nèi)毒素貢獻(xiàn)占比最大，需要根據(jù)產(chǎn)品的細(xì)菌內(nèi)毒素來(lái)計(jì)算控制原輔料的細(xì)菌內(nèi)毒素。
（2）直接接觸產(chǎn)品的內(nèi)包材
直接接觸產(chǎn)品內(nèi)包材如西林瓶、膠塞、安瓿等，在生產(chǎn)使用時(shí)會(huì)要求除去細(xì)菌內(nèi)毒素并進(jìn)行驗(yàn)證，驗(yàn)證標(biāo)準(zhǔn)是內(nèi)毒素能夠降低3個(gè)log值。在產(chǎn)品細(xì)菌內(nèi)毒素貢獻(xiàn)占比較小。
（3）從容器、用具、管道和裝置等帶入
按照GMP規(guī)定對(duì)生產(chǎn)時(shí)所有接觸藥品的工器具等需按照要求進(jìn)行清洗，并用適宜的方法除去細(xì)菌內(nèi)毒素和滅菌并進(jìn)行清洗驗(yàn)證。在產(chǎn)品細(xì)菌內(nèi)毒素貢獻(xiàn)占比較小。
（4）保存時(shí)間
藥液在配制生產(chǎn)中有可能微生物會(huì)增長(zhǎng)進(jìn)而引起細(xì)菌內(nèi)毒素增加，因此需要對(duì)生產(chǎn)時(shí)限進(jìn)行考察并進(jìn)行驗(yàn)證，還有藥品在穩(wěn)定性放置期間也有可能使細(xì)菌內(nèi)毒素增加，也需進(jìn)行考察。
綜上，在藥學(xué)研發(fā)過(guò)程中我們需要重點(diǎn)控制原輔料帶入的細(xì)菌內(nèi)毒素，其他帶入途徑可按照現(xiàn)行GMP要求在生產(chǎn)中進(jìn)行控制，原輔料帶入的細(xì)菌內(nèi)毒素越低，成品的細(xì)菌內(nèi)毒素就越低。
四 對(duì)于化學(xué)藥品注射劑細(xì)菌內(nèi)毒素限度較高的產(chǎn)品如何控制
對(duì)于注射劑細(xì)菌內(nèi)毒素限度較高的產(chǎn)品來(lái)說(shuō)，我們采取產(chǎn)品組分的貢獻(xiàn)結(jié)合生產(chǎn)線的貢獻(xiàn)來(lái)綜合評(píng)估控制策略，其中原輔料貢獻(xiàn)占比最大，我們會(huì)通過(guò)產(chǎn)品的細(xì)菌內(nèi)毒素計(jì)算控制原輔料的細(xì)菌內(nèi)毒素。
如假設(shè)某注射劑產(chǎn)品規(guī)格為4ml:10mg，制定的產(chǎn)品細(xì)菌內(nèi)毒素是80EU/ml，其單支處方組成如下：
對(duì)于注射用水可以按照中國(guó)藥典要求進(jìn)行細(xì)菌內(nèi)毒素為0.25EU/ml，鹽酸和氫氧化鈉分別為強(qiáng)酸和強(qiáng)堿會(huì)破壞細(xì)菌內(nèi)毒素，不需進(jìn)行控制，氯化鈉和抗氧劑細(xì)菌內(nèi)毒素可結(jié)合輔料供應(yīng)商實(shí)際情況進(jìn)行制定，可控制為5.0EU/g。對(duì)于原料藥來(lái)說(shuō)，可用產(chǎn)品的細(xì)菌內(nèi)毒素減去輔料、內(nèi)包材、工器具貢獻(xiàn)的細(xì)菌內(nèi)毒素得到，因此，一般會(huì)控制原輔料的細(xì)菌內(nèi)毒素貢獻(xiàn)值低于產(chǎn)品的細(xì)菌內(nèi)毒素，如本品最大可控制原料藥細(xì)菌內(nèi)毒素為31EU/mg，可有效降低制劑中細(xì)菌內(nèi)毒素超標(biāo)的風(fēng)險(xiǎn)，各組分的細(xì)菌內(nèi)毒素控制水平如下表：
