分離分析的一個基本要求是能夠驗證分離物質(zhì)的純度，也就是說，確保沒有共洗脫的雜質(zhì)對目標(biāo)峰響應(yīng)值得干擾。峰純度的確認(rèn)應(yīng)在定量之前完成。忽視峰純度確認(rèn)意味著在質(zhì)量控制中，一個雜質(zhì)隱藏在目標(biāo)峰下可以造成結(jié)果失真，或者在研發(fā)過程中重要信息可能丟失。在分析方法驗證項目（專屬性、線性、定量限、檢測限、精密度、耐用性）中峰純度也是需要同時檢查的。
接下來我們來看色譜分析兩大儀器品牌不同峰純度的確定方法吧。
Waters
整個峰的純度由純度角和閾值角決定。
峰純度：純度測試將校正峰頂點處的光譜波形和整個峰的光譜波形，并進行比較。如果峰中間的光譜形狀不同，首先應(yīng)考慮可能與峰光譜波形不同的其它組分與之共洗脫。
純度角：光譜一致性的一種衡量方法，即將積分峰上每個數(shù)據(jù)點的光譜與峰頂點光譜進行對照，計算出峰各處的光譜與峰頂點光譜之間的夾角的加權(quán)平均值。整個峰的純度可以通過該值確定。純度角的范圍是從0 ~90度。值小（特別在小于閾值時）表明光譜均勻。值大表明不均勻程度較大
注意事項
1、如果觀察到高純度標(biāo)準(zhǔn)品的純度不佳，可能是由以下幾個主要原因造成的：
A濃度過高
即使只在部分波長下的吸光度超過1AU，也會破壞吸光度線性，導(dǎo)致光譜出現(xiàn)畸變，得到較差的純度。請降低濃度，確保最大吸收波長處的吸光度不超過1AU，然后再次進行測量。
A 流動相的背景吸光度高
如果在低波長下流動相的背景吸光度比較大，則該波長下吸光度的線性范圍較小，測得的光譜會發(fā)生畸變。在這種情況下，請在處理方法的“純度”選項卡上縮小要計算的波長范圍，然后重新處理?；蛘弑荛_背景吸光度較大的波長，然后重新測量。
2、 光譜差異顯著的組分應(yīng)同時洗脫。
檢測不到共洗脫的主要原因是光譜相似、含量極少的組分共洗脫，但即使共洗脫組分的光譜差異很大，也可能無法被檢測到。那就是共洗脫組分均勻地與主要組分峰重疊的情況。在這種情況下，以相同比率共洗脫的組分在峰基線和峰頂點處與主要組分重疊，而峰基線和峰頂點是判定峰的標(biāo)準(zhǔn)。簡而言之，各譜圖的波形與兩個波形的總和相同，且比率相同。純度測試無法檢測到這種情況。
Agilent
1、將不同波長下采集的色譜圖進行對比去尋找不一致的色譜峰。良好的重疊，其中峰形、保留、保留時間匹配，則表示純峰；而較差的重疊表示不純峰，如圖 1 所示。
圖1 通過不同波長下峰信號對比確定峰純度示意圖
2、除了疊加信號外，還應(yīng)計算它們的比率，并且繪制比率圖。生成的比率圖是峰值的敏感指標(biāo)純度（圖2）。任何理想矩形的失真比例圖的形式表示雜質(zhì)。
圖2 由比率圖確定峰純度示意圖
3、安捷倫的Chemstation軟件可以通過計算相似因子來確定峰純度情況。以下是相似因子的計算公式和不同相似因子色譜峰的示意圖（圖3）
其中：和分別是在相同波長下采集的第一個和第二個譜圖的吸收值；
和分別是第一個和第二個譜圖的吸收均值；
N是采樣點個數(shù)。
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