綜上，控制原輔料帶入的細(xì)菌內(nèi)毒素進(jìn)而控制成品的細(xì)菌內(nèi)毒素水平。
五 對(duì)于注射劑細(xì)菌內(nèi)毒素限度較低的產(chǎn)品如何進(jìn)行控制
對(duì)于注射劑細(xì)菌內(nèi)毒素限度較低的產(chǎn)品我們?nèi)绻凑丈鲜龇椒ㄈビ?jì)算和控制原輔料的細(xì)菌內(nèi)毒素，便會(huì)發(fā)現(xiàn)得到的原輔料細(xì)菌內(nèi)毒素限度非常低，按照常規(guī)的生產(chǎn)條件，根本無(wú)法有效的控制住每批的原輔料細(xì)菌內(nèi)毒素，那這時(shí)我們就需要通過(guò)其他手段去控制注射劑細(xì)菌內(nèi)毒素。
之前制劑生產(chǎn)廠家會(huì)在生產(chǎn)過(guò)程中加入活性炭來(lái)去除細(xì)菌內(nèi)毒素，但由于活性炭有可能會(huì)增加引入新的雜質(zhì)和不溶性微粒的風(fēng)險(xiǎn)等，影響注射劑產(chǎn)品質(zhì)量。國(guó)家藥監(jiān)局藥審中心在發(fā)布的《化學(xué)藥品注射劑仿制藥質(zhì)量和療效一致性評(píng)價(jià)技術(shù)要求》中提到注射劑生產(chǎn)中建議不使用活性炭。
現(xiàn)目前在注射劑中常用超濾進(jìn)行去除細(xì)菌內(nèi)毒素。超濾是切向過(guò)濾，與常規(guī)的垂直過(guò)濾不同，液體切向流過(guò)膜表面時(shí)，流體產(chǎn)生的跨膜壓差使部分藥液壓過(guò)濾膜，截留部分則在系統(tǒng)內(nèi)循環(huán)回流，且切向過(guò)濾對(duì)膜表面一直進(jìn)行沖刷，不易堵塞濾膜。超濾原理就是依靠分子量不同來(lái)去除細(xì)菌內(nèi)毒素，化藥原輔料常規(guī)分子量在幾百到幾千道爾頓，而細(xì)菌內(nèi)毒素分子量通常為幾十萬(wàn)道爾頓，分子量相差甚大，由此可有效的去除細(xì)菌內(nèi)毒素。
超濾可以加在原輔料生產(chǎn)工序中，也可以在制劑端加超濾工序，需要根據(jù)實(shí)際情況選擇。比如加在制劑端，可以根據(jù)各國(guó)藥典要求結(jié)合生產(chǎn)廠家實(shí)際情況，設(shè)置原輔料的細(xì)菌內(nèi)毒素要求，再根據(jù)注射劑產(chǎn)品細(xì)菌內(nèi)毒素篩選合適的超濾系統(tǒng)。超濾系統(tǒng)類型有中空纖維膜柱和平板膜包等，進(jìn)口的生產(chǎn)廠家有頗爾，賽托利斯等，國(guó)產(chǎn)的生產(chǎn)廠家有杭州科百特等。
六 小結(jié)
細(xì)菌內(nèi)毒素是注射劑中重要的關(guān)鍵質(zhì)量屬性，最有效的就是控制原輔料本身帶入的細(xì)菌內(nèi)毒素水平，但有時(shí)對(duì)原輔料細(xì)菌內(nèi)毒素要求太高，通過(guò)常規(guī)生產(chǎn)手段不能達(dá)到，這時(shí)，最常見(jiàn)的就是在原輔料或者制劑生產(chǎn)過(guò)程中添加超濾工序，如果超濾加在制劑端，還需要做相容性研究，比如化學(xué)兼容性、提取實(shí)驗(yàn)、重復(fù)使用研究等。對(duì)于細(xì)菌內(nèi)毒素，還需特別注意其不能通過(guò)濕熱滅菌去除。若有不妥之處，還請(qǐng)指教！
